专利名称：Tnf结合肽和tnfr1封闭肽及其在治疗溃疡性结肠炎中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术，特别涉及能拮抗肿瘤坏死因子-α (TNF-α)生物学活性的 TNF结合肽、TNFRl封闭肽等小分子多肽及TNFRl封闭肽-Fc融合蛋白。
背景技术：
TNF-α是一类重要的促炎症细胞因子，是促炎细胞因子瀑布反应中的起始因子， 可促进一系列促炎细胞因子(如IL-l、IL-6、IL-8等)的释放。临床研究证实在多种感染或非感染性炎症及其并发症(如类风湿性关节炎等自身免疫病、内毒素休克、急性肝坏死、 Crohn' s病等)的发生和发展中，全身或炎症局部TNF-a产生增加起着关键作用；体内 TNF-α水平过高，往往预示病人预后不良。在动物实验中，单一应用大剂量TNF-α即可直接导致内毒素样休克，而用抗TNF抗体则可减轻及阻止内毒素性休克的发生。转TNF-α基因小鼠易患慢性关节炎；最近报道给大鼠输入TNF-α可诱导胰岛素抵抗，此为II型糖尿病发生的重要机制。(Williams R0, Methods Molecular Biology, 2006, 361 265-284 ；Yano Y 等，Diabetes Care, 2004, 27 (3) :844_845。)与TNF发病相关的疾病的发病率在国内外呈大幅度上升的趋势。例如，全球II型糖尿病患者总人数已超过1. 5亿人，预计到2025年将达到3亿人；在我国大城市中，20岁以上人群的II型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)发病率达到10%，另有10%为糖调节异常，即每5个成年人中就有一个糖代谢异常。在我国，目前已有类风湿性关节炎患者400 万以上，患病率达总人口的0.32-0. 34%，Crohn' s病(人群溃疡性结肠炎)、银屑病、强直性脊柱炎以及系统性红斑狼疮等的与TNF发病相关的疾病的发病率在我国正在逐年上升。由于TNF-α在多种疾病中有重要的致病作用，因此，以TNF-α或TNF受体为靶点设计药物，有效阻断上述病理过程，治疗TNF相关疾病，成为国际药学界研究开发的热点(Steed Paul M 等，Science，2003，301，1895 1898 ；Scott D. L.等，The New England Journal of Medicine, 2006, 355 :704-712)。目前，国际上已获 FDA 和 EMEA (European Medicines Evaluation Agency)正式批准，在美国和欧洲已进入临床试用阶段的抗TNF-α 试剂主要有抗TNF抗体鼠人嵌合单克隆抗体(IgGl)，商品名为infliXimab、cA2、Remicade 或 Centocor，(Centocor, Inc, Malvern, PA, FDA licensed. #1242，8/24/1998)静脉注射，人源化抗 TNF 抗体 adalimumab (商业名Humira，CDP571 License 12/2002)，全人源化抗体 (D2E7)也已问世。可溶性TNF受体TNFRl-Fc融合蛋白(Etanerc印t、Enbrel或Immunex) (Immunex Corp, Seattle, WA, License#1132，6/6/2000)。上述商品化的抗TNF- α试剂(抗TNF抗体、可溶性TNF受体)虽然已取得较好的临床治疗作用，但仍然存在一系列问题，如存在潜在的副作用、来源受到限制、生物稳定差、价格昂贵等。目前，临床试验已发现上述抗TNF-α试剂(抗TNF抗体、可溶性TNF受体)存在导致红细胞和血小板减少、结核感染、上呼吸道、尿路感染、皮疹、发热、低/高血压等副作用，严重者有可引发肿瘤。目前，研究开发安全性好、毒副作用小、成本低的小分子 TNF-α 拮抗剂已受到人们的关注。(Steed Paul Μ.等，Science，2003，301，1895 1898 ； Gonzale-Rey E 等，Proc Natl Acad Sci USA，2006，103 (11)4228-4233。)
噬菌体表面呈现技术(phage display techniques, PDT)是九十年代初发展起来的一项新兴技术(Lowman H. B.等.Annu. Rev. Biophys. Biomol Struct 1997 ；26 401-24)， 是研究蛋白质分子之间相互作用的一个有效工具。PDT所得到的肽均是来源于噬菌体肽库，氨基酸序列分析得到肽的序列，人工合成进行机制研究。随着肽库构建及筛选技术的不断发展、完善，使其对研究蛋白质识别机制、确定抗原决定簇、药物设计、疫苗研制等方面提供了全新的思路与先进的手段。现有的噬菌体随机肽文库主要有两种非限制性肽库(线性肽库)和限制性肽库(例如半胱氨酸环限制的肽库、引入α-螺旋等二级结构的突变库等)。一般研究所选用的噬菌体随机肽库都是线性的。

发明内容
本发明一方面选择噬菌体12线肽库，以rhTNFRl为诱饵，从中钓取出一条线性的 12肽，该肽可与TNFRl结合，竞争性抑制TNF- α与TNFRl的结合，从而拮抗TNF- α的生物学效应，我们将此肽命名为“TNFR1封闭肽”。但人工合成短肽的成本昂贵，且短肽在人体内的半衰期较短，从而制约其临床应用。为了克服这些缺陷，本发明又在此工作的基础上，构建TNFRl封闭肽-Fc融合蛋白表达载体PIG/3C-TNFR1BP，并借助可高表达外源蛋白的真核细胞C0S7成功表达TNFRlBP/hFc融合蛋白。体外实验证实这种融合蛋白也能有效地竞争性抑制TNF-α与TNFRl结合，从而发挥拮抗TNF-α生物学活性的作用；体内实验也证实这种融合蛋白能预防和治疗高脂高糖诱导的肥胖和胰岛素抵抗大鼠模型。另一方面，由于与线肽库相比噬菌体随机环肽库具有以下优点(1)由于环肽固定了两个半胱氨酸残基，附加二硫键的限制可以帮助维持肽的折叠结构。因此，环肽库比线性肽库更可能筛选到高亲和力、高特异性的肽。因为它经历了构象的选择，使之尽可能与靶分子表面和内部结合。(2)环肽由于其构象的复杂性，故其降解速度较线肽慢，使之半寿期明显延长。(3)由于受到转化效率的影响，噬菌体肽库不可能达到完全的随机化，各种肽库的多样性就存在差异。因此，本发明又选择噬菌体C7C环肽库，分别以rhTNF-α和rhTNFRl 为诱饵，从该环肽库中筛选TNF结合肽和TNFRl封闭肽。通过体外实验证实这两种环肽能抑制TNF-α介导的生物学效应；体内实验证实这两种环肽抑制三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎。本发明的目的在于提供一种TNFRl封闭肽(线12肽)和TNFRl封闭肽-Fc融合蛋白。本发明的目的还在于提供编码所述TNFRl封闭肽和TNFRl封闭肽-Fc融合蛋白的核酸分子。本发明目的还在于提供制备本发明融合蛋白的方法。本发明的目的还在于提供一种TNF结合肽(环9肽)与一条TNFRl封闭肽(环9肽)。本发明的目 的还在于提供上述TNF结合肽(环9肽)与TNFRl封闭肽(环9肽) 的核酸分子。本发明的目的还在于将上述TNF结合肽(环9肽)和TNFRl封闭肽(环9肽)应用于治疗溃疡性结肠炎；将TNF- α受体1封闭肽用于治疗关节炎；将TNFRl封闭肽-Fc融合蛋白用于治疗II型糖尿病。本发明技术方案内容如下一、TNFRl封闭肽(12线肽)和TNFRl封闭肽-Fc融合蛋白1.借助噬菌体展示技术，以hrTNFRl蛋白为诱饵从噬菌体12线肽库中筛选到可与 TNFRl结合的含12个氨基酸的线肽(TNFR1封闭肽)；2.体外实验证实人工合成的该封闭肽可以完全封闭大鼠腹腔巨噬细胞的呼吸爆发(何亚萍等，中国免疫学杂志，2003，19 (6) 385-387)；3.体内实验证实该封闭肽可有效减轻佐剂性关节炎大鼠模型的局部关节肿胀及炎症细胞的浸润，并可抑制促炎症细胞因子的产生，显示具有较好的治疗作用(何亚萍等， 药学学报，2003，38 (12) :889-892)。 4.构建TNF封闭肽-IgFc融合蛋白(1)借助DNA合成技术，构建该封闭肽的编码DNA片段(并含内切酶位点)；(2)借助分子克隆技术将目的基因插入含有人免疫球蛋白Fc段的真核表达载体中，构建TNFRlI封闭肽-IgFc的重组体，其技术路线见图36。(3)将此重组体瞬时转染C0S7细胞使之成功表达TNFRl封闭肽-hFc融合蛋白；利用间接免疫荧光、流式细胞技术、胞毒抑制实验证实此融合蛋白可与细胞表面TNFRl结合， 从而抑制TNF- α的生物学活性；用RT-PCR及激光共聚焦显微镜检测证实此融合蛋白可明显抑制TNF诱导的单核细胞NF-KB核转位，从而抑制促炎细胞因子IL-I β mRNA和IL_8mRNA 的转录。(4)将重组体转染CHO-Kl和BHK-21细胞并建立稳定表达的细胞株，对其分泌的肽-IgFc融合蛋白进行纯化并检测其稳定性和生物学效应；5.融和蛋白的主要药效研究，如体外对炎性细胞活化的影响以及体内对高脂喂养大鼠引起的II型糖尿病的预防和治疗作用。二、TNF结合肽(环9肽)与TNFRl封闭肽(环9肽)1.采用噬菌体随机环9肽库展示技术分别以hrTNF-α和hrTNFRl为诱饵进行亲和筛选及生物学效应鉴定得到分别能与TNF-α和TNFRl特异性结合的TNF结合肽 (环9肽)与TNFRl封闭肽(环9肽)。(尹丙姣等，华中科技大学学报医学版，2005， 34(6)670-677)2.外实验证实人工合成的TNF结合肽与TNFRl封闭肽能抑制GFP-TNF融合蛋白与细胞膜上TNFRl结合；非变性聚丙烯凝胶电泳证明TNF结合肽与TNFRl封闭肽之间不互为配体和受体而相互结合；TNF结合肽与TNFRl封闭肽对TNF- α的细胞毒效应均有抑制作用，且随着剂量的增加而增强，二者联用的效果更好；TNF结合肽与TNFRl封闭肽联用能有效抑制TNF-α和IFN-Y诱导的单核细胞呼吸爆发强度，抑制TNF-α诱导的IL-Ιβ、 IL-SmRNA转录。(尹丙姣等，细胞与分子免疫学杂，2007,已校对，待发表)
3.体内实验证实人工合成的TNF结合肽与TNFRl封闭肽联用可显著减轻TNBS诱导大鼠实验性溃疡性结肠炎的病理损伤，改善症状，有效抑制大鼠血清和结肠组织中NO含量以及结肠组织中MPO活性的活性，抑制大鼠腹腔巨噬细胞中Il- β、IL-8的mRNA转录和结肠组织中TNF-α蛋白的表达，对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎具有治疗作用。(尹丙姣等，免疫学杂志，2007，已投稿)通过以上所述并结合后文实施方式，本领域技术人员不难看出本发明的特征和优
点ο



一、图1至图22 TNFRl封闭肽(12线肽)和TNFRl封闭肽-Fc融合蛋白图ITNFRl封闭肽(12线肽)对TNF- α诱导的大鼠腹腔ΜΦ呼吸爆发的影响(抑制作用)图2. TNFRl封闭肽对TNF- α诱导大鼠腹腔ΜΦ IL-I β mRNA的影响图3. TNFRl封闭肽对TNF- α诱导大鼠腹腔ΜΦ TNF- α mRNA的影响图4. TNFRl封闭肽对TNF- α诱导大鼠腹腔MONF- κ Βρ65核转位的影响图5. TNFRl封闭肽对大鼠佐剂性关节炎踝关节病理改变的影响(Χ200)图6. TNFRl封闭肽对佐剂性关节炎大鼠腹腔ΜΦ IL-I β mRNA的影响图7. TNFR封闭肽对佐剂性关节炎大鼠腹腔ΜΦTNF- α mRNA的影响图8.重组表达载体pIG/3C-TNFRBP的酶切鉴定图谱图9.融合蛋白TNFRI-hlgGFc的表达浓度与转染时间的关系图 10.融合蛋白 TNFRI-IgGFc 的 Western-Blotting 鉴定图11.间接免疫荧实验检测融合蛋白与TNFR的结合图12.流式细胞术检测TNFR封闭肽-hlgGFc融合蛋白与TNFR的结合能力图13.胞毒实验检测融合蛋白对TNF-α胞毒效应的拮抗作用图14.融合蛋白对TNF- α诱导人单核细胞IL-1 β mRNA转录的影响图15.融合蛋白对TNF-α诱导人单核细胞IL_8mRNA转录的影响图16.融合蛋白对TNF- α诱导单核细胞NF- κ B核转位的影响图17.高脂高糖诱导大鼠肥胖和胰岛素抵抗图18.融合蛋白可抵抗高脂高糖诱导的大鼠肥胖图19.融合蛋白对肥胖大鼠糖耐量的影响图20.融合蛋白能提高胰岛素的敏感性图21.融合蛋白抑制TNF-α的产生图22.融合蛋白促进组织中胰岛素刺激的IRS-I酪氨酸磷酸化二、图23至35 =TNF结合肽(环9肽)与TNFRl封闭肽(环9肽)图23.不同噬菌体克隆对TNF- α诱导U937细胞毒效应的抑制率作用图24.噬菌体联用对TNF- α诱导U937细胞毒效应的抑制作用图25.各噬菌体与靶蛋白结合的特异性图26. TNFR封闭噬菌体对TNF- α诱导IL-1 β mRNA水平的抑制作用，图中1.阴性对照； 2. TNF- α ； 3. TNF- α +pha. X2 ； 4. TNF- α +pha. X4 ；
5. pha. X2 ；6. pha. X4 ； Μ. Marker图27. TBP和TRBP对GFP-TNF融合蛋白与L929细胞TNF受体结合的影响，图中A GFP-TNF B =GFP-TNF+ 无关肽 C :GFP_TNF+p印· 38+X4图28. TBP和TRBP的非变性聚丙烯凝胶电泳图，图中1 :p印.38 2 :p印.X4 3 pep.38+X4图29. TBP和TRBP对TNF- α介导的U937细胞毒效应抑制作用的剂量反应关系图30. TBP和TRBP对TNF- α和IFN- γ诱导单核细胞呼吸爆发的影响图31. TBP和TRBP对TNF- α诱导Mo的IL-1 β、IL_8mRNA的抑制作用，图中 1 正常对照2 =TNFa 对照 3 :TNF_a +ρ印· Χ4 ；4:TNF-a +pep. 38 5 :TNF-a +pep. 38+X4图32.各种治疗对溃疡性结肠炎大鼠结肠病理改变的影响图33.各实验组大鼠结肠组织病理改变(IOX)，图中A.正常对照组；B.模型组；C.无关肽对照组D.联合多肽治疗组； E.抗体治疗组 F. 5-氨基水杨酸治疗组图34.各种治疗对结肠炎大鼠腹腔ΜΦ中IL-I β和IL_8mRNA水平的影响，图中1.生理盐水对照组 2.模型组3.多肽治疗组4.无关肽对照组 5.抗体治疗组 6. 5-氨基水杨酸治疗组图35.各种治疗对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中TNF-α蛋白表达的影响(40X)， 图中A.正常对照组； B.模型组；C.无关肽对照组D.多肽治疗组； D.抗体治疗组 E. 5-氨基水杨酸治疗组三、图36.借助分子克隆技术将目的基因插入含有人免疫球蛋白Fc段的真核表达载体中，构建TNFRlI封闭肽-IgFc重组体的技术路线图。
具体实施例方式
一、TNFRl封闭肽(12线肽)和TNFRl封闭肽-Fc融合蛋白实施例1 TNFRl封闭肽的筛选及其特异性鉴定借助噬菌体展示技术，以hrTNFRl蛋白为诱饵从噬菌体12线肽库中筛选到可与 TNFRl结合的含12个氨基酸的线肽(TNFR1封闭肽)，其具体筛选过程同下述实施例7之 7. 1。实施例2 TNF受体封闭肽(12线肽)对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响以下TNFRl封闭肽(12线肽)粉剂均由由第三军医大学合成。2. ITNF受体封闭肽对TNF-α诱导的大鼠腹腔ΜΦ呼吸爆发的影响采用NBT 法检测常规分离大鼠腹腔巨噬细，向3X105/ml大鼠腹腔巨噬细胞加入TNF-a (5ng/ ml) 100 μ 1禾口 /或TNFRl封闭肽(10 μ g/ml) 100 μ 1，每组设3个复孔；然后加入100 μ 1/孔 NBT(2mg/ml)，放37°C C02培养箱中45分钟；再加入70%甲醇溶液100 μ 1/孔，固定5min ； 弃上清，用70%甲醇溶液洗3次；空气干燥，最后加入120μ/孔2Μ的KOH溶液和140 μ 1/ 孔的DMS0，立即混勻，在波长630nm下测其OD值。结果如图1 外源性TNF2 α可明显增强 ΜΦ的呼吸爆发，约为对照组的3倍(P <0.05)，而TNF受体封闭肽则能完全阻断TNF-a诱导的ΜΦ呼吸爆发，其值几乎接近于其基础值，提示该肽可竞争性抑制TNF-α诱导的ΜΦ 呼吸爆发。2. 2TNFR1封闭肽对大鼠腹腔ΜΦ IL-I β、TNF- α mRNA的影响采用RT-PCR检测IL-I β mRNA和TNF-α mRNA 常规分离大鼠腹腔巨噬细，用TRIzolRNA分离试剂盒提取细胞总RNA，逆转录按照Boerhinger Marmheim公司逆转录试剂盒说明书进行。取 2μ 1上述逆转录产物作模板，分别用IL-I β特异性引物(P1-GATAACCTGCTGGTGTGTGA ； P2-CTTGTGAGGTGCTGATGTAC)、TNF-α 特异性引物(P1-GCGGATCATGGTCAGATCATCTTCTCGAA ； P2-CCCAAGCTTCAGGGCAATGATCCCAAAGTA)、β-actin 特异性引(P1-AACGGCTCCGGCATGTGCAA ； P2-CTTCTGACCCATGCCCACCA)进行 PCR 扩增，IL-1 的 PCR 循环为94 "C 30s, 62 "C lmin, 72°C lmin，26 个循环，74°C IOmin ；TNF-α 的 PCR 循环如下-MV 30s, 58°C 30s, 72°C lmin, 28个循环，74°C lOmin。取5μ 1 PCR产物加入Ιμ 6 X上样缓冲液混合，在80伏恒压下进行2%琼脂糖凝胶(含EB)电泳，在短波紫外灯下观察结果并照相。结果如图2所示对照组M Φ未见IL-I β PCR产物出现(泳道4)，TNF- α刺激3h后的M Φ可见明显的IL-1 β cDNA 特异性条带(泳道2)，而TNF受体封闭肽则可显著抑制TNF- α诱导的IL-I β mRNA的表达 (泳道3)，因为其PCR产物条带明显减弱，通过密度扫描进行相对定量，证实TNFRl封闭肽的抑制率达50%以上，提示TNFRl封闭肽可有效抑制活化的M Φ表达IL-I β mRNA。同时， 结果还显示(如图3)，未受刺激的M Φ不表达TNF- α mRNA (泳道4)，TNF- α可诱导M Φ强表达TNF- α mRNA,因为图中可见一条强的特异性PCR产物条带(泳道2)，而用TNFRl封闭肽则可使TNF-α的PCR产物条带明显减弱(泳道3)，其抑制率约为50%，提示TNFRl封闭肽可部分阻断TNF-α的正反馈作用。2. 3TNFR1封闭肽对TNF- α诱导大鼠腹腔MONF- κ Βρ65核转位的影响NF- κ Βρ65 核转位的检测取用TNFa (5ng/ml)和/或TNFRl封闭肽(10 μ g/ml)刺激Ih后的大鼠腹腔巨噬细胞(1 X 107)，用冷PBS洗涤，12000r/min, lmin离心，收集细胞；加入400 μ 1细胞膜裂解液重悬细胞；冰上肿胀IOmin加入0.5% ΝΡ240至终浓度为0. 1% 0. 125%;振荡10s， 12000r/min, lmin离心；加入10 μ 1核膜裂解液重悬沉淀物；冰上放置30min，12000r/min, lmin离心，收集上清，按常规方法做Western blot。免疫染色的抗体为兔抗人IgGNF-κ B Ρ65多克隆抗体和HRP标记的羊抗兔IgG抗体，均购自北京中山生物技术有限公司。结果如图4所示。未加任何刺激的对照组无条带出现，提示在正常情况下腹腔巨噬细胞核内无 NF- κ Βρ65存在(泳道1)，单独给予TNF- α刺激Ih后，大量NF- κ Βρ65向细胞核内转位，因为出现明显的NF-k B特异性条带(泳道3)；用TNFRl封闭肽后，则使TNF-α诱导的NF-κΒ 条带明显减弱(泳道2)，提示TNFRl封闭肽能部分抑制TNF- α诱导的NF- κ Βρ65核转位。实施例3 TNFRl封闭肽对大鼠佐剂性关节炎的影响3. 1大鼠佐剂性关节炎的建立Wistar大鼠， $，体重150 200g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。弗氏完全佐剂。实验分组对照组注射生理盐水0.1ml/ 只；模型组在大鼠右足垫部皮内注射弗氏完全佐剂(F5881，购自美国Sigma公司)0. Iml/ 只；治疗1组注射佐剂后，立即注射TNFRl封闭肽0. Iml/只，剂量分别为0. 5和1. Omg/kg 体重，qd，每个剂量4只，连续治疗10d，治疗2组方法与剂量同治疗组1，连续治疗20d后用游标卡尺测量大鼠踝关节肿胀度(cm)并取关节组织按常规做组织切片，HE染色。注射佐剂后，大鼠烦躁不安，右脚不敢着地行走，18h后出现右后肢踝关节明显红肿，走路缓慢，进食减少等临床表现；d3右后肢踝关节肿胀减轻，但d8红肿再度加重(表1)；在接种10 18d后，形成多发性关节炎，表现为未注射佐剂一侧(左后肢)的踝关节轻度红肿(结果未显示)，与人类RA的发病过程极为相似。而注射TNF受体封闭肽后数天，大鼠情绪稳定，行走基本自如，踝关节肿胀有所减轻等。病理切片显示，大鼠佐剂性关节炎的踝关节滑膜组织中有大量的炎性细胞、浆细胞的浸润，血管翳形成并伸向关节表面，关节腔腔隙缩小，关节软骨发生破坏(如图5)。说明大鼠佐剂性关节炎模型建立成功。3. 2TNF受体封闭肽对大鼠佐剂性关节炎关节肿胀的影响用游标卡尺测量大鼠踝关节肿胀度(cm)。结果(表1)显示大鼠踝关节注射佐剂后18h明显肿胀，但d3则有所减轻，dlO肿胀再度明显，此后肿胀程度随时间延长而加重；用TNF受体封闭肽(lmg/kg体重) 后，前3d无明显疗效，但IOd后，治疗组踝关节肿胀基本消退，与未注射佐剂对照组相似。所用两种药物剂量组之间的疗效无显著性差异。3. 3TNF受体封闭肽对佐剂性关节炎病理变化的影响按常规做组织切片，HE染色。 结果显示经每日lmg/kg体重的TNF受体封闭肽持续治疗20d后，与未用药的佐剂性关节炎大鼠相比，其踝关节滑膜细胞层增生程度减小，滑膜组织充血、水肿好转，关节腔内炎性细胞浸润明显减少以及关节软骨破坏程度减轻等。但与正常大鼠的踝关节切片相比，治疗组尚未完全恢复正常(如图5)。表1. TNFRl封闭肽对大鼠佐剂性关节炎踝关节肿胀程度的影响
权利要求
1.一种 TNF 结合肽(环 9 肽)，其氨基酸序列为 Cys-Lys-His-Gln-Trp-His-Iys-His-CyS。
2.一种编码权利要求1所述的TNF结合肽(环9肽)的核酸分子，包含其简并的核酸序列。
3.一种 TNFRl 封闭肽(环 9 肽)，其氨基酸序列为 Cys-Iys-His-Ala-Leu-His-Arg-His-Cys。
4.一种编码权利要求3所述的TNFRl封闭肽(环9肽)的核酸分子，包含其简并的核酸序列。
5.权利要求1所述的TNF结合肽或/和权利要求3所述的TNFRl封闭肽在制备用于治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一条TNF结合环肽和一条TNFR1封闭环肽，其氨基酸序列分别为Cys-Lys-His-Gln-Trp-His-lys-His-Cys；Cys-lys-His-Ala-Leu-His-Arg-His-Cys，其在体内外均能竞争性抑制TNF-α与TNFR1结合，从而拮抗TNF-α的生物学功能，并在TNBS诱导的实验性溃疡性结肠炎大鼠模型中取得较好的疗效。
文档编号A61P1/04GK102321155SQ201110218429
公开日2012年1月18日 申请日期2008年12月19日 优先权日2008年12月19日
发明者何亚萍, 尹丙姣, 李卓娅, 梁慧芳, 王晶, 黄丽霞 申请人:华中科技大学