专利名称：一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂的制作方法
技术领域：
本发明公开一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，不含动物源性组分， 用于疫苗冻干保护，属于疫苗生产技术领域。
背景技术：
预防性疫苗的应用使常见流行性传染病得到了有效的控制，使得上述传染性 疾病的发病率和死亡率大幅降低。但是，在疫苗的流通领域中发现，疫苗的储存、运输和临 床使用过程中，存在诸如稳定性差、有效期短、不良反应率高以及潜在的隐性危害等问题。 随着生物科技的飞速发展及对不良反应诱因的深入研究，发现很多问题与疫苗的保护剂和 佐剂有直接的关系，尤其是冻干产品中保护剂的组成物。首先，组成物中明胶或明胶的衍生 物能直接弓I起被接种者的变态反应。1993年，Ke 1 so等报道，有些孩子对MMR联合疫苗过敏 是由于疫苗中的明胶在被接种者机体内产生抗明胶分子的IgE抗体所致。明胶既可以引起 细胞介导免疫反应，也可以引起非细胞介导免疫反应；另外，明胶也是细菌内毒素的主要来 源，可导致人体产生发热反应。其次，组成物中人血白蛋白虽然源于检测合格的健康人血， 但是由现在检测技术水平的限制，可影响某些病原体的检测如肝炎方面等，由此可能对疫 苗造成隐性污染，最终对被接种者造成潜在的危害。因此必须开发无明胶、人血白蛋白的冻 干保护剂。现有疫苗产品的冻干保护剂多数是以明胶、人血白蛋白以及部分糖类为主要成 分。随着国家对疫苗质量要求的逐步提高，行业中对保护剂中去除明胶或人血白蛋白意愿 更加迫切。

发明内容
本发明公开一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，解决了动物源性组分 可能对疫苗造成隐性污染问题。本发明的无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，以下主要物质在冻干制品中 的终浓度(g/1)为
右旋糖酐(40)10-60、蔗糖10-60、乳糖10-50、甘露醇5-30、甘氨酸5-20、精氨酸1-10、 谷氨酸钠1-10、尿素1-10、199综合培养基1-50。本发明所述无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，以下主要物质在冻干制品 中的优选终浓度(g/1)为
右旋糖酐(40) 50、蔗糖50、乳糖20、甘露醇10、甘氨酸10、精氨酸1. 85、谷氨酸钠 9. 2、尿素4. 6、199综合培养基2。本发明所提供的冻干保护剂的渗透压在300 - 450m0sm范围内。本发明所提供的冻干保护剂pH在7. 2-7. 8范围内。本发明所提供的冻干保护剂的保存条件为2_8°C或室温条件。本发明所述无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂的制备方法，其特征在于按比例称取以上物质充分溶解于适量灭菌注射用水后，然后定容，測定滲透压并在 300-450mosm范围内，同时用IN盐酸调整pH并在7. 2-7. 8范围内，最后除菌过滤，既得。本发明的积极效果在于保护剂不含动物源性组分，并且使疫苗的内毒素含量大 幅降低，极大地降低了对人体的刺激性及危害性，赋予疫苗更好的安全性、稳定性；同时本 发明的保护剂由于未使用诸如海藻糖等价格昂贵的原材料，因此具有成本低的优势，更适 合于产业化。
具体实施方式
实施例I
称取以下物质(g/1)为右旋糖酐(40) 50、蔗糖50、乳糖20、甘露醇10、甘氨酸10、 精氨酸I. 85、谷氨酸钠9. 2、尿素4. 6、199综合培养基2，将上述物质充分溶解于适量灭 菌注射用水后，然后定容，測定渗透压并在300-450mOsm范围内，同时用IN盐酸调整pH并 在7. 2-7. 8范围内，最后除菌过滤，既得。
实施例2
称取以下物质(g/1)为右旋糖酐(40) 20、蔗糖30、乳糖10、甘露醇5、甘氨酸5、精 氨酸I. 85、谷氨酸钠9. 2、尿素4. 6、199综合培养基2，将上述物质充分溶解于适量灭菌 注射用水后，然后定容，測定渗透压并在300-450mOsm范围内，同时用IN盐酸调整pH并在 7. 2-7. 8范围内，最后除菌过滤，既得。实施例3
称取以下物质(g/1)为右旋糖酐(40) 60、蔗糖60、乳糖25、甘露醇15、甘氨酸15、 精氨酸I. 85、谷氨酸钠9. 2、尿素4. 6、199综合培养基2，将上述物质充分溶解于适量灭 菌注射用水后，然后定容，测定渗透压并在300-450mOsm范围内，同时用IN盐酸调整pH并 在7. 2-7. 8范围内，最后除菌过滤，既得。对照实施例
称取以下物质(g/1)为鹿糖70g/l、明胶8g/l、人血白蛋白10g/l、精氨酸0. 5g/l、谷 氨酸钠3g/l、尿素0. 5g/l、199综合培养基lg/1，将上述物质充分溶解于适量灭菌注射用水 后，然后定容，测定渗透压并在300-450mOsm范围内，同时用IN盐酸调整pH并在7. 2-7. 8 范围内，最后除菌过滤，既得。以下试验表明本发明冻干保护剂的积极效果
试验例I
I.以人胚肺二倍体细胞为培养基质，制备水痘病毒培养物，以适量的实施例I配制的 保护剂与水痘病毒培养物混合，此混合物经-70°C以下冻融、超声破碎细胞、过滤收集上清 液，即为原液。2.原液按姆人份0. 58ml的装量分装于西林瓶中，一部分全加塞保存4°C做疫苗 冻干前感染性滴度的检测，另一部分经半加塞后置于冻干箱内，准备冻干。3.按步骤2所得的疫苗在冻干箱内预冻至_45°C并在此温度保温2小吋，然后抽 真空至0. Imbar,同时隔板升温至_28°C开始一次升华，于33°C控温15小吋，即完成冻干。4.将上述冻干前及冻干后的疫苗分别进行渗透压、水分、内毒素含量、冻干前后 滴度下降、2-8 V稳定性、37 0C稳定性检测。试验例2按照试验例1所提供的方法制备疫苗及冻干并完成留样，所不同的是保护剂采用实施 例2配制的保护剂。同时按试验例1所进行的检定项目完成各项检定。试验例3
按照试验例1所提供的方法制备疫苗及冻干并完成留样，所不同的是保护剂采用实施 例3配制的保护剂。同时按试验例1所进行的检定项目完成各项检定。对照试验例
按照试验例1所提供的方法制备疫苗及冻干并完成留样，所不同的是保护剂采用对照 实施例配制的保护剂。同时按试验例1所进行的检定项目完成各项检定。试验例的检定结果
对上述试验例和对照试验例的疫苗样品分别进行渗透压、水分、内毒素含量、冻干前后 滴度下降、2_8°C稳定性、37°C稳定性检测，具体结果如下
1.本发明的保护剂制备的水痘疫苗渗透压指标的评价
将试验例及对照试验例制备的疫苗部分样品按《中国药典》三部附录V H提供的方法 分别进行渗透压测定。结果表明，本发明的保护剂的疫苗水分均在300-450m0sm范围内，远 远低于含明胶及蛋白保护剂的疫苗。结果见下表。
权利要求
1.一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，以下主要物质在冻干制品中的终浓度(g/1)为 右旋糖酐(40) 10-60、蔗糖10-60、乳糖10-50、甘露醇5-30、甘氨酸5-20、精氨酸1-10、谷氨酸钠1-10、尿素1-10、199综合培养基1-50。
2.权利要求I所述无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，以下主要物质在冻干制品中的优选终浓度(g/1)为 右旋糖酐(40) 50、蔗糖50、乳糖20、甘露醇5、甘氨酸5、精氨酸I. 85、谷氨酸钠9.2、尿素4. 6、199综合培养基2。
3.根据权利要求I或2所述无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂的制备方法，其特征在于 按比例称取以上物质充分溶解于适量灭菌注射用水后，然后定容，測定滲透压并在300-450mosm范围内，同时用IN盐酸调整pH并在7. 2-7. 8范围内，最后除菌过滤，既得。
全文摘要
本发明公开一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，由右旋糖酐(40)、蔗糖、乳糖、甘露醇、甘氨酸、精氨酸、谷氨酸钠、尿素、199综合培养基等构成保护剂，本发明不含动物源性组分，并且使疫苗的内毒素含量大幅降低，极大地降低了对人体的刺激性及危害性，赋予疫苗更好的安全性、稳定性；同时本发明的保护剂由于未使用诸如海藻糖等价格昂贵的原材料，因此具有成本低的优势，更适合于产业化。
文档编号A61K39/00GK102657870SQ20121017970
公开日2012年9月12日 申请日期2012年6月4日 优先权日2012年6月4日
发明者张勇, 李生军, 梁慧颖, 梁雪, 邹勇, 郑晓丽, 郝宝双, 隋波 申请人:长春祈健生物制品有限公司