专利名称：一种穿心莲内酯冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种穿心莲内酯冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术：
穿心莲系爵床科植物，具有清热解毒功效，主治泄泻痢疾、感冒发热、咽喉肿痛、口舌生疮、痈肿疮疡。穿心莲内酯(Andrographolide)系自爵床科植物穿心莲Andrographis Paniculata(Burm.f.)NeeS中提取得到的二萜内酯类化合物，是中药药用植物穿心莲的重要提取物和有效活性成份，具有清热解毒、凉血消肿等功能。
现代药理研究表明，穿心莲内酯及其衍生物(如脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯、穿琥宁注射液、莲必治注射液、病毒净滴眼液、复方穿琥宁涂膜剂等)具有消炎解热抗菌、抗病毒感染、抗肿瘤、抗心血管疾病、免疫刺激、保肝利胆及抗生育等作用，临床用于上呼吸道炎症和细菌性痢疾等症，临床也用于菌痢、肠炎、伤寒、呼吸道感染、钩体病、结核病、麻风病、皮肤感染、肝炎、中耳炎、盆腔炎、绒毛膜上皮癌、亚性葡萄胎、引产、血栓闭塞性脉管炎等。穿心莲内酯化学结构式中二萜双环母核及其五元内酯环结构为清热解毒的基本骨架。由于穿心莲内酯化合物难溶于水，目前都采用化学结构修饰的办法引进亲水基团制备各种穿心莲内酯盐制剂。但是，这些药品改变了穿心莲内酷化合物的结构，因其结构的变化降低了穿心莲内酯的药物活性作用，而且提高了药物毒副作用；而穿心莲全草粗提取物人体直接用药，成份复杂且有效成成份生物利用度低。近年来屡有报道，使用穿心莲提取物制剂(例如穿琥宁制剂)产生不良反应的报道。临床应用的莲必治注射液(亚硫酸氢钠穿心莲内酯)由于亚硫酸氢钠穿心莲内酯具有一个二萜的内酯结构，其水溶液对热不稳定，易开环降解，在贮存过程中不稳定，放置一段时间后pH值会明显降低，同时含量有所下降，从而影响疗效，使临床用药的质量受到影响，给药物的制备和贮藏带来不便，同时水溶液运输也存在不便。
专利(申请号200310111332和申请号200310112722)分别公开了亚硫酸氢钠穿心莲内酯粉针剂的制备方法，以上专利采用常规工艺将亚硫酸氢钠穿心莲内酯制备成粉针，没有创造性，虽然在一定程度上提高了稳定性，但由于亚硫酸氢钠穿心莲内酯是的加成产物，因此与穿心莲内酯相比其活性、疗效、毒副作用有一定影响，且对内酯环的稳定性没有本质改变。专利(申请号03111128)公开了一种环糊精包合穿心莲内酯的方法及其制剂，该专利中用超声法包合穿心莲内酯，穿心莲内酯用量为3-8g，环糊精或衍生物用量为10-80g，该范围跨度比较大，其包合的具体效果也未知，而研究表明不同环糊精衍生物包合不同药物时具有较强的选择性，用量也有显著差别，而以上用量在说明书中也没有得到具体体现，从该专利的实施例中可以看出包合时的羟丙基-β-环糊精用量为穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精为1∶3到1∶5，但研究表明用羟丙基-β-环糊精包合药物时用量在该比例范围时包合效果比较差，包合率和药物利用率都极低，而且从该专利实施例1可以知道该专利半成品穿心莲内酯包合物以溶液状态直接与辅料混合制备冻干粉，显然这不符合中药注射剂与冻干制剂新药研究的基本要求，不利于质量控制。

发明内容
基于上述原因，本发明经反复研究，优选了穿心莲内酯用羟丙基-β-环糊精包合的最佳方法及用量，穿心莲内酯包合物与药用辅料混合制备成冻干粉针剂，本发明的穿心莲内酯冻干粉针剂具有很好的稳定性、溶解度，药理实验表明本发明具有更好的药理作用。
本发明的目的在于提供一种稳定性好、疗效显著的穿心莲内酯冻干粉针剂。
本发明的目的还在于提供该冻干粉针剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现。
一、工艺制法(1)取穿心莲内酯，以饱和水溶液法用羟丙基-β-环糊精进行包合称取羟丙基-β-环糊精，加蒸馏水加热溶解，配成饱和溶液，冷至室温，按穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精＝1∶10-18的比例加入穿心莲内酯，边加边搅拌，搅拌时间2-5小时，温度控制45℃以下，静置，离心，滤过，低温干燥，得到穿心莲内酯包合物；(2)本发明的制剂的处方重量份组成为穿心莲内酯包合物为29-60份，药用辅料为2-11份；(3)按照本发明制剂处方取穿心莲内酯包合物和药用辅料混合，加注射用水溶解完全，调节pH值为4-6，用0.22um的滤膜过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿心莲内酯冻干粉针剂。
羟丙基-β-环糊精是近年来应用日益广泛的一种衍生物，与传统常用的β-环糊精比较具有水溶性显著提高，热稳定性好，溶血作用显著降低的优点，且能用于注射制剂，本发明将水溶性和稳定性都较差的穿心莲内酯用羟丙基-β-环糊精进行了包合，可显著增强药物的稳定性，提高药物在水中溶解度，利于制备冻干粉针剂，采用本发明制备工艺制备的冻干粉针剂其药效作用也得到了显著提高。
二、包合方法的选择分别取穿心莲内酯采用常用的包合方法饱和水溶液法、超声法、喷雾干燥法进行了比较实验，并分别测定各组实验的包合率。
饱和水溶液法将羟丙基-β-环糊精溶于蒸馏水中，加热溶解，制成饱和溶液，冷至室温，取穿心莲内酯4g加乙醇溶解，按穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精(1∶10)的比例加入的饱和溶液中，边加边搅拌，搅拌时间4小时，温度控制45℃以下，静置，滤过，低温干燥，即得。
研磨法取5倍量水与羟丙基-β-环糊精40g混合，再将穿心莲内4g溶于乙醇中，加入混合物中，在研磨机中充分研磨5小时，低温干燥，即得。
超声波法(参照专利申请号03111128公开的方法)；用蒸馏水配制浓度40-60％的乙醇溶液，将穿心莲内酯4g加入到醇溶液中，加热至60-75℃，使之溶解；羟丙基-β-环糊精40g与注射用蒸馏水溶解后加入到穿心莲内酯醇溶液中，移至超声波发生器中超声振荡30-45分钟，控制温度45℃以下，静置，低温干燥，即得。
喷雾干燥法将羟丙基-β-环糊精40g溶于水中，加热溶解成溶液，冷至室温，取穿心莲内酯4g加乙醇溶解，按穿心莲内酯羟丙基-β-环糊精(1∶10)的比例加入至的羟丙基-β-环糊精饱和溶液中，边加边搅拌，搅拌0.5小时后，进行喷雾干燥，喷雾干燥条件为进风口温度170℃～180℃，出风口温度70～80C，压力0.04-0.05MPa，即得。
分别测定以上四种方法所得穿心莲内酯包合物的包合率，结果见表1。
表1 不同方法包合率比较

由以上试验结果可知。以上四种方法中在主客体比例相同的情况下，包合率不尽相同，以饱和水溶液法包合率最高，说明穿心莲内酯用饱和水溶液法包合效果较好。
三、包合工艺羟丙基-β-环糊精最佳用量的确定为了进一步筛选本发明羟丙基-β-环糊精包合的最佳用量，根据上述试验用饱和水溶液法以下述试验设计对包合工艺最佳用量进行了进一步确定，分别测定包合率和穿心莲内酯利用率，结果见表2。
穿心莲内酯测定方法参照文献方法(傅欣彤，周富荣，张利民。高效液相色谱法测定制剂中穿心莲内酯的含量。中国中药杂志，1995，20(6)351-352)进行。
表2 不同羟丙基-β-环糊精用量包合效果比较

由以上试验结果可知，羟丙基-β-环糊精包合穿心莲内酯具有很强的选择性，客体的投入量对包合率有较大的影响，其中穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精比例为1∶10时比1∶8时包合率显著提高，继续增加比例至1∶18时，包合率都在90％以上，且比较稳定，而羟丙基-β-环糊精比例增加至1∶20后包合率反而降低，因此说明本发明穿心莲内酯用羟丙基-β-环糊精包合时的最佳用量为1∶10至1∶18。
四、稳定性实验实验药物本发明冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；市售莲必治注射液(无锡山禾药业股份有限公司)。
实验方法采用加速实验方法进行稳定性实验，将市售莲必治注射液和本发明穿心莲内酯冻干粉针剂放置在室温37℃，相对湿度为75％的条件保存，分别测定莲必治注射液的亚硫酸氢钠穿心莲内酯和本发明穿心莲内酯冻干粉针剂穿心莲内酯的含量并同0月比较。实验结果见表3
表2 药物干浸膏与单一基质的组合实验(药物干浸膏∶基质＝1∶3)

表3 药物干浸膏与单一基质的组合实验(药物干浸膏∶基质＝1∶9)

结论通过上述药理实验表明，本发明的穿心莲内酯冻干粉针剂与莲必治注射液、穿琥宁注射液比较具有更好的抗菌作用。
2.抗病毒作用实验方法取小鼠120只，雌雄各半，随机分为4组，每组30只，小鼠用乙醚轻度麻醉后，每鼠滴鼻给予滴度为1∶320鼠肺炎病毒0.04ml，次日腹腔注射给药，本发明穿心莲内酯冻干粉针剂组剂量为50mg/kg，莲必治注射液组给药剂量为100mg/kg，穿琥宁注射液组给药剂量为50 mg/kg，生理盐水组以0.2ml生理盐水腹腔注射，连续给药7d，观察20d，记录动物死亡数，结果见表5。
表5 对小鼠感染肺炎死亡率的影响

结论以上药理实验结果表明本发明穿心莲内酯冻干粉针剂能显著降低小鼠感染肺炎病毒死亡率，且具有比莲必治注射液、穿琥宁注射液更好的药理作用。
3.解热试验实验方法选取健康新西兰白兔50只，体重为1000-1250g，雌雄各半，实验当日测肛温3次，取平均值作为正常体温，然后于背部皮下注射5％酵母悬液5ml/kg，5小时后选择体温上升0.8℃以上的新西兰白兔40只，随机分为生理盐水组，莲必治注射液、穿琥宁注射液、本发明穿心莲内酯冻干粉针剂组，每组动物10只。给药组腹腔注射给药，本发明穿心莲内酯冻干粉针剂组给药剂量为50mg/kg，莲必治注射液组给药剂量为100mg/kg，穿琥宁注射液组给药剂量为50mg/kg，生理盐水组给予0.2ml生理盐水腹腔注射。给药后分别于1、2、3小时各测体温1次，比较各组动物体温下降值的差异，结果见表6。
表6对新西兰白兔的解热作用

注与生理盐水组比较*P＜0.05，**P＜0.01结论以上药理试验表明本发明穿心莲内酯冻干粉针剂具有较好的解热作用，且比莲必治注射液、穿琥宁注射液作用更强。
4.抗炎试验；实验方法取健康小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，分为生理盐水组、莲必治注射液组，穿琥宁注射液组，本发明穿心莲内酯冻干粉针剂组、给药组腹腔注射给药，本发明穿心莲内酯冻干粉针剂组给药剂量为50mg/kg，莲必治注射液组给药剂量为100mg/kg，穿琥宁注射液组给药剂量为50mg/kg，生理盐水组给予0.2ml生理盐水腹腔注射，每天给药1次，共7天，末次给药1h，用二甲苯棉球接触小鼠左耳约5s，15分钟后脱颈椎处死小鼠，剪下双耳，打孔称重，计算每组小鼠的耳肿胀度，并求抑制率，结果见表7。
表7 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

注与生理盐水组比较*P＜0.05，**P＜0.01结论以上药理试验表明本发明穿心莲内酯冻干粉针剂具有较好的抗炎作用，且比莲必治注射液、穿琥宁注射液作用更强。
六、制备实施例实施例1
(1)取穿心莲内酯50g，采用饱和水溶液法用羟丙基-β-环糊精进行包合称取羟丙基-β-环糊精，加蒸馏水加热溶解，配成饱和溶液，冷至室温，按照穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精＝1∶10的比例加入穿心莲内酯，边加边搅拌，搅拌时间2小时，温度控制45℃以下，静置，离心，滤过，低温干燥，得到穿心莲内酯包合物590g；(2)本发明的制剂的处方为穿心莲内酯包合物590g，甘露醇为60g。
(3)取穿心莲内酯包合物和药用辅料混合，加注射用水溶解完全，调节pH值为4-6，用0.22um的滤膜过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿心莲内酯冻干粉针剂1000瓶。
实施例2(1)取穿心莲内酯40g，采用饱和水溶液法用羟丙基-β-环糊精进行包合称取羟丙基-β-环糊精，加蒸馏水加热溶解，配成饱和溶液，冷至室温，按照穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精＝1∶15的比例加入穿心莲内酯，边加边搅拌，搅拌时间3小时，温度控制45℃以下，静置，离心，滤过，低温干燥，得到穿心莲内酯包合物600g；(2)本发明的制剂的处方为穿心莲内酯包合物600g，乳糖50g；(3)取穿心莲内酯包合物和乳糖混合，加注射用水溶解完全，调节pH值为4-6，用0.22um的滤膜过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿心莲内酯冻干粉针剂1000瓶。
实施例3(1)取穿心莲内酯30g，采用饱和水溶液法用羟丙基-β-环糊精进行包合称取羟丙基-β-环糊精，加蒸馏水加热溶解，配成饱和溶液，冷至室温，按照穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精＝1∶18的比例加入穿心莲内酯，边加边搅拌，搅拌时间4小时，温度控制45℃以下，静置，离心，滤过，低温干燥，得到穿心莲内酯包合物550g；(2)本发明的制剂的处方为穿心莲内酯包合物550g，果聚糖50g；(3)取穿心莲内酯包合物和果聚糖混合，加注射用水溶解完全，调节pH值为4-6，用0.22um的滤膜过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿心莲内酯冻干粉针剂1000瓶。
实施例4(1)取穿心莲内酯30g，采用饱和水溶液法用羟丙基-β-环糊精进行包合称取羟丙基-β-环糊精，加蒸馏水加热溶解，配成饱和溶液，冷至室温，按照穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精＝1∶10的比例加入穿心莲内酯，边加边搅拌，搅拌时间5小时，温度控制45℃以下，静置，离心，滤过，低温干燥，得到穿心莲内酯包合物290g；(2)本发明的制剂的处方为穿心莲内酯包合物290g，甘露醇80g，右旋糖苷30g；(3)取穿心莲内酯包合物和甘露醇、右旋糖苷混合，加注射用水溶解完全，调节pH值为4-6，用0.22um的滤膜过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿心莲内酯冻干粉针剂1000瓶。
实施例5(1)取穿心莲内酯40g，采用饱和水溶液法用羟丙基-β-环糊精进行包合称取羟丙基-β-环糊精，加蒸馏水加热溶解，配成饱和溶液，冷至室温，按照穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精＝1∶10的比例加入穿心莲内酯，边加边搅拌，搅拌时间3小时，温度控制45℃以下，静置，离心，滤过，低温干燥，得到穿心莲内酯包合物410g；
(2)本发明的制剂的处方为穿心莲内酯包合物410g，葡萄糖90g；(3)取穿心莲内酯包合物和葡萄糖混合，加注射用水溶解完全，调节pH值为4-6，用0.22um的滤膜过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿心莲内酯冻干粉针剂1000瓶。
实施例6(1)取穿心莲内酯40g，采用饱和水溶液法用羟丙基-β-环糊精进行包合称取羟丙基-β-环糊精，加蒸馏水加热溶解，配成饱和溶液，冷至室温，按照穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精＝1∶12的比例加入穿心莲内酯，边加边搅拌，搅拌时间4小时，温度控制45℃以下，静置，离心，滤过，低温干燥，得到穿心莲内酯包合物480g；(2)本发明的制剂的处方为穿心莲内酯包合物480g，甘露醇20g；(3)按照本发明制剂处方取穿心莲内酯包合物和甘露醇混合，加注射用水溶解完全，调节pH值为4-6，用0.22um的滤膜过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿心莲内酯冻干粉针剂1000瓶。
权利要求
1.一种穿心莲内酯冻干粉针剂，其特征在于制剂处方重量份组成为穿心莲内酯包合物29-60份，药用辅料2-11份。
2.根据权利要求1所述的一种穿心莲内酯冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤(1)取穿心莲内酯，采用饱和水溶液法称取羟丙基-β-环糊精，加蒸馏水加热溶解，配成饱和溶液，冷至室温，按照穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精＝1∶10-18的比例加入穿心莲内酯，边加边搅拌，搅拌时间2-5小时，温度控制45℃以下，静置，离心，滤过，低温干燥，得到穿心莲内酯包合物；(2)按本发明制剂处方取穿心莲内酯包合物和药用辅料混合，加注射用水溶解完全，调节pH值为4-6，用0.22um的滤膜过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿心莲内酯冻干粉针剂。
3.根据权利要求1所述的一种穿心莲内酯冻干粉针剂，其特征在于穿心莲内酯包合物用羟丙基-β-环糊精进行包合的比例为穿心莲内酯∶羟丙基-β-环糊精＝1∶10-18。
全文摘要
本发明公开了一种穿心莲内酯冻干粉针剂及其制备方法，其特征在于将穿心莲内酯活性成分，用经优选的方法和最佳用量的羟丙基－β－环糊精包合，提高了穿心莲内酯的稳定性、溶解度，与药用辅料混合，制备成冻干粉针剂。药理实验结果表明，本发明的穿心莲内酯冻干粉针剂，具有更好的药理作用。
文档编号A61P11/00GK1679546SQ20051000489
公开日2005年10月12日 申请日期2005年2月4日 优先权日2005年2月4日
发明者张海峰 申请人:张海峰