专利名称：四连蛋白-载脂蛋白a-i、含有它的脂质颗粒及它的用途的制作方法
技术领域：
本发明属于脂蛋白和脂质颗粒领域。在本文中报道了包含载脂蛋白、磷脂酰胆碱和脂质的脂质颗粒、以及四连蛋白-载脂蛋白A-1及其用途。
背景技术：
血浆脂蛋白是在血液中进行脂质运输和代谢的可溶性蛋白-脂质复合物。基于它们的密度、大小、化学组成和功能，将脂蛋白分成几大类。在它们中，高密度脂蛋白(HDL)颗粒(可替换地表示为高密度脂质颗粒)由几个亚类组成，所述亚类的平均分子量在ISOkDa至360kDa之间变化。它们的平均脂质和蛋白含量各自为50重量％。磷脂酰胆碱(PC)占总脂质的38%，其次是胆固醇酯和少量其它的极性和非极性脂质，包括游离的胆固醇。主要蛋白组分是载脂蛋白A-1 (Apo A-1)，其占人HDL中的总蛋白重量的约60%。HDL颗粒和它的主要多肽载脂蛋白A-1参与胆固醇逆转运(RCT)。其中，载脂蛋白A-1增加胆固醇从细胞(例如从血管壁细胞)的流出、脂质的结合和卵磷脂胆固醇-乙酰基-转移酶的活化，并由此增加肝脏通过血浆流对胆固醇的消除。这是一个涉及细胞膜蛋白ATP-结合盒-转运蛋白-A-1 (ABCA-1)的主动转运过程。在上个世纪七十年代晚期和八十年代早期，已经鉴别出载脂蛋白A-1和基于载脂蛋白的治疗剂(例如重构的HDL颗粒)。就含有载脂蛋白A-1-Milano的脂质颗粒而言，可以展示出临床证据(是指动脉硬化患者中显著的斑块减少)。根据载脂蛋白A-1分子的一种天然存在的突变体，设计出载脂蛋白Α-Ι-Milano，即野生型载脂蛋白A-1的一种二聚体形式。通过用半胱氨酸替代氨基酸残基173 (精氨酸)从而允许形成二硫键，实现二聚体形成。

在WO 2009/131704中报道了适用于螯合胆固醇和其它分子的纳米结构，所述纳米结构包含含有无机材料的核心。在WO 2006/125304中报道了用于治疗或预防冠状动脉疾病的药物组合物。在US 2002/0142953中报道了编码与脂质代谢和心血管疾病有关的载脂蛋白的组合物。在W02005/084642中报道了脱辅蛋白-共螯合物(cochelate)组合物。在W02009/036460中报道了修饰的人载脂蛋白A-1多肽及其用途。在WO 2008/017906中报道了人载脂蛋白A-1蛋白突变蛋白的二聚体和/或寡聚体形式的植物生产。在WO2007/137400中报道了用于治疗瓣膜狭窄的方法和化合物。在WO 2006/100567中报道了带电荷的脂蛋白复合物和它们的用途。在US 2002/0156007中报道了载脂蛋白类似物。在US 2010/0028995中报道了四连蛋白三聚化多妝。Graversen, J.H.,等人在 J.Cardiovascular Pharmacol.(51 (2008) 170-177)中报道称，载脂蛋白A-1的三聚化会延迟血浆清除并保持抗-动脉粥样硬化性质。Sirtori, C.R.,等人(Curr.Med.Chem.1mmunol.Endocrine Metabol.Agents5 (2005) 321-333)报道了高密度脂蛋白施用，即用于治疗心血管疾病的一种新的治疗方式。在WO 03/097696中报道了用于治疗缺血性再灌注的方法和组合物。在WO2009/097587中报道了纳米级结合的双层分子、使用方法和生产。在WO 2007/098122中报道了用于治疗黄斑变性和有关的眼病症的方法。在WO 02/38609中报道了载脂蛋白类似物。在WO 2005/041866中报道了药物制剂。报道了用于治疗和预防冠状动脉综合征的方法和给药方案。在WO 99/16409中报道了基因疗法，供给载脂蛋白A-1激动剂的方法，和它们用于治疗血脂异常(dislipidemic)障碍的用途。在WO 2008/106660中报道了分离的磷脂-蛋白颗粒。在WO 2010/083611中报道了使用载脂蛋白(APO A-1)模拟肽/磷脂复合物预防和治疗舒张期功能障碍的方法。在W02008/156873中，报道了 APO A-1肽模拟物。在WO 2008/094905中报道了包囊化的HDL模拟肽。在WO 98/56906中报道了三聚化模块。

发明内容
作为一个方面，本文报道了一种四连蛋白-载脂蛋白A-1，其具有改善的生产性质，特别是在培养过程中更少的副产物形成和改善的下游加工性质。作为一个方面，本文还报道了一种脂质颗粒，其包含载脂蛋白、磷脂酰胆碱和其它脂质，诸如磷脂、溶血磷脂、半乳糖脑苷脂、神经节苷脂、脑苷脂、甘油酯、脂肪酸、甘油三酯或类固醇脂质、胆固醇、胆固醇酯、或其类似物或衍生物。在一个实施方案中，所述脂质颗粒包含仅一类载脂蛋白。 在一个实施方案中，所述脂质颗粒由一种载脂蛋白、磷脂酰胆碱、其它脂质和洗涤剂组成。在一个实施方案中，所述其它脂质是磷脂酰胆碱，其中两种磷脂酰胆碱的差别在于一个或两个被酯化至磷脂酰胆碱的磷酸甘油主链上的羧酸部分或羧酸部分衍生物。
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在另一个实施方案中，所述载脂蛋白是人载脂蛋白A，在另一个实施方案中，所述载脂蛋白是与多聚化结构域缀合的人载脂蛋白，在另一个实施方案中，所述载脂蛋白是四连蛋白-载脂蛋白A-1。在一个实施方案中，所述载脂蛋白选自具有选自SEQ ID NO:0U02、06、66和67的氨基酸序列的载脂蛋白，或是与所述选择的序列具有至少70%序列同一性的它们的变体。在一个实施方案中，所述脂质颗粒包含a)载脂蛋白，b)磷脂酰胆碱，和c)其它脂质，其中当所述脂质是磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰丝氨酸、鞘氨醇1-磷酸、胆酸盐或二肉豆蘧酰基磷脂酰甘油时，所述载脂蛋白是四连蛋白-载脂蛋白A-1，和/或其中当所述脂质是小烷基链磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、鞘磷脂、鞘脂、神经节苷脂、脑苷脂、溶血卵磷脂、脑磷脂、心磷脂、双十六烷基磷酸(dicetylphosphate)或胆固醇时,所述载脂蛋白不是载脂蛋白A_I Milano。在另一个实施方案中，所述脂质颗粒包含a)载脂蛋白，b)磷脂酰胆碱，和c)其它脂质，
其中当所述脂质是磷脂酰乙醇胺、鞘氨醇1-磷酸或胆酸盐时，所述载脂蛋白是四连蛋白-载脂蛋白A-1，和/或其中当所述脂质是小烷基链磷脂、鞘磷脂、鞘脂、神经节苷脂、脑苷脂、溶血卵磷月旨、脑磷脂、心磷脂、双十六烷基磷酸或胆固醇时，所述载脂蛋白不是载脂蛋白A-1 Milano。在一个实施方案中，所述其它脂质是除了磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酸以外的任意脂质。在一个实施方案中，所述其它脂质是第二种磷脂酰胆碱。在一个实施方案中，所述磷脂酰胆碱是棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)，且所述第二种磷脂酰胆碱是二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)。在一个实施方案中，所述磷脂酰胆碱与所述脂质的摩尔比是在99:1至1: 99之间。在另一个实施方案中，所述磷脂酰胆碱与所述脂质的摩尔比是在99:1至10: 90之间。在另一个实施方案中，所述磷脂酰胆碱与所述脂质的摩尔比是在99:1至25: 75之间。在另一个实施方案中，所述载脂蛋白与所述磷脂酰胆碱和所述脂质非共价地结合。在一个实施方案中，POPC与DPPC的摩尔比是在99: I至1: 99之间。在另一个实施方案中，POPC与DPPC的摩尔比是在99: I至10: 90之间。在另一个实施方案中，POPC与DPPC的摩尔比是在99: I至25: 75之间。在另一个实施方案中，所述载脂蛋白与POPC和DPPC非共价地结合。在一个实施方案中，所述载脂蛋白是包含3个载脂蛋白单体的多聚体。在另一个实施方案中，所述多聚体包含3个四连蛋白-载脂蛋白A-1单体。在一个实施方案中，所述脂质颗粒包含小于0.75重量％的洗涤剂。在一个实施方案中，所述洗涤剂选自基于糖的洗涤剂、基于聚亚氧烷基的洗涤剂、基于胆汁盐的洗涤剂、合成的洗涤剂和它们的组合。在另一个实施方案中，所述洗涤剂是胆酸。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂酰胆碱分子和脂质分子的总数目是在40-120之间，在一个实施方案中，是在50-110之间，在一个实施方案中，是在54-102之间，在一个实施方案中，是在60-90之间，在一个实施方案中，是在65-70之间。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂酰胆碱分子和脂质分子的总数目是在60-90之间。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂酰胆碱分子和脂质分子的总数目是在60-88之间。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂酰胆碱分子和脂质分子的总数目是在62-80之间。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂酰胆碱分子和脂质分子的总数目是在64-70之间。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂酰胆碱分子和脂质分子的总数目是约66。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的POPC和DPPC分子的总数目是在40-115之间，在另一个实施方案中，是在50-110之间，在另一个实施方案中，是在54-102 之间。
在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的POPC和DPPC分子的总数目是在60-90之间。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的POPC和DPPC分子的总数目是在60-88之间。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的POPC和DPPC分子的总数目是在62-80之间。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的POPC和DPPC分子的总数目是在64-70之间。在一个实施方案中，脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的POPC和DPPC分子的总数目是约66。在一个实施方案中，所述脂质颗粒能够结合选自由以下组成的组的受体:cubilin, B类I型清除受体(SR-BI)、ATP-结合盒I (ABCA-1)、卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)、胆固醇酯转移蛋白(CETP)或磷脂转移蛋白(PLTP)。本文报道的另一个方面是一种药物组合物，其包含:本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白。本文报道的一个方面是，用作药物的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白。本文报道的一个方面是，本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白用于生产药物的用途。本文报道的一个方面是，本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白用于生产药物的用途，所述药物-用于具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防，或者-用于预防或治疗动脉粥样硬化，其中包含的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白的量足以在受试者中诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定(pacification),或者-用于诱导 胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于清除/溶解/稳定受试者血管中的粥样硬化斑块，或者用于使胆固醇从受试者的动脉壁重新分配至肝脏，或者-用于预防或治疗受试者的瓣膜狭窄，或者-用于增加受试者的HDL颗粒的数目，或者-用于启动受试者中的胆固醇逆转运，或者-用于除去内毒素，或者-用于预防脓毒性休克-用于治疗心绞痛，或者-用于治疗心肌梗死，或者-用于治疗不稳定型心绞痛，或者-用于治疗动脉狭窄,诸如外周动脉疾病(PAD)、颈动脉狭窄、脑动脉狭窄或冠状动脉狭窄，或者-用于治疗血管性痴呆，或者-用于治疗一过性黑朦。本文报道的一个方面是，本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白在生产药物中的用途。本文报道的一个方面是，用于生产药物的方法，所述药物-用于具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防，或者-用于预防或治疗动脉粥样硬化，其中包含的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白的量足以在受试者中诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于清除/溶解/稳定受试者血管中的粥样硬化斑块，或者用于使胆固醇从受试者的动脉壁重新分配至肝脏，或者-用于预防或治疗受试者的瓣膜狭窄，或者-用于增加受试者的HDL颗粒的数目，或者-用于启动受试者中的胆固醇逆转运，或者-用于除去内毒素，或者-用于预防脓毒性休克-用于治疗心绞痛，或者-用于治疗心肌梗死，或者-用于治疗不稳定型心绞痛，或者-用于治疗动脉狭窄，诸如外周动脉疾病(PAD)、颈动脉狭窄、脑动脉狭窄或冠状动脉狭窄，或者-用于治疗血管性痴呆，或者`-用于治疗一过性黑朦。本文报道的一个方面是一种方法，所述方法用于-具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防，或者-预防或治疗动脉粥样硬化，其中包含的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白的量足以在受试者中诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于清除/溶解/稳定受试者血管中的粥样硬化斑块，或者用于使胆固醇从受试者的动脉壁重新分配至肝脏，或者-用于预防或治疗受试者的瓣膜狭窄，或者-用于增加受试者的HDL颗粒的数目，或者
-用于启动受试者中的胆固醇逆转运，或者-用于除去内毒素，或者-用于预防脓毒性休克-用于治疗心绞痛，或者-用于治疗心肌梗死，或者-用于治疗不稳定型心绞痛，或者-用于治疗动脉狭窄，诸如外周动脉疾病(PAD)、颈动脉狭窄、脑动脉狭窄或冠状动脉狭窄，或者-用于治疗血管性痴呆，或者-用于治疗一过性黑朦。本文报道的一个方面是，用于治疗下述病症的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白:
-急性冠状动脉综合征,或者-动脉粥样硬化，或者-受试者血管中的粥样硬化斑块，或者-受试者的瓣膜狭窄，或者-脓毒性休克，或者-心绞痛，或者-心肌梗死，或者-不稳定型心绞痛，或者-动脉狭窄，或者-外周动脉疾病(PAD),或者-颈动脉狭窄，或者-脑动脉狭窄，或者-冠状动脉狭窄，或者-血管性痴呆，或者-一过性黑朦。本文报道的一个方面是，`用于下述用途的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白:-诱导胆固醇逆转运，或者-诱导斑块平定，或者-清除或溶解或稳定粥样硬化斑块，或者-使胆固醇从动脉壁重新分配至肝脏，或者-增加HDL颗粒的数目，或者-除去内毒素。本文报道的一个方面是，一种治疗个体的方法，所述个体具有急性冠状动脉综合征、或动脉粥样硬化、或在血管中的粥样硬化斑块、或瓣膜狭窄、或脓毒性休克、或心绞痛、或心肌梗死、或不稳定型心绞痛、或动脉狭窄、或外周动脉疾病(PAD)、或颈动脉狭窄、或脑动脉狭窄、或冠状动脉狭窄、或血管性痴呆、或一过性黑朦，所述方法包括:给所述个体施用有效量的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白。本文报道的一个方面是，一种在个体中诱导胆固醇逆转运、或诱导斑块平定、或清除或溶解或稳定粥样硬化斑块、或使胆固醇从动脉壁重新分配至肝脏、或增加HDL颗粒的数目、或除去内毒素的方法，所述方法包括:给所述个体施用有效量的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白，以诱导胆固醇逆转运、或诱导斑块平定、或清除或溶解或稳定粥样硬化斑块、或使胆固醇从动脉壁重新分配至肝脏、或增加HDL颗粒的数目、或除去内毒素。在一个实施方案中，所述非正常的脂质水平是在体液中。在另一个实施方案中，所述体液是全血或血清。在一个实施方案中，所述非正常的脂质水平是升高的胆固醇水平。在一个实施方案中，所述含有脂质的沉积物是在血管中的斑块。
在一个实施方案中,所述疾病是心血管疾病。本文报道的一个方面是，一种治疗疾病或病症的方法，所述疾病或病症的特征在于身体部分内的非正常的脂质水平或含有脂质的沉积物，所述方法包括i)给需要治疗的受试者或人工系统施用治疗有效量的本文报道的脂质颗粒，和ii)任选地监视受试者的脂质水平或含有脂质的沉积物的变化。本文报道的一个方面是，一种用于具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防的方法，所述方法包括:给有此需要的受试者施用本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白。本文报道的一个方面是，一种诊断组合物，其包含本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白，其中所述载脂蛋白被标记，从而允许检测在样品或受试者中的标记的载脂蛋白或脂质颗粒。本文报道的一个方面是，本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白用于诊断的用途。本文报道的一个方面是，本文报道的脂质颗粒用于预防或治疗受试者的用途，所述受试者罹患特征在于存在非正常的脂质水平或含有脂质的沉积物的疾病或病症。本文报道的一个方面是，编码本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白的核酸以及包含本文报道的核酸的细胞。本文报道的一个方面是，具有SEQ ID N0:01或SEQ ID N0:02或SEQ ID N0:66或SEQ ID NO:67的氨基 酸序列的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或其药学上可接受的盐、或其前药。在一个实施方案中，所述四连蛋白-载脂蛋白A-1具有SEQ ID N0:01或SEQ ID NO:02或SEQ ID N0:66或SEQ ID NO:67的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有一个或多个保守氨基酸改变。在一个实施方案中，所述四连蛋白-载脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:01或SEQDI N0:02或SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67的氨基酸序列，其中一个或多个氨基酸被置换、添加或删除。本文报道的一个方面是，一种四连蛋白-载脂蛋白A-1，其具有SEQ IDN0:01或SEQID N0:02或SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述氨基酸序列与 SEQ ID NO:01 或 SEQ ID NO:02 或 SEQ ID NO:66 或 SEQ ID NO:67 的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。在一个实施方案中，所述四连蛋白-载脂蛋白A-1单体或所述四连蛋白-载脂蛋白A-1三聚体能够结合选自由以下组成的组的受体:cubilin、B类I型清除受体(SR-BI)、ATP-结合盒I (ABCA-1)、卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)、胆固醇酯转移蛋白(CETP)或磷脂转移蛋白(PLTP)。本文报道的一个方面是，一种包含3个四连蛋白-载脂蛋白A-1单体的多聚体，其中所述四连蛋白-载脂蛋白A-1单体彼此非共价地结合。本文报道的一个方面是，包含SEQ ID NO =OUSEQ ID N0:02或SEQ ID NO:66的氨
基酸序列的融合蛋白、编码所述融合蛋白的核酸、和包含编码所述融合蛋白的核酸的质粒。在一个实施方案中，所述融合蛋白在N端至C端方向上包含-氨基酸甲硫氨酸(M)，
-干扰素序列片段，其具有氨基酸序列CDLPQTHSL(SEQID NO:55)，-GS 接头，-六组氨酸标签，其具有氨基酸序列HHHHHH(SEQ ID NO:56)，-GS 接头，-1gA蛋白酶切割位点，其具有氨基酸序列VVAPPAP (SEQ ID NO:60)，和-四连蛋白-载脂蛋白A-1，其具有SEQID NO:02的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述融合蛋白具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列。本文报道的一个方面是，一种细胞，其包含编码本文报道的融合蛋白的核酸。在一个实施方案中，所述细胞选自:大肠杆菌菌株，诸如CSPZ-2、K12菌株294 (ATCC31446)、B, X1776 (ATCC31537), W3110 (ATCC273325), BL2U RM_82、SCS_110、G、XL_1_F_、SE—13009、LA_5709、C600、CSH_1、TG_1、UT400 和 UT5600。本文报道的一个方面是，一种脂质颗粒，其包含a)四连蛋白-载脂蛋白A-1，其具有选自氨基酸序列SEQ ID NO:01、SEQ ID NO:02、SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:67 的氨基酸序列，b)磷脂酰胆碱，和c)脂质。在一个实施方案中，所述脂`质选自磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰丝氨酸、鞘氨醇1-磷酸、胆酸盐或二肉豆蘧酰基磷脂酰甘油。在一个实施方案中，所述脂质是除了磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酸以外的任意脂质。在一个实施方案中，所述脂质颗粒包含a)四连蛋白-载脂蛋白A-1，其具有选自氨基酸序列SEQ ID NO:01、SEQ ID NO:
02、SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:67 的氨基酸序列，b)第一种磷脂酰胆碱，和c)第二种磷脂酰胆碱。在一个实施方案中，所述第一种磷脂酰胆碱是P0PC，且所述第二种磷脂酰胆碱是DPPC0在一个实施方案中，用于生产所述脂质颗粒的所述第一种磷脂酰胆碱与所述第二种磷脂酰胆碱的摩尔比是在99: I至1: 99之间。在一个实施方案中，用于生产所述脂质颗粒的所述第一种磷脂酰胆碱与所述第二种磷脂酰胆碱的摩尔比是在99:1至10: 90之间。在一个实施方案中，用于生产所述脂质颗粒的所述第一种磷脂酰胆碱与所述第二种磷脂酰胆碱的摩尔比是在99:1至25: 75之间。在一个实施方案中，用于生产所述脂质颗粒的所述第一种磷脂酰胆碱与所述第二种磷脂酰胆碱的摩尔比是在99:1至50: 50之间。在一个实施方案中，用于生产所述脂质颗粒的所述第一种磷脂酰胆碱与所述第二种磷脂酰胆碱的摩尔比是约75: 25。在一个实施方案中，所述第一种磷脂酰胆碱是P0PC，且所述第二种磷脂酰胆碱是DPPC0在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的所述第一种磷脂酰胆碱与所述第二种磷脂酰胆碱的摩尔比是在99:1至1: 99之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的所述第一种磷脂酰胆碱与所述第二种磷脂酰胆碱的摩尔比是在99:1至10: 90之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的所述第一种磷脂酰胆碱与所述第二种磷脂酰胆碱的摩尔比是在99:1至25: 75之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的所述第一种磷脂酰胆碱与所述第二种磷脂酰胆碱的摩尔比是在99: I至50: 50之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的所述第一种磷脂酰胆碱与所述第二种磷脂酰胆碱的摩尔比是约75: 25。在一个实施方案中，所述载脂蛋白与所述第一种磷脂酰胆碱和所述脂质非共价地结合。在一个实施方案中，所述四连蛋白-载脂蛋白A-1与所述第一种磷脂酰胆碱和所述第二种磷脂酰胆碱非共价地结合。在一个实施方案中，所述四连蛋白-载脂蛋白A-1是包含3个四连蛋白-载脂蛋白A-1单体的多聚体。在一个实施方案中，所述脂质颗粒包含小于0.75重量％的洗涤剂。在一个实施方案中，所述洗涤剂选自基于糖的洗涤剂、基于聚亚氧烷基的洗涤剂、基于胆汁盐的洗涤剂、合成的洗涤剂和它们的组合。在一个实施方案中，所述洗涤剂是胆酸或两性洗涤剂。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的总数目是在40-120之间，在另一个实施方案中，是在50-110之间，在另一个实施方案中，是在54-102之间。在一个实施方案中，所述磷脂是磷脂酰胆碱。本文报道的一个方面是，一种药物组合物，其包含本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白。本文报道的一个方面是，用作药物的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白。本文报道的一个方面是，本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白用于生产药物的用途，所述药物 -用于预防继发性主要不良心血管事件(MACE)，-用于具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防，或者-用于预防或治疗动脉粥样硬化，其中包含的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白的量足以在受试者中诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于清除/溶解/稳定受试者血管中的粥样硬化斑块，或者用于使胆固醇从受试者的动脉壁重新分配至肝脏，或者-用于预防或治疗受试者的瓣膜狭窄，或者-用于增加受试者的HDL颗粒的数目，或者-用于启动受试者中的胆固醇逆转运，或者-用于除去内毒素，或者-用于预防脓毒性休克-用于治疗心绞痛，或者-用于治疗心肌梗死，或者-用于治疗不稳定型心绞痛，或者-用于治疗动脉狭窄，诸如外周动脉疾病(PAD)、颈动脉狭窄、脑动脉狭窄或冠状动脉狭窄，或者
-用于治疗血管性痴呆,或者-用于治疗一过性黑朦。本文报道的一个方面是，本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白在药物生产中的用途。本文报道的一个方面是，一种用于生产药物的方法，所述药物-用于具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防，或者-用于预防继发性主要不良心血管事件(MACE)，或者-用于预防或治疗动脉粥样硬化，其中包含的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白的量足以在受试者中诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于清除/溶解/稳定受试者血管中的粥样硬化斑块，或者用于使胆固醇从受试者的动脉壁重新分配至肝脏，或者-用于预防或治疗受试者的瓣膜狭窄，或者-用于增加受试者的HDL颗粒的数目，或者-用于启动受试者中的胆固醇逆转运，或者-用于除去内毒素，或者
`
-用于预防脓毒性休克-用于治疗心绞痛，或者-用于治疗心肌梗死，或者-用于治疗不稳定型心绞痛，或者-用于治疗动脉狭窄，诸如外周动脉疾病(PAD)、颈动脉狭窄、脑动脉狭窄或冠状动脉狭窄，或者-用于治疗血管性痴呆，或者-用于治疗一过性黑朦。本文报道的一个方面是一种方法，所述方法用于-具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防,或者-用于预防继发性主要不良心血管事件(MACE)，或者-预防或治疗动脉粥样硬化，其中包含的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白的量足以在受试者中诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于清除/溶解/稳定受试者血管中的粥样硬化斑块，或者用于使胆固醇从受试者的动脉壁重新分配至肝脏，或者-用于预防或治疗受试者的瓣膜狭窄，或者-用于增加受试者的HDL颗粒的数目，或者-用于启动受试者中的胆固醇逆转运，或者-用于除去内毒素,或者-用于预防脓毒性休克
-用于治疗心绞痛，或者-用于治疗心肌梗死，或者-用于治疗不稳定型心绞痛，或者-用于治疗动脉狭窄，诸如外周动脉疾病(PAD)、颈动脉狭窄、脑动脉狭窄或冠状动脉狭窄，或者-用于治疗血管性痴呆,或者-用于治疗一过性黑朦。本文报道的一个方面是，用于治疗或预防下述病症的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白:-急性冠状动脉综合征,或者-继发性主要不良心血管事件(MACE)，或者-动脉粥样硬化，或者-受试者血管中的粥样硬化斑块，或者-受试者的瓣膜狭窄，或者-脓毒性休克，或者-心绞痛，或者`-心肌梗死，或者-不稳定型心绞痛，或者-动脉狭窄，或者-外周动脉疾病(PAD),或者-颈动脉狭窄，或者-脑动脉狭窄，或者-冠状动脉狭窄，或者-血管性痴呆，或者-一过性黑朦。本文报道的一个方面是，用于下述用途的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的载脂蛋白A-1多聚体、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、或本文报道的融合蛋白:-诱导胆固醇逆转运，或者-诱导斑块平定，或者-清除或溶解或稳定粥样硬化斑块，或者-使胆固醇从动脉壁重新分配至肝脏，或者-增加HDL颗粒的数目，或者-除去内毒素。本文报道的一个方面是，在干预后应用时用于预防由于急性心血管事件被送至急诊室(ER)的患者的继发性主要不良心血管事件(MACE)的方法，或用于治疗个体的方法，所述个体具有急性冠状动脉综合征、或具有动脉粥样硬化、或具有在血管中的粥样硬化斑块、或具有瓣膜狭窄、或具有脓毒性休克、或具有心绞痛、或具有心肌梗死、或具有不稳定型心绞痛、或具有动脉狭窄、或具有外周动脉疾病(PAD)、或具有颈动脉狭窄、或具有脑动脉狭窄、或具有冠状动脉狭窄、或具有血管性痴呆、或具有一过性黑朦，所述方法包括:给所述个体施用有效量的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的多聚体、或本文报道的融合蛋白、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-1。本文报道的一个方面是，一种在个体中诱导胆固醇逆转运、或诱导斑块平定、或清除或溶解或稳定粥样硬化斑块、或使胆固醇从动脉壁重新分配至肝脏、或增加HDL颗粒的数目、或除去内毒素的方法，所述方法包括:给所述个体施用有效量的本文报道的脂质颗粒、或本文报道的多聚体、或本文报道的融合蛋白、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-1，以诱导胆固醇逆转运、或诱导斑块平定、或清除或溶解或稳定粥样硬化斑块、或使胆固醇从动脉壁重新分配至肝脏、或增加HDL颗粒的数目、或除去内毒素。在一个实施方案中，所述非正常的脂质水平是在体液中。在另一个实施方案中，所述体液是全血或血清。在一个实施方案中，所述非正常的脂质水平是升高的胆固醇水平。在一个实施方案中，所述含有脂质的沉积物是在血管中的斑块。在一个实施方案中，所述疾病是心血管疾病。本文报道的一个方面是，一种治疗疾病或病症的方法，所述疾病或病症的特征在于身体部分内的非正常的脂质水平或含有脂质的沉积物，所述方法包括:i)给需要治疗的受试者或人工系统施用治疗有效量的本文报道的脂质颗粒，和ii)任选地监视受试者的脂质水平或含有脂质的沉积物的变化。本文报道 的一个方面是，一种用于具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防的方法，所述方法包括:给有此需要的受试者施用本文报道的脂质颗粒、或本文报道的多聚体、或本文报道的融合蛋白、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-1。本文报道的一个方面是，一种用于预防继发性主要不良心血管事件(MACE)的方法，所述方法包括:给有此需要的受试者干预后施用本文报道的脂质颗粒、或本文报道的多聚体、或本文报道的融合蛋白、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-1，其中所述受试者由于急性心血管事件(CV)被送至急诊室(ER)。本文报道的一个方面是，一种诊断组合物，其包含本文报道的脂质颗粒、或本文报道的多聚体、或本文报道的融合蛋白、或本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-1，其中所述载脂蛋白被标记，从而允许检测在样品或受试者中的标记的载脂蛋白或脂质颗粒。本文报道的一个方面是，本文报道的脂质颗粒用于诊断的用途。本文报道的一个方面是，本文报道的脂质颗粒用于预防或治疗受试者的用途，所述受试者罹患特征在于存在非正常的脂质水平或含有脂质的沉积物的疾病或病症。本文报道的一个方面是，编码本文报道的四连蛋白-载脂蛋白A-1或本文报道的融合蛋白的核酸，以及包含本文报道的核酸的细胞。本文报道的一个方面是一种多肽，其具有SEQ ID NO:01的氨基酸序列，或者是它的变体，所述变体与SEQ ID NO:01的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。本文报道的一个方面是一种多肽，其具有SEQ ID NO:02的氨基酸序列，或者是它的变体，所述变体与SEQ ID NO:02的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。本文报道的一个方面是一种多肽，其具有SEQ ID NO:06的氨基酸序列，或者是它的变体，所述变体与SEQ ID NO:06的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
本文报道的一个方面是一种多肽，其具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列，或者是它的变体，所述变体与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。本文报道的一个方面是一种多肽，其具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列，或者是它的变体，所述变体与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。本文报道的一个方面是，一种脂质颗粒，其包含-载脂蛋白A-1或其变体，和-1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和I，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱，其中所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在50-90之间，且其中所述载脂蛋白A-1具有SEQ ID NO=Ol的氨基酸序列。 在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在60-88之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在62-80之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在64-70之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是约66。本文报道的一个方面是，一种脂质颗粒，其包含-载脂蛋白A-1或其变体，和-1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和I，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱，其中所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在60-90之间，且其中所述载脂蛋白A-1具有SEQ ID N`O:02的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在60-88之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在62-80之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在64-70之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是约66。本文报道的一个方面是，一种脂质颗粒，其包含-载脂蛋白A-1或其变体，和-1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和I，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱，其中所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在60-90之间，且其中所述载脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:06的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在60-88之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在62-80之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在64-70之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是约66。本文报道的一个方面是，一种脂质颗粒，其包含-载脂蛋白A-1或其变体，和-1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和I，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱，其中所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在60-90之间，且其中所述载脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在60-88之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在62-80之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在64-70之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是约66。本文报道的一个方面是，一种脂质颗粒，其包含-载脂蛋白A-1或其变体，和 -1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和I，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱，其中所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在60-90之间，且其中所述载脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在60-88之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在62-80之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是在64-70之间。在一个实施方案中，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是约66。
具体实施例方式定义术语“载脂蛋白”表示，分别被包含在脂质或脂蛋白颗粒中的蛋白。术语“载脂蛋白A-Ι”表示`，具有蛋白-脂质和蛋白-蛋白相互作用性质的两亲螺旋多肽。载脂蛋白A-1作为267个氨基酸残基的前载脂蛋白原由肝脏和小肠合成，所述前载脂蛋白原分泌为载脂蛋白原，后者被切割成具有243个氨基酸残基的成熟多肽。载脂蛋白A-1是由6-8个不同的氨基酸重复序列组成，每个重复序列由22个氨基酸残基组成，所述重复序列被接头部分隔开，所述接头部分经常是脯氨酸，且在有些情况下由几个残基构成的片段组成。在GenPept数据库登录项NM-000039或数据库登录项X00566 ；GenBankNP-000030.1(gi4557321)中，报道了一个示例性的人载脂蛋白A-1氨基酸序列。人载脂蛋白 A-1 (SEQ ID NO:06)具有天然存在的变体，诸如 P27H、P27R、P28R、R34L、G50R、L84R、D113E、A-A119D、D127N、K131 缺失、K131M、W132R、E133K、R151C (氨基酸残基 151 从 Arg 变为 Cys，载脂蛋白 A-1-Paris)、E160K、E163G、P167R、L168R、E171V、P189R、R197C(氨基酸残基173从Arg变为Cys，载脂蛋白A-1-Milano)和E222K。也包括具有保守氨基酸改变的变体。在一个实施方案中，所述四连蛋白-载脂蛋白A-1包含免疫球蛋白A蛋白酶(IgA蛋白酶)的切割位点片段。从IgA蛋白酶已知的识别位点包含下述序列，其中“丨”表示切割的键的位置:Pro-Ala-Pro 丨 Ser-Pro (SEQ ID NO:61)Pro-Pro 丨 Ser-Pro (SEQ ID NO:62)Pro-Pro 丨 Ala-Pro (SEQ ID NO:63)Pro-Pro 丨 Thr-Pro (SEQ ID NO:64)Pro-Pro I Gly-Pro (SEQ ID NO:65),
其中更经常地选择和切割前3个。术语“载脂蛋白模拟物”表示，模拟各个载脂蛋白的功能的合成多肽。例如“载脂蛋白A-1模拟物”是这样的合成多肽:在除去胆固醇(即逆转胆固醇流出)方面，其表现出与天然的载脂蛋白A-1可比较的生物学功能。在一个实施方案中，所述载脂蛋白A-1模拟物包含至少一个两亲的α-螺旋，所述α-螺旋具有簇集在疏水-亲水界面处的带正电荷的氣基酸残基和族集在未水面中心处的带负电荷的氣基酸残基。为了 1吴拟载脂蛋白A-1的功能，所述载脂蛋白模拟物包含15-29个氨基酸残基的重复多肽，在一个实施方案中，包含22个氨基酸残基(PVLDEFREKLNEELEALKQKLK (SEQ ID NO:04) ；PVLDLFRELLNELLEALKQKLK (SEQID NO:05))的重复多肽。术语“心血管疾病”通常表示与心脏或血管有关的疾病或病症，诸如动脉硬化、冠心病、脑血管疾病、主-髂动脉疾病、缺血性心脏病或外周血管病。这样的疾病可能在由诸如心肌梗死、中风、心绞痛、短暂脑缺血发作、充血性心力衰竭、主动脉瘤等疾病引起的不利事件(大部分导致受试者死亡)之前难以发现。术语“胆酸盐”是指3 α，7 α，12 α -三羟基_5 β -胆_24_酸或其盐，特别是钠盐。术语“临界胶束浓度”和它的缩写“CMC” (它们可以可互换地使用)表示这样的表面活性剂或洗涤剂的浓度:在该浓度以上，单个的洗涤剂分子(单体)自发地聚集成胶束(胶束、圆形杆、层状结构等)。术语“保守氨基酸改变”表示，没有影响或改变根据本发明的脂质颗粒或载脂蛋白的特征的氨基酸序列的改变。通过本领域已知的标准技术，诸如定位诱变和PCR介导的诱变，可以引入改变。保守氨基酸改变包括这样的改变:其中用具有类似侧链的氨基酸残基替换氨基酸残基。本领域已经定义了具有类似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括:具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有 不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有分支侧链的氨基酸(例如苏氨酸，缬氨酸，异亮氨酸)以及具有芳族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，“变体”蛋白在本文中表示这样的分子:其氨基酸序列与“母体”蛋白的氨基酸序列相差最多10个添加、缺失和/或置换，在一个实施方案中，与“母体”蛋白的氨基酸序列相差约2至约5个添加、缺失和/或置换。如Riechmann，L.，等人，Nature332 (1988) 323-327，和 Queen, C.，等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA86 (1989) 10029-10033 所述，通过基于分子建模的诱变，可以进行氨基酸序列的改变。使用众所周知的算法，诸如BL0SUM30、BL0SUM40、BL0SUM45、BL0SUM50、BL0SUM55、BL0SUM60、BL0SUM62、BL0SUM65、BL0SUM70、BL0SUM75、BL0SUM80、BL0SUM85 或 BL0SUM90，可以计算不同的氨基酸序列的同源性和同一性。在一个实施方案中，所述算法是BL0SUM30。通过将载脂蛋白与洗涤剂增溶的脂质在它们各自的转变温度下一起温育，可以形成脂质颗粒。术语“洗涤剂”表示表面活性的化学物质。“洗涤剂”通常是具有非极性疏水部分和极性亲水部分的两性分子。术语“两性离子型洗涤剂”表示这样的表面活性的化学化合物:其具有总体为零的电荷，且同时包含至少一个带正电荷的部分和至少一个带负电荷的部分。在一个实施方案中，所述洗漆剂选自基于糖的洗漆剂、基于聚亚氧烧基的洗涤剂、基于胆汁盐的洗涤剂、合成洗涤剂或它们的组合。术语“基于糖的洗涤剂”表示选自下述的洗涤剂:正辛基-β -D-吡喃葡萄糖苷、正壬基-β -D-吡喃葡萄糖苷、正十二烷基-β -D-吡喃麦芽糖苷或5-环己基戊基-β -D-吡喃麦芽糖苷及其衍生物。术语“基于胆汁盐的洗涤剂”表示选自下述的洗涤剂:胆酸钠、胆酸钾、胆酸锂、3-[(3_氯酰氨基丙基)二甲基氨基]_基-丙磺酸盐(CHAPS)、3-[ (3-氯酰氨基丙基)二甲基氨基]-2-轻基丙磺酸盐(CHAPSO)及其衍生物。术语“基于聚亚氧烷基的洗涤剂”表示选自下述的洗涤剂:吐温20、Triton X-100、Pluronic F68、及其衍生物。术语“合成洗涤剂”表示选自下述的洗涤剂:两性洗涤剂(Zwittergent) 3-6、两性洗涤剂3_8、两性洗涤剂3_10、两性洗涤剂3_12及其衍生物。例如药物制剂等试剂的“有效量”表示，在所需的剂量和时间段，有效地实现期望的治疗或预防结果的量。术语“高密度脂蛋白颗粒”或它的缩写“HDL颗粒”(它们可以互换使用)表示，包含载脂蛋白A-1作为主要蛋白性化合物的脂质-蛋白复合物。术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换地使用，并表示其中已经引入外源性核酸的细胞，包括这样的细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化的细胞”，它们包括原代转化细胞和从它们衍生出的后代，不论传代的数目。后代的核酸含量可以不与亲代细胞完全相同，而是可以含有突变。在本文中包括，具有与在最初转化的细胞中筛选或选择的相同的功能或生物活性的突变体后代。术语“增加脂质流出”及其语法等效描述表示，增加从细胞或斑块的脂质流出水平和/或速率、加速从细胞或斑块的脂质流出、增强从细胞或斑块的脂质流出、促进从细胞或斑块的脂质流出、上调从细胞或斑块的脂质流出、提高从细胞或斑块的脂质流出和/或增进从细胞或斑块的脂质流出。在一个实施方案中，所述脂质流出包括磷脂、甘油三酯、胆固醇和/或胆固醇酯的流出。“个体”或“受试者”是`哺乳动物。哺乳动物包括，但不限于，家养的动物(例如，牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如，人类和非人灵长类动物诸如猴子)、兔和啮齿类动物(例如，小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，所述个体或受试者是人。术语“DPPC”表示磷脂I，2- 二棕榈酰_sn_甘油_3_磷脂酰胆碱，也称作I，2_ 二棕榈酰-磷脂酰胆碱。术语“多聚体”表示，由2个或更多个单体组成的复合物。多聚体由单体之间的非共价相互作用形成。每个单体包含一个多聚化结构域。在一个实施方案中，所述多聚体包含2或3个单体。在另一个实施方案中，所述多聚化结构域通过在每个单体中包含的各个多聚化结构域之间的非共价相互作用而相互作用。术语“多聚化结构域”是指，能够共价地或非共价地结合2个或更多个单体分子的氨基酸序列。多聚化结构域能够与不同的、类似的或相同的氨基酸序列的多聚化结构域相互作用。在一个实施方案中，所述多聚化结构域是四连蛋白三聚化结构元件或其衍生物，其氨基酸序列与SEQ ID NO:53的共有氨基酸序列具有至少68%同一性。在一个实施方案中，在SEQ ID NO:53的50位处的半胱氨酸残基被不同的氨基酸残基置换，在另一个实施方案中，被丝氨酸残基或苏氨酸残基或甲硫氨酸残基置换。包含多聚化结构域的多肽可以与一个或多个也包含多聚化结构域的其它多肽结合。简单地通过在适当条件下混合所述多肽，可以引发多聚体形成。在另一个实施方案中，所述多聚化结构域具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，其中已经在所述氨基酸序列的N端或C端删除或添加1-10个残基。在另一个实施方案中，所述多聚化结构域具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，其中已经从所述氨基酸序列的N端删除了 6个或9个氨基酸残基。在另一个实施方案中，所述多聚化结构域具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，其中已经删除了 N-端氨基酸残基L或N-端氨基酸残基C和L。在一个实施方案中，所述多聚化结构域是四连蛋白三聚化结构元件，且具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述多聚体是同聚体。所述多聚体可以是同聚体或异聚体，因为可以组合包含多聚化结构域的不同载脂蛋白，以整合成多聚体。在一个实施方案中，所述多聚体是三聚同聚体。根据一个实施方案，所述多聚化结构域从四连蛋白得到。在一个实施方案中，所述多聚化结构域包含四连蛋白三聚化结构元件，后者具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列。四连蛋白三聚化结构元件的三聚化效应由卷曲螺旋结构造成，所述卷曲螺旋结构与2个其它四连蛋白三聚化结构元件的卷曲螺旋结构相互作用，以形成三聚体。所述四连蛋白三聚化结构元件可以从人四连蛋白、兔四连蛋白、鼠四连蛋白或鲨鱼软骨的C-型凝集素得到。在一个实施方案中，所述四连蛋白三聚化结构元件包含与SEQ ID NO:53的共有序列具有至少68%、或至少75%、或至少81 %、或至少87%、或至少92%同一性的序列。术语“非共价相互作用”表示:非共价结合力诸如离子相互作用力(例如盐桥)、非离子相互作用力(例如氢键)或疏水相互作用力(例如范德华力或η-堆叠相互作用)。关于参照多肽序列的“百分比)氨基酸序列同一性”，定义为将候选序列与参照多肽序列在进行序列比对(并在必要时导入间隙)以获取最大百分比序列同一性，且不将任何保守置换视为序列同一性的一部分之后，候选序列中的氨基酸残基与参照多肽序列中的氨基酸残基相同的百分数。例如，使用公众可得到的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件,可使用属于本领域技术的各种方法进行序列比对以便测定氨基酸序列同 一性百分比。本领域技术人员可以决定比对序列的适宜参数，包括对所比较的序列全长获得最大比对所需的任何算法。然而，为此目的，氨基酸序列同一性％的值使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生。ALIGN-2序列比对计算机程序的作者是Genentech, Inc.,该源代码已经随用户文档提交至美国版权局(Washington D.C.,20559),其美国版权注册登记号为TXU510087。公众可从Genentech, Inc.(South San Francisco,加利福尼亚)得到ALIGN-2程序，或者可以从所述源代码进行编译。ALIGN-2程序应当为在UNIX操作系统，包括在数字UNIX V4.0D上使用而进行编译。ALIGN-2程序设定了所有序列比对参数并且不变。在ALIGN-2应用于氨基酸序列比较的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)、与(with)、或针对(against)给定氨基酸序列B的氨基酸序列同一'注％ (或者这样说:给定氨基酸序列A具有或含有相对于、与或针对给定氨基酸序列B的某一 ％氨基酸序列同一性)如下计算:分数X/Y 乘以 100，其中X是用序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。可以理解，当氨基酸序列A与氨基酸序列B的长度不相等时，A相对于B的氨基酸序列同一性％将不等于B相对于A的氨基酸序列同一性％。除非另外特别指出，如在紧前面的段落中所述，使用ALIGN-2计算机程序获得在本文中所用的所有的％氨基酸序列同一性的值。术语“药物制剂”表示这样的制剂:其处于允许其中含有的活性成分的生物活性为有效的形式，且其不含有对于所述制剂将要施用的受试者而言具有不可接受的毒性的其它组分。“药学上可接受的载体”表示药物制剂中除了活性成分以外的成分，其对受试者是无毒的。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。术语“磷脂酰胆碱”表示由一个甘油部分、两个羧酸部分和一个磷酸胆碱部分组成的分子，其中所述甘油部分通过酯键(即2个羧酸酯键和I个磷酸酯键)与每个其它部分共价地连接，其中所述磷酸酯键是与所述甘油部分的1-羟基或3-羟基相连。术语“羧酸部分”表示包含至少一个酰基(R-C(O)O)的有机部分。所述磷脂酰胆碱可以属于任意种类或来源。在一个实施方案中，所述磷脂酰胆碱选自卵磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蘧酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂基磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、1-肉豆蘧酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-肉豆蘧酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰胆碱、1-油酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱和它们的类似物和衍生物。本文使用的所有磷脂可以源自任意来源，即(在适当时)源自大豆、奶、卵或甚至除了人类以外的动物的内部器官，它们可以源自天然来源，或是半合成的或甚至完全合成的。术语“P0PC”表示磷脂1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油_3_磷脂酰胆碱，也称作1_棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱。本文使用的“治疗(treatment)”(及其语法变体，诸如“治疗(treat)”或“治疗(treating) ”)指在尝试改变待治疗的个体的天然进程中的临床介入，并且可以为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的理想效果包括但不限于防止疾病发生或复发，缓和症状，消除疾病的任何直接或间接病理学后果，预防转移，减少疾病进展速率，改善或减轻疾病状态，和缓解或改善的预后。在一些实施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病的发生或延缓疾病的进展。术语“变体”也包括本文报道的载脂蛋白或载脂蛋白模拟物的变体，其中在所述变体中，各个载脂蛋白或载脂蛋白模拟物的氨基酸序列包含一个或多个氨基酸置换、添加或缺失。所述改变可以增加或降低所述载脂蛋白对载脂蛋白受体或载脂蛋白转换酶的亲和力，或可以增加所述载脂蛋白变体与各个载脂蛋白相比的稳定性，或可以增加所述载脂蛋白变体与各个载脂蛋白相比在水溶液中的溶解度，或可以增加在宿主细胞中/由宿主细胞实现的所述载脂蛋白变体与各个载脂蛋白相比的重组生产。脂质颗粒本文报道了一种脂质颗粒，其包含a)四连蛋白-载脂蛋白A-1,b)磷脂酰胆碱，和c)其它脂质。在一个实施方案中，所述脂质颗粒包含四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、第一种磷脂酰胆碱和第二种磷脂酰胆碱。在一个实施方案中，所述第一种磷脂酰胆碱和所述第二种磷脂酰胆碱的差别在于，一个或两个被酯化至磷脂酰胆碱的磷酸甘油主链上的羧酸部分或羧酸部分衍生物。在一个实施方案中，所述第一种磷脂酰胆碱是POPC，且所述第二种磷脂酰胆碱是DPPC0在一个实施方案中，在所述脂质颗粒中的所述四连蛋白-载脂蛋白A-Ι、所述磷脂酰胆碱非共价地结合。在一个实施方案中，所述四连蛋白-载脂蛋白A-1是重组生产的四连蛋白-载脂蛋白A-1。脂质组合的选择决定了包含载脂蛋白的脂质颗粒的效力和肝安全性。在使用兔进行的含有二肉豆蘧酰磷脂酰胆碱(DMPC)的脂质颗粒的体内研究中已经发现，用30mg/kg处理的兔表现出严重的副作用，但是存活，而用100mg/kg处理的兔死亡。体外功能试验证实，含有单一磷脂酰胆碱(诸如DPPC或P0PC)的脂质颗粒会活化LCAT。还证实，当脂质颗粒包含不同磷脂的组合时，胆固醇流出更高。表1:为体内兔研究制备的差别在于它们的脂质组成的磷脂组合
权利要求
1.一种脂质颗粒，其包含 -载脂蛋白A-1或其变体，和 -1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和1，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱。
2.根据权利要求1所述的脂质颗粒，其特征在于，1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱与I，2-二棕榈酰-磷脂酰胆碱的摩尔比是99:1至25: 75。
3.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述载脂蛋白A-1或其变体是包含3个单体的多聚体。
4.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述载脂蛋白A-1是具有 SEQ ID NO:01或 SEQ ID NO:02 或 SEQ ID NO:06或 SEQ ID NO:66 或 SEQ ID NO:67 的氨基酸序列的四连蛋白-载脂蛋白A-1。
5.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述载脂蛋白A-1的氨基酸序列具有一个或多个保守氨基酸改变。
6.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述载脂蛋白A-1的氨基酸序列与 SEQ ID NO:01 或 SEQ ID NO:02 或 SEQ ID NO:06 或 SEQ ID NO:66 或 SEQ IDNO:67的氨基酸序列具有至少70%同源性。
7.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于与选自由以下组成的组的受体结合:cubilin、B类I型清除受体(SR-BI)、ATP-结合盒I (ABCA-1)、卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)、胆固醇酯转移蛋白(CETP)或磷脂转移蛋白(PLTP)。
8.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分 子的数目是40-120。
9.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是50-110。
10.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是54-102。
11.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是60-90。
12.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是60-88。
13.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是62-80。
14.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是64-70。
15.根据权利要求1-12中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是66-86。
16.根据前述权利要求中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是约66。
17.药物组合物，其包含根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒。
18.组合物，其包含根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒，其中所述脂质颗粒包含可检测的标记。
19.用作药物的根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒。
20.用作药物的根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒，所述药物 -用于具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防，或者 -用于预防或治疗动脉粥样硬化，或者 -用于诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者 -用于清除/溶解/稳定受试者血管中的粥样硬化斑块，或者用于使胆固醇从受试者的动脉壁重新分配至肝脏，或者 -用于预防或治疗受试者的瓣膜狭窄，或者 -用于增加受试者的HDL颗粒的数目，或者 -用于启动受试者中的胆固醇逆转运，或者 -用于除去内毒素，或者 -用于预防脓毒性休克 -用于治疗心绞痛，或者 -用于治疗心肌梗死，或者 -用于治疗不稳定型心绞痛，或者 -用于治疗动脉狭窄，所述动脉狭窄诸如外周动脉疾病(PAD)、颈动脉狭窄、脑动脉狭窄或冠状动脉狭窄，或者 -用于治疗血管性痴呆，或者 -用于治疗一过性黑朦。
21.根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒用于生产药物的用途。
22.根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒用于生产药物的用途，所述药物 -用于具有急性冠状动脉综合征的`患者的二级预防，或者 -用于预防或治疗动脉粥样硬化，或者 -用于诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者 -用于清除/溶解/稳定受试者血管中的粥样硬化斑块，或者用于使胆固醇从受试者的动脉壁重新分配至肝脏，或者 -用于预防或治疗受试者的瓣膜狭窄，或者 -用于增加受试者的HDL颗粒的数目，或者 -用于启动受试者中的胆固醇逆转运，或者 -用于除去内毒素，或者 -用于预防脓毒性休克 -用于治疗心绞痛，或者 -用于治疗心肌梗死，或者 -用于治疗不稳定型心绞痛，或者 -用于治疗动脉狭窄，所述动脉狭窄诸如外周动脉疾病(PAD)、颈动脉狭窄、脑动脉狭窄或冠状动脉狭窄，或者 -用于治疗血管性痴呆，或者 -用于治疗一过性黑朦。
23.一种用于生产药物的方法，所述药物-用于具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防，或者 -用于预防或治疗动脉粥样硬化，其中包含的根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒的量足以在受试者中诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者 -用于清除/溶解/稳定受试者血管中的粥样硬化斑块，或者用于使胆固醇从受试者的动脉壁重新分配至肝脏，或者 -用于预防或治疗受试者的瓣膜狭窄，或者 -用于增加受试者的HDL颗粒的数目，或者 -用于启动受试者中的胆固醇逆转运，或者 -用于除去内毒素，或者 -用于预防脓毒性休克 -用于治疗心绞痛，或者 -用于治疗心肌梗死，或者 -用于治疗不稳定型心绞痛，或者 -用于治疗动脉狭窄，所述动脉狭窄诸如外周动脉疾病(PAD)、颈动脉狭窄、脑动脉狭窄或冠状动脉狭窄，或者 -用于治疗血管性痴呆，或者 -用于治疗一过性黑朦。
24.一种方法，所述方法 -用于具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防，或者 -用于预防或治疗动脉粥样硬化，其中包含的根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒的量足以在受试者 中诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者-用于诱导胆固醇逆转运和/或斑块平定，或者 -用于清除/溶解/稳定受试者血管中的粥样硬化斑块，或者用于使胆固醇从受试者的动脉壁重新分配至肝脏，或者 -用于预防或治疗受试者的瓣膜狭窄，或者 -用于增加受试者的HDL颗粒的数目，或者 -用于启动受试者中的胆固醇逆转运，或者 -用于除去内毒素，或者 -用于预防脓毒性休克 -用于治疗心绞痛，或者 -用于治疗心肌梗死，或者 -用于治疗不稳定型心绞痛，或者 -用于治疗动脉狭窄，所述动脉狭窄诸如外周动脉疾病(PAD)、颈动脉狭窄、脑动脉狭窄或冠状动脉狭窄，或者 -用于治疗血管性痴呆，或者 -用于治疗一过性黑朦。
25.根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒，所述脂质颗粒用于治疗 -急性冠状动脉综合征，或者-动脉粥样硬化，或者 -受试者血管中的粥样硬化斑块，或者 -受试者的瓣膜狭窄，或者 -脓毒性休克，或者 -心绞痛，或者 -心肌梗死，或者 -不稳定型心绞痛，或者 -动脉狭窄，或者 -外周动脉疾病(PAD)，或者 -颈动脉狭窄，或者 -脑动脉狭窄，或者 -冠状动脉狭窄，或者 -血管性痴呆，或者 -一过性黑朦。
26.根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒，所述脂质颗粒用于 -诱导胆固醇逆转运，或者 -诱导斑块平定，或者 -清除或溶解或稳定粥样硬化斑块，或者 -使胆固醇从动脉壁重新分配至肝脏，或者 -增加HDL颗粒的数目，或者 -除去内毒素。
27.治疗疾病或病症的方法，所述疾病或病症的特征在于身体部分内的非正常的脂质水平或含有脂质的沉积物，所述方法包括: i)给需要治疗的受试者或人工系统施用治疗有效量的根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒，和 )任选地监视受试者的脂质水平或含有脂质的沉积物的变化。
28.一种治疗个体的方法，所述个体具有急性冠状动脉综合征、或动脉粥样硬化、或在血管中的粥样硬化斑块、或瓣膜狭窄、或脓毒性休克、或心绞痛、或心肌梗死、或不稳定型心绞痛、或动脉狭窄、或外周动脉疾病(PAD)、或颈动脉狭窄、或脑动脉狭窄、或冠状动脉狭窄、或血管性痴呆、或一过性黑朦，所述方法包括:给所述个体施用有效量的根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒。
29.一种在个体中诱导胆固醇逆转运、或诱导斑块平定、或清除或溶解或稳定粥样硬化斑块、或使胆固醇从动脉壁重新分配至肝脏、或增加HDL颗粒的数目、或除去内毒素的方法，所述方法包括:给所述个体施用有效量的根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒，以诱导胆固醇逆转运、或诱导斑块平定、或清除或溶解或稳定粥样硬化斑块、或使胆固醇从动脉壁重新分配至肝脏、或增加HDL颗粒的数目、或除去内毒素。
30.根据权利要求29所述的方法，其特征在于，所述非正常的脂质水平是在体液中。
31.根据权利要求30所述的方法，其特征在于，所述体液是全血或血清。
32.根据权利要求29-31中任一项所述的方法，其特征在于，所述非正常的脂质水平是增加的胆固醇水平。
33.根据权利要求29-32中任一项所述的方法，其特征在于，所述含有脂质的沉积物是在血管中的斑块。
34.—种治疗疾病或病症的方法，所述疾病或病症的特征在于身体部分内的非正常的脂质水平或含有脂质的沉积物，所述方法包括: i)给需要治疗的受试者或人工系统施用治疗有效量的根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒， )任选地监视受试者的所述脂质水平或所述含有脂质的沉积物的变化。
35.一种用于具有急性冠状动脉综合征的患者的二级预防的方法，所述方法包括:给有此需要的受试者施用根据权利要求1-16中任一项所述的脂质颗粒。
36.一种多肽，其具有SEQ ID NO:01的氨基酸序列，或者是它的变体，所述变体与SEQID NO=Ol的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
37.一种多肽，其具有SEQ ID NO:02的氨基酸序列，或者是它的变体，所述变体与SEQID NO:02的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
38.一种多肽，其具有SEQ ID NO:06的氨基酸序列，或者是它的变体，所述变体与SEQID NO:06的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
39.一种多肽，其具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列，或者是它的变体，所述变体与SEQID NO:66的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
40.一种多肽，其具 有SEQ ID NO:67的氨基酸序列，或者是它的变体，所述变体与SEQID NO:67的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
41.一种脂质颗粒，其包含 -载脂蛋白A-1或其变体，和 -1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和1，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱， 其中所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是50-105，且 其中所述载脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:01的氨基酸序列。
42.一种脂质颗粒，其包含 -载脂蛋白A-1或其变体，和 -1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和1，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱， 其中所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是50-105，且 其中所述载脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:02的氨基酸序列。
43.一种脂质颗粒，其包含 -载脂蛋白A-1或其变体，和 -1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和1，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱， 其中所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是50-105，且 其中所述载脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:06的氨基酸序列。
44.一种脂质颗粒，其包含 -载脂蛋白A-1或其变体，和 -1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和1，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱， 其中所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是50-105，且其中所述载脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
45.一种脂质颗粒，其包含 -载脂蛋白A-1或其变体，和 -1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱和1，2- 二棕榈酰-磷脂酰胆碱， 其中所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是50-105，且 其中所述载脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列。
46.根据权利要求41-45中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是60-95。
47.根据权利要求41-46中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是60-90。
48.根据权利要求41-47中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是60-88。
49.根据权利要求41-48中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是62-80。
50.根据权利要求41-48中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分子的数目是66-86。
51.根据权利要求41-48中任一项所述的脂质颗粒，其特征在于，所述脂质颗粒中的每个载脂蛋白单体的磷脂分 子的数目是64-70。
全文摘要
本文报道了一种脂质颗粒，其包含载脂蛋白、磷脂酰胆碱和脂质，诸如磷脂、脂肪酸或类固醇脂质。在一个实施方案中，所述脂质颗粒包含仅一种载脂蛋白。在一个实施方案中，所述脂质颗粒由载脂蛋白、磷脂、脂质和洗涤剂组成。在一个实施方案中，所述脂质是第二种磷脂酰胆碱，其中所述第一种磷脂酰胆碱和所述第二种磷脂酰胆碱的差别在于，一个或两个被酯化至磷脂酰胆碱的甘油主链上的脂肪酸残基或脂肪酸残基衍生物。在一个实施方案中，所述载脂蛋白选自具有选自SEQ ID NO01、02、06、66和67的氨基酸序列的载脂蛋白，或者是它的变体，所述变体与选择的序列具有至少70％序列同一性。
文档编号A61K9/127GK103108626SQ201180041951
公开日2013年5月15日 申请日期2011年8月25日 优先权日2010年8月30日
发明者马丁·巴德尔, 莫妮卡·贝纳, 于尔根·芬格勒, 乌尔里希·科纳特, 让-吕克·玛丽, 西尔克·莫尔 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司