专利名称：减少患有缺血性心脏病患者的梗塞范围的方法
技术领域：
本发明涉及一种减少患有缺血性心脏病患者的梗塞范围的方法，其中所述的方法使用喹诺酮衍生物作为活性剂。I、喹诺酮类用下面通式(1)所代表的喹诺酮衍生物，以及其盐是本领域技术人员所熟知的(美国专利4,415,572，在此全部引用为参考文献)
其中R为苯甲酰基，它可任意选择在苯环上有低级烷氧基作为取代基，且喹诺酮结构3和4位上的C-C键是单键或双键。
现已发现这些喹诺酮是一种影响肌收缩力的口服药剂，即增强模型系统中的心肌收缩力而对心率或心肌氧消耗影响很少(Feldman等N.Engl.J.Med.，329149-155(1993))，并用于治疗充血性心脏衰竭的病人(美国专利4,415,572；and Hori等Jpn.Circ.J.，50659-666(1986))。几项研究表明上述的喹诺酮类能提高血流动力学指数和充血性心力衰竭病人的运动能力(Inoue等，HeartVessels，2166-171(1986)；Sasayama等，Heart Vessels，223-28(1986)；和Feldman等，Am.Heart J.，116771-777(1988))。另外，在日本和美国多个中心随机空白对照试验均证明这些喹诺酮类能提高充血性心衰病人的生活质量并减少死亡的危险(OPC-8212 Multicenter Research Group，Cardiovasc.Drugs Ther.，4419-425(1990)；Feldman等，Am.J.Cardiol.，681203-1210(1991)；和Feldman等，N.Engl.J.Med.，329149-155(1993))。
有关这些喹诺酮类影响肌收缩力特性的作用机理包括减少钾电流(Iijima等，J.Pharmaool.Exp.Ther.，240657-662(1987))，轻度抑制磷酸二酯酶和增加内部钙电流(Yatami等，J.Cardiovasc.Pharmacd.，13.812-819(1989)；和Taira等，Arzneimittelforschung，34347-355(1984))。但是，喹诺酮类减少死亡率最为有效的剂量(每天60mg)对血流动力学没有或很少起作用，这表明此药可能是通过另一种机理，而不是其增加肌收缩力的作用，来减少死亡率的(Feldman等，N.Engl.J.Med.，329149-155(1993)；和Packer，N.Engl.J.Med.，329201-202(1993))。
现在还已知上述的喹诺酮类通过刺激脂多糖的外周血单核细胞(PBMC)以剂量依赖的方式抑制各种细胞因子的产生，包括α-肿瘤坏死因子和白介素-6(Maruyama等，Biochem.Biophys.Res.Commcc.，1951264-1271(1993)；和Matsumori等，Circul.，89955-958(1994))。
而且，它们可导致伴有培养基集落形成单位减少的可逆的中性白细胞减少症(Feldman等，Am.Heart J.，116771-777(1988)；OFC-8212Multicenter Research Group，Cardiouasc.Drugs.Ther.，4419-425(1990)；Feldman等，Am.J.Cardio1.，681203-1210(1991)；和Feldman等，N.Engl.J.Med.，329149-155(1993))。
另外，发现上述的喹诺酮类可用于调节下垂蛋白(编制细胞死亡程序)治疗癌症、抑制肿瘤转移和RNA病毒复制(美国专利接序申请号07/989,028,1993年4月30日申请的，与欧洲专利公开号0552373一致，在此把二者全部引作参考文献；Nakai等，JPn.J.Cancer Res.，摘要，和Proc.Jpn.Cancer Assoc.，等581页(1993)；和Maruyama等，Biochem.Biophgs.Res.Comm.，1951264-1271(1993))。
上面的喹诺酮类也用于抑制DNA病毒复制，并且当与抗-RNA病毒组合物一同使用时，在抑制RNA病毒复制方面能产生协同作用(美国专利接序申请号08/282,707，1994年8月1日申请的；和PCT/US95/09141，1995年7月28日申请的)。
并且，还发现上述的喹诺酮类可用于以剂量依赖方式抑制哺乳动物细胞中存在的核苷和核碱基的转运，例如，腺嘌呤核苷，并用于扩大核苷类似物特别是3’-叠氮脱氧胸苷的磷酸化(美国专利接序申请号08/283,707,1994年8月1日申请的；和PCT/US 95/09141，1995年7月28日申请的)。另一方面，只有高浓度(超出治疗范围)的双嘧啶氨醇(10-100μm)即另一种核苷转运抑制剂，可抑制腺嘌呤核苷转运(Scholtissec等Biochem.Biophys.Acta，158435-447(1968)；和Plagemann等，J.Membr.Biol.，81255-262(1984))。
双嘧啶氨醇是通过阻制腺(嘌呤核)苷转运至细胞而使腺(嘌呤核)苷浓度局部升高(Plagemann等，Biochem.Biophys.Acta，947405-443(1988))。目前已知腺(嘌呤核)苷通过激活腺苷酸环化酶或通过抑制磷酸二酯酶能导致心肌细胞环腺苷酸的增加(Fox等Ann.Rev.Biochem.，47655-686(1978)；和Takeya等，Dryg Res.，34364-370(1984))，通过与细胞表面膜上的特殊腺(嘌呤核)苷受体结合扩张冠状动脉(Fox等，Ann.Rev.Biochem.，47655-686(1978))，增加脑血流(Heisted等，Am.J.physiol.，240775-780(1981))，减少α-肿瘤不死因子的产生(Parmely等，J.Jmmunol.，151389-396(1993))，和减少血小板凝集(Dawicki等，Biochem.Pharmacol.，343965-3972(1985))。
一般认为由喹诺酮导致的(腺嘌呤核)苷转运的抑制是其作用的另一新方面。也即是说，通过抑制腺(嘌呤核)苷转运，上述的喹诺酮可增加腺(嘌呤核)苷的血液浓度，这样解释了维纳啉酮充血性心脏疾病的某些治疗作用(Feldman等，N.Engl.J.Med.329149-155(1993)；和Packer，N.Engl.J.Med.，329201-202(1993))或者减少α-肿瘤坏死因子的产生(Marugame等，Biochem.Biophys.Res.Comm.，1951264-1271(1993)；和Matsumori等，Circul.，89955-958(1994))。II.缺血性心脏病虽然慢性心衰和缺血性心衰的病人均可出现心室机能障碍，但这两种心脏病的病理生理学是完全不同的。也即是说，对慢性心衰，由于交感神经调节的损伤以及血管紧张肽原酶-血管紧张肽和细胞因子系统的损害降低肌丝对Ca2+的应答。另一方面，对于缺血性心脏病，细胞的厌氧代谢产生可逆的和不可逆的细胞损伤，导致心室机能障碍。厌氧心肌代谢主要归因于冠脉血流调节的损伤。
已知喹诺酮能增加缺血区域内的冠状动脉血流，这或许是由于增加了主动脉血压和冠状动脉扩张功能(Maruyama等，J.Cardiovasc.Pharmacol.，8161-169(1986))。然而，主动脉血压的增加可引起冠状动脉血流增加，且可导致需氧量增多。这会减弱冠状血管舒张的有益效果。
但是，也发现喹诺酮在不改变心率或收缩压的情况下能改善运动所致的缺血，和阻止缺血的进一步发展(Kinoshita等，Respir.Circ.，361199-1203(1988))。虽然冠状动脉血流的增加暗示了心肌缺血的减轻，由于心肌缺血的程度是血流依赖性的，故梗塞范围不是由冠状血管舒张的能力所决定的。这是因为在心肌缺血过程中冠状动脉是完全闭合的。心肌梗塞的进展归因于ATP耗尽的速度，和缺血过程中的侧支血液的范围，和血小板与中性白细胞的活性、Ca+2和儿萘酚胺超载，以及氧自由基的生成。因此，由于冠状血管舒张而致的心肌缺血减弱不一定表示梗塞范围局限。
还发现喹诺酮能改善冠状动脉疾病患者运动过程中的ST段压低(Kinoshita等，见上所述)。心电图上ST-T水平的变化缘于细内外的Ca2+、K+、H+和Na+的平衡，心脏搏动、心室壁运动和缺血的出现(Noble等Cardiovasc.Res.，1213-17(1978))。因此，那并不表示喹诺酮能改善心肌缺血。即使由于喹诺酮引起冠状血管舒张而改善缺血范围内的心肌功能，缺血的减少并不表示梗塞范围的减少。这是因为不依赖多冠状态动脉血流的心肌坏死的病理的缘故。
本发明中，意外地发现喹诺酮能减轻心肌缺血和减少硬塞范围。令人惊讶的是喹诺酮属于增强肌收缩力剂，而众所周知增强肌收缩力剂会增大缺血的损害(Blaiklogk等，J.Mol.Cell.Cardiol.，10499-509(1987))。
本发明的一个目的是提供一种减少患有缺血性心脏病的患者梗塞范围的方法。
从下文提供的本发明的详细说明书中可以发现本发明的其它目的，通过使用下面通式(1)所代表的喹诺酮衍生物，及其盐可以看出
其中R为苯甲酰基，它任意选择在苯环上有低级烷氧基作为取代基，且喹诺酮结构3和4位上的C-C键为单键或双键。
在通式(1)中，在苯环上可有低级烷氧基作为取代基的苯甲酰基，包括任选1至3直链或支链C1-6烷氧基取代苯环的苯甲酰基，如苯甲酰基、2-甲氧苯甲酰基、3-甲氧苯甲酰基、4-甲氧苯甲酰基、2-乙氧苯甲酰基、3-乙氧苯甲酰基、4-乙氧苯甲酰基、4-异丁氧苯甲酰基、4-己氧苯甲酰基、3，4-二甲氧苯甲酰基、3，4-二乙氧苯甲酰基、3，4，5-三甲氧苯甲酰基、2，5-二甲氧苯甲酰基，等。
本发明的活性成分化合物(1)中最佳优选为3，4-二氢-6-[4-(3，4-二甲氧苯甲酰基)-1-哌嗪基]-2(1氢)-喹啉，如维纳啉酮。
上述的喹诺酮容易形成常用酸的一种盐。这种酸，可以是已提及的无机酸，例如硫酸、硝酸、盐酸和氢溴酸；和有机酸，如醋酸、对甲苯磺酸、乙烷磺酸、草酸、马来酸(顺丁烯二酸)、富马酸(反丁烯二酸)、柠檬酸、琥珀酸和苯甲酸。这些盐可以用作本发明的活性剂，正如总结构式(1)的自由化合物。
结构式(1)的化合物及其盐通常可配制成常用的药剂学制制。使用常用的填充物、补充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂以及类似稀释剂或赋形剂制备这种制剂。根据治疗的目的不同，这些药学制剂可以有不同选择的剂型，其典型的例子为片剂、丸剂、粉末、溶液、悬浮剂、乳剂、颗粒剂、胶囊、栓剂、注射剂(溶液、悬浮液等)和滴眼液。
对于制造片剂，可以使用本领域迄今众所周知的各种载体。因而，其使用包括，例如，赋形剂如乳糖、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、白陶土、结晶纤维素和硅酸；粘合剂如水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明胶溶液、羧甲基纤维素、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾和聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂如干淀粉、藻酸钠、粉末状琼脂、粉末状昆布多糖、碳酸氢钠、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、月桂基硫酸钠、硬脂酸单酸甘油酯、淀粉和乳糖；崩解抑制剂如蔗糖、硬脂糖、可可脂和氢化油；吸收促进剂如季铵碱和月桂基硫酸钠；湿润剂如甘油和淀粉；吸附剂如淀粉、乳糖、白陶土、膨胀润土和胶态硅石；以及润滑剂如精制滑石、硬脂酸盐、粉末状硼酸和聚乙二醇。需要时，片剂还可使用常用的包衣，如糖衣片，明胶衣片，肠衣片、涂膜片，或双包衣片或多层片。
对于制造丸剂，可以使用本领域众所周知的各种载体。实例有、赋形剂如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、硬化菜油、白陶土和滑石；结合剂如粉末状阿拉伯树胶、粉末状黄蓍胶、明胶和乙醇；以及崩解剂如昆布多糖和琼脂。
对于制造栓剂，可以使用已知的各种载体。例如，可以是上述的聚乙二醇、可可脂、高级醇、高级醇酯、明胶和半合成单酸甘油酯。
在制备注射剂时，优选经灭菌且与血液等渗的溶液或悬浮液，为了制备这种剂型，可以使用本领域常用的所有稀释剂。例如，可用水、乙醇、丙烯乙二醇、乙氧基异硬脂基醇、聚氧基异硬脂基醇和聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。在此情况下，药学制剂可包括数量足以形成等渗溶液的氯化钠、葡萄糖或甘油。也有可能加入常用的加溶剂、缓冲液、润肤剂或局麻剂等。
而且，需要时，本药剂学制剂可包含着色剂、防腐剂、芳香剂、增香剂、甜味剂等，以及其它药物。
本发明所使用的这些药剂学制剂中的活性成分化合物的比例并不是关键的，可以在较宽的范围内适当地选择。但是一般地，建议可以在约1.0至70％wt的范围内选择此比例，优选约1.0至约30％wt。
本发明的药剂学制剂的使用方法也不是关键的，但它是依据剂型，患者年龄、性别和其它因素，以及所治疾病的轻重而选择的。因此，例如当所提供的剂型为片剂、丸剂、溶液、悬浮剂、乳剂、颗粒剂或胶囊时，本制剂为口服使用。注射液为静脉内给药，或单独使用或者与用于非肠道注射的常用液体包括葡萄糖、氨基酸等混合使用。如需要，这些溶液也可按肌内、皮内、皮下或腹膜内的途径给药。栓剂为直肠给药，滴眼液是向眼中滴洗液。
由于上述药学制剂的用量是依据给药方法、患者的年龄、性别和其它因素、疾病的轻重等而决定，通常建议每天每公斤体重给予约0.5至30mg活性成分，即化合物(1)。包含在每个剂量单位中的活性成分的数量约为10至1000mg。剂型实例13，4-二氢-6-[4-(3，4-二甲氧苯甲酰基)-1-哌嗪基]-2(1氢)-喹啉 150gAvicel(商标，Asahi Chemical Indutry，Co.，Ltd)40g玉米淀粉 30g硬脂酸镁 2g羟丙基甲基纤维素 10g聚乙二醇6000 3g蓖麻油40g甲醇 40g将上面的活性成分Avicel、玉米淀粉和硬脂酸镁混合并一同研磨，用半径为10mm的糖衣丸冲压机将所得的混合物压模。这样得到的片剂被一层膜包衣组合物包着，这种组合物包括形成涂膜片剂的羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇6000、蓖麻油和甲醇。剂型实例23，4-二氢-6-[4-(3，4-二甲氧苯甲酰基)-1-哌嗪基]-2(1氢)-喹啉150g柠檬酸 1g乳糖33.5g磷酸二钙70gPluronic F-68 30g月桂基硫酸钠15g聚乙烯吡咯烷酮 15g聚乙二醇(Carbowax 1500) 4.5g聚乙二醇(Carbowax 6000) 45g玉米淀粉30g干燥月桂基硫酸钠3g干燥硬脂酸镁3g甲醇 适量将上面的活性成分柠檬酸、乳糖、磷酸二钙、Pluronic F-68和月桂基硫酸钠混合。
用60孔筛选粒后，用含聚乙烯吡咯烷酮、Carbowax 1500和Carbowax 6000的乙醇溶液经湿法使混合物粒化。需要时，加入乙醇以使粉末形成糊状块。然后，加入玉米淀粉，继续混和直至形成均一的颗粒。然后将混合物通过一个10孔筛，放在盘中并置于保护100℃的烤箱中干燥12-14小时。将干燥的颗粒径16孔筛筛滤，然后加入干燥月桂基硫酸钠和干燥硬脂酸镁，混和后，将混合物压成所需大小并用制片机使成形。
将上述的药心用涂剂处理并用滑石覆盖以避免吸潮，然后制备内涂层。重复使用涂剂包衣数次足以用作内服使用。通过使用更深一层的内涂层和光滑包衣使片剂变得完全圆滑。使用着色剂直至得到所需的颜色。干燥后，包衣片被磨光成均一光滑的片剂。
下面的实施例仅供举例说明本发明的目的，决不是要限定本发明的范围。
实施例1维纳啉酮对血液中腺苷浓度的影响静脉内给予30mg/kg的戊巴比妥钠使重量为15-20kg的杂种狗麻醉。然后，给动物的气管插管，并用混有氧气的室内气给动物换气。接着，经过左侧第五肋间隙打开胸腔，其心脏悬浮在心包支架中。给每只动物的左前降支冠状动脉(LAD)插套管，并通过体外旁通管经左侧颈动脉使其充满血液。
在冠状动脉套管顶端监视冠状动脉灌流压(CPP)。
用系在旁通管上的电磁流动探针测定灌流区域的冠状动脉血流(CBF)。
将一小而短的收集管(直径1.0mm和长7.0cm)插入灌流区域中央的小冠状静脉中，以取冠状血液的样。将排出的静脉血收集在与左心房在同一高度的池中，并使其返回颈静脉。
用酶测定法(Bergmeyer，Methods of EnzymaticAnalysis，Academic Press，New York(1963)，第266-270页)测定血液中的乳酸浓度，计算乳酸浸出率，根据增加100倍且被动脉乳酸浓度分开的冠状动静脉的乳酸浓度的不同来计算。
为监视狗的状况，用AP-641G血压放大器(Nihon Koden)测量其血压，对全身的血液取样用ABL300气体分析仪(Radiometer，Copenhagen)分析，包括PH值和氧分压。
用一咬合器使灌流管产生一定量的狭窄，限定狭窄的程度为使冠状动脉血流减少至对照血流的33％和60％。此过程之后，合紧此咬合器产生稳定的灌流减少共10分钟，在开始夹紧冠状动脉泵后20分钟进行各变量的测定。
上述测定后，将维纳啉酮的赋形剂(1.0％(V/V)二基亚砜，DMSO)注入左前降支冠状动脉中5分钟，测定上述所有的血流动力学和代谢参数。
如此，使用输注泵将0.54mg/ml维纳啉酮注入左前降支冠状动脉，注入速率为0.2-0.5ml/min以便达到15μg/ml。注入后5分钟和10分钟再次测定上述所有的血流动力学和代谢参数。
通过将1.0ml血吸入一注射器中测定腺苷的血液浓度，此注射器含有0.5ml的0.02％(w/v)双嘧啶氨醇和100μl的500mM依地酸中的0.1mg/ml 2’-脱氧助间型霉素的溶液，以阻止血红细胞摄取腺苷和腺苷的降解。离心过滤后(3000xg)，收集上清液并用放射免疫法测定其腺苷浓度。特别地，用含40mg琥珀酸酐和0.4mg三乙胺的100μl二噁烷使100μl血浆中的腺苷琥珀一酰化。在4℃孵育20分钟后，用100μl稀释的抗腺苷血清(Yamasa-Shyoyu，Chiba，Japan)和100μl的0.5pmol腺苷2’，3’-氧-二琥珀酰 -3[125I]碘酪氨酸甲基酯稀释此混合物。将混合物置于冷水浴(4℃)中18小时，然后加入500μl第二抗体溶液(山羊抗兔Ig G)抗血清。于4℃温育60分钟后，通过以3000rpm(2,500xg)于4℃离心过滤20分钟去除未反应的物质。用r计算器计算留在管中的放射活性。据报道在这种血液取样过程中的腺苷降解可以忽略不计(Yamane，J.Immunol.，12501-519(1991)；Sato等，Ann.Biochem.，121409-420(1982)；Hori等，Am.J.Physiol.，25014509-14518(1986)；和Kitakaze等，Circ.Res.，60631-630(1987))。使用特殊抗体，测定5.0pmol/ml如此低的腺苷此方法也很敏感。观察到内测定和间测定的可变系数分别为1.3-3.1％和4.1-4.9％。这种用于腺苷测定的敏感放免测定法不需去除蛋白，它通常用在腺苷的高压液相层析测定中。一只代表性狗的结果如下表1所示。
表1时间(分)冠状动脉血流(ml/min)乳酸浓度(mg/dl) 腺苷浓度(pmol/ml)021 16.4 9.3灌流减少开始20 12 17.1 15.0二基亚砜25 12 17.0 14.0维纳啉酮30 12 16.7 23.8维纳啉酮35 12 16.7 24.2如上表1所示，当冠状动脉灌流压从96降至53mmHg，冠状动脉血流则减至基线血流的60％，冠状静脉血中的腺苷浓度增高了。另一方面，由于整个研究过程中冠状动脉灌流压减少，冠状动脉血中的乳酸浓度(19.5mg/dl)和腺苷浓度(7.2pmol/ml)并不改变。此后，冠状动脉血流保持恒定。冠状动脉灌流减小过程中的二基亚砜的注入并不引起冠状动脉灌流压或冠状静脉血中的乳酸和腺苷浓度的任何改变。
但是，如上表1所示，在注入维纳啉酮过程中，尽管冠状静脉血中的冠状血流和乳酸浓度无改变，而冠状静脉血中的腺苷浓度升高了。虽然，由于腺苷的冠状血管舒张作用冠状动脉灌流压降低了(从53至51mmHg)。这些结果表明维纳啉酮有提高缺血心肌的腺苷释放的作用。
实施例2维纳啉酮对冠状动脉血流的影响用咬合器夹在上述狗的体外旁通管上，减小冠状灌流压以使冠状动脉血流减至对照的冠状动脉血流的60％。测定低冠状动脉灌流压后，调节咬合器使冠状动脉灌流压保持恒定在低水平。开始灌流减少10分钟后测定上述所有血流动力学参数，以及冠状动脉和静脉血的代谢参数。这些测量之后，将维纳啉酮的赋形剂(1.0％(v/v)二基亚砜DMSO)注入左前降支冠状动脉，注入后5分钟测定上述所有的血流动力学和代谢参数。接着，用一输注泵，将0.54mg/ml维纳啉酮注入左前降支冠状动脉，注入速率为0.2-0.5ml/分，以便达到15μg/ml。注入后5分钟和10分钟再次测定所有血流动力学和代谢参数。一只代表性狗的结果如下表2所示。
表2乳酸浓度(mg/dl)时间(分)冠状血流冠状静脉血冠状动脉血(ml/分)0 20 10.6 13.1灌流减小开始10 12 13.8 13.1二基亚砜15 12 14.0 12.9维纳啉酮20 13 11.5 13.2维纳啉酮25 14 10.8 13.2如上表2所示，当冠状动脉灌流压状93减至59mmHg时，冠状动脉血流减至基线血流的60％，冠状静脉血的乳酸浓度增加了，但冠状动脉血中的乳酸浓度无变化。此后，冠状动脉灌流压保持恒定。二基亚砜不改变冠状动脉血流或冠状动脉血的乳酸浓度。但是，维纳啉酮增加冠状动脉血流，并减少冠状静脉血的乳酸浓度。这些结果表明维纳啉酮能增加缺血心肌的冠状动脉血流，例如冠状血管舒张，并减少缺血的严重性。
实施例3维纳啉酮对梗塞范围的影响用腺苷灌注可显著限定梗塞范围(Olafsson，Circ.，761135-1145(1987))，如上面实施例1所述，维纳啉酮能增加腺苷的血液浓度。因此，进行实验以确定维纳啉酮是否也能引起梗塞范围减小。
更为具体地，分离上述狗的左前降支冠状动脉并将一条潮湿脐带经绕冠状动脉管以形成闭塞。通过将脐带放进一根小塑料管并给塑料管施压完成冠状动脉闭塞。为了测定局部血流，将导管插入左心房以便微球体注射。
用微球体技术测定局部冠状动脉血流，它使用由以不同的稳定重元素标记的惰性塑料组成的无放射活性的微球体(S ekisui Plaztic Co.，Ltd.，Tokyo，Japan)，如Mori等，Am.，J.Physiol.，263141946-141957(1992)所述。
更为特别地，使用平均直径为15μm以溴或锆标记的微球体。溴的特别重力为1.34，锆为1.36。微球体悬浮在含0.01％(v/v)吐温80的等渗盐水中以防凝聚。注射前，将微球体超声处理5分钟，接着立即涡旋5分钟。将1.0ml微球体悬浮液(2-4×106球体)注入左心房，然后注入5.0ml温(37℃)盐水。冠状动脉闭塞开始后80分钟给予微球体。给予微球体之前，以8.0ml/分的不变速率从股动脉收集参比血流样本2分钟。用PW1480波长分散光谱计(Phillips Co.，Lte.，Almelo，The Netherlands)测定稳定重元素的X线萤光。当微球体被原发X线光束照射时，电子落回到较低的轨道并发出带有每个元素的特征性X线荧光能量含量的可测能量。因此，可以鉴别单一混合物中数种标记的球体的X线荧光。根据下面公式计算局部冠状动脉血流时间流动＝(组织计数)×(参比流动)/(参比计数)，且表示为ml/分/克净重。
作为对照，血流动力稳定20分钟后，将左前降支冠状动脉闭塞90分钟井再灌流6小时。使用一种灌注泵，冠状动脉闭塞前20分钟，和冠状动脉闭塞90分钟后1小时的再灌流过程中，以0.2-0.5ml/分的灌流速率灌流0.90mg/ml维纳啉酮，以便达到15μg/ml。
再灌流6小时后，当左前降支冠状动脉再闭塞并用自身血液灌流时，将偶氮蓝染料注入全身静脉中以确定心脏解剖的危险区域和非缺血区域。然后立即摘除心脏，切片成宽度为6-7mm的连续横向切片。非缺血区域以蓝染色鉴别，将缺血区域放在0.1M磷酸缓冲液(PH7.4)的1.0％(w/v)2，3，5-氯化三苯基四唑(TTC，Sigma Chemical Co.)中于37℃温育20-30分钟。TTC使非梗塞心肌染成砖红色，表明有甲析出，这是可见组织中的脱氢酶使TTC减少的结果。梗塞范围以危险区域的面积百分比计算。结果如表3所示。
表3治疗 侧支血流危险区域(％)梗塞范围(％)(ml/分/100克)二基亚砜7.2±1.1 40.2±2.3 43.5±3.2(n＝5)维纳啉酮7.8±1.3 41.1±2.4 6.9±3.9(n＝3)维纳啉酮6.9±1.8 40.9±3.8 35.0±4.3(n＝5)盐水 8.2±2.0 41.8±3.3 45.0±4.2(n＝5)8-磺苯基萘碱7.2±1.7 38.9±2.1 48.1±4.5(n＝5)如表3所述，尽管缺血过程中的侧支血流和二基亚砜组与维纳啉酮组的危险区域没有显著性差异，而给予维纳啉酮能显著减少梗塞范围。
在给用维纳啉酮治疗的狗的冠状动脉内灌注25μg/kg/分的8-磺苯基萘碱后20分钟，维纳啉酮的这种限制梗塞范围的作用则完全消失了。8-磺苯基萘碱是一种腺苷受体拮抗剂。因而，通过增加缺血心脏的腺苷释放可以介导维纳啉酮的限制梗塞范围的作用。
另一方面，当冠状动脉闭塞前20分钟，和冠状动脉闭塞90分钟后的1小时再灌流过程中，以0.2-0.4ml/分的灌注速率灌注10μg/kg/分的核苷转运抑制剂双嘧啶氨醇时，发现梗塞范围显著地减小。
上述结果清楚地表明，影响肌收缩力剂维纳啉酮意外且显著减小梗塞范围。
已知双嘧啶氨醇增加缺血心脏的腺苷释放，减少梗塞范围较维纳啉酮少。虽然，和维纳啉酮一样双嘧啶氨醇是一种腺苷核苷转运抑制剂，这些结果似乎表示维纳啉酮和双嘧啶氨醇的作用部位和组织亲和性是不同的，这可解释未预料的限定梗塞范围作用的效价不同。
由于本发明已详细并根据特别的实例进行了说明。显然对于本领域普通技术人员来说，在没有脱离本发明的实质和范围的情况下可以对其作不同的变化和改进。
权利要求
1 一种以结构式(1)所代表的喹诺酮衍生物或其药剂上可接受的盐用于制备减小患有缺血性心脏病患者的梗塞范围的药剂。
其中R的苯甲酰基，它可任意选择在苯环上有低级烷氧基作为取代基，且喹诺酮结构3和4位上的C-C键是单键或双键。
2 根据权利要求1所述的用途，其中结构式(1)中的R为在苯环上可以选择1-3直链或支链C1-6烷氧基的苯甲酰基。
3 根据权利要求1所述的用途，其中所述的喹诺酮的3，4-二氢-6-[4(3，4-二甲氧苯甲酰基)-1-哌嗪基]-2(1氢)-喹啉或其药剂上可接受的盐。
4 一种用于减小患有缺血性心脏病患者的梗塞范围的药物组合物，它包括药学有效量的权利要求1所述的结构式(1)所代表的喹诺酮衍生物，或其药学上可接受的盐和稀释剂或赋形剂。
5 根据权利要求4所述的药物组合物，其中结构式(1)中的R为在苯环上可以选择含1-3直链或支链C1-6烷氧基的苯甲酰基。
6 根据权利要求4所述的药组合物，其中所述的喹诺酮为3，4-二氢-6-[4-(3，4-二甲氧苯甲酰基)-1-哌嗪]-2(1氢)-喹啉或其药剂上可接受的盐。
7 权利要求1所述的结构式(1)所代表的喹诺酮衍生物或其药学上可接受的盐，用于减小患有缺血性心脏病患者的梗塞范围。
8 根据权利要求7所述的喹诺酮衍生物，其中结构式(1)中的R为在苯环上可以任意选择含1-3直链或支链C1-6烷氧基的苯甲酰基。
9 根据权利要求7所述的喹诺酮衍生物，它是3，4-二氢-6-[4-(3，4-二甲氧苯甲酰基)-1-哌嗪基]-2(1氢)-喹啉或其药剂上可接受的盐。
全文摘要
本发明公开了一种用于减小患有缺血性心脏病的患者的梗塞范围的方法，其中所述的方法使用喹诺酮衍生物作为活性剂。
文档编号A61P9/10GK1157718SQ9612135
公开日1997年8月27日 申请日期1996年12月12日 优先权日1995年12月12日
发明者北风政史 申请人:大制药株式会社