专利名称：用于辅助b型肝炎药物治疗效果的组合物的制作方法
技术领域：
本发明提供一种用于辅助B型肝炎药物治疗效果的组合物，其包含有微量元素含 量高的螺旋藻，特别是含有高含量的锌、硒及铬元素。本发明的组合物可用于辅助B型肝炎 药物的治疗效果，以达到抗发炎、抗病毒及抗氧化的功效。
背景技术：
B型肝炎是由B型肝炎病毒感染所引起，无法完全清除病毒、血液中仍含有B型肝 炎表面抗原的患者即为B型肝炎带原者。B型肝炎带原者不仅自身有罹患肝癌、慢性肝炎、 肝硬化等风险，也有经由血液、生产等方式散播病原的危险。台湾为B型肝炎流行地区之 一，根据统计，B型肝炎带原者约有400万人。因此，增进B型肝炎的治愈率为刻不容缓的课题。人体中包含的维生素C、铁、锌、铬及硒等微营养素，经研究证实，具有免疫调节的 功能，亦扮演抗氧化物的角色，参与调节免疫的恒定(homeostasis)及改变病毒基因。B型 肝炎及带原患者的微营养素状态与健康者明显不同。临床显示，伴随着微量元素的缺乏，病 毒性B型肝炎患者或带原者的氧化压力及血液中金属含量较高，进而降低其免疫、抗氧化 及抗病毒能力，影响其治愈率。因此，通过补充微营养素可有效调整患者体内的微营养素状 态，同时提升B型肝炎治愈率。目前市面上虽有单一或复合的微营养素补充营养品，但仍无针对辅助B型肝炎药 物治疗效果含有特定比例微量元素的营养品。天然成分如螺旋藻虽含有抗氧化所需的维生 素和矿物质，例如β胡萝卜素、维生素A、B群及铁，但其中所含有的免疫调节所需的微量 元素例如锌、铬及硒仍不足(螺旋藻通常含有约50ppm的锌、0. 5ppm的硒及3. 2ppm的铬)。 因此，目前市面上贩卖的营养补充品均有辅助B型肝炎治疗效果不佳的问题，结合辅助B型 肝炎治疗所需的微量元素的组成物是有其开发的必要性。

发明内容
虽然现有技术已披露了螺旋藻作为营养补充品的应用性，然而其如上所述，缺乏 辅助B型肝炎治疗所需的足够含量的微量元素，例如锌、硒及铬。本发明的目的在于提供用 于辅助B型肝炎药物治疗效果的组合物，以达到抗发炎、抗病毒及抗氧化的功效。为达上述目的，本发明提供一种用于辅助B型肝炎药物治疗效果的组合物， 包含螺旋藻，其中该螺旋藻中所包含的锌元素含量为1000ppm-1500ppm，硒元素含量为 34ppm-42ppm，及铬元素含量为 30ppm-40ppm。在优选实施例中，该组合物中的螺旋藻包含的锌元素含量优选为 1200ppm-1300ppm ；该组合物中的螺旋藻包含的硒元素含量优选为36ppm-40ppm ；及组合物 中的螺旋藻包含的铬元素含量优选为34ppm-36ppm。本发明中的所述的螺旋藻是通过以下培养方式培养而成取得藻种，接种至培 养液，及进行扩大培养；其中该培养液是由高氮有机物料发酵后经过曝气，使该培养液的
3PH值大于或等于8，且于该培养液中加入含量为8g-12g的硫酸锌(ZnSO4. 7H20)；含量为 0. lg-o. 2g的亚硒酸钠(Na2SeO4)及含量为0. 2g-0. 4g的硫酸铬(Cr(SO4)3. H2O)；以该培养 液1吨为基准。于优选实施例中，所述的硫酸锌(ZnSO4. 7H20)的含量优选为9. lg-11. 2g ；所述的 亚硒酸钠(Na2SeO4)的含量优选为0. 12g_0. 18g ；所述的硫酸铬(Cr(SO4)3. H2O)的含量优选 为0. 24g-0. 37g，以该培养液1吨为基准。由于一般的螺旋藻通常仅含有约50ppm的锌、0. 5ppm的硒及3. 2ppm的铬，通过 本发明的培养方法培养可大幅提高螺旋藻中的微量元素含量，将其提升至锌元素含量为 1000ppm-1500ppm，硒元素含量为34ppm-42ppm，及铬元素含量为30ppm-40ppm的水平。上述ppm是浓度单位，是用溶质质量占全部溶液质量的百万分比来表示的浓度， 也称百万分比浓度。本发明是通过特殊的螺旋藻培养方法培养出高含量的微量元素(硒、锌、铬)，并 制备出一种用于辅助B型肝炎药物治疗效果的组合物，其包含本发明培养的螺旋藻，该组 合物可使接受B型肝炎药物治疗的病人具有抗发炎、抗病毒及抗氧化的功效，进而提升治愈率。
具体实施例方式以下结合实施例详细说明本发明，但不限定本发明的实施范围。本发明提供一种用于辅助B型肝炎药物治疗效果的组合物，其包含螺旋藻，其中 所述的螺旋藻包含的锌元素含量为1000ppm-1500ppm，硒元素含量为34ppm-42ppm，及铬 元素含量为30ppm-40ppm。其中所述的螺旋藻优选为包含1200ppm-1300ppm的锌元素；所 述的螺旋藻包含的硒元素含量优选为36ppm-40ppm ；及螺旋藻包含的铬元素含量优选为 34ppm_36ppm0本发明中的所述的螺旋藻是通过以下培养方式培养而成取得螺旋藻的藻种， 接种至培养液，进行扩大培养，及持续培养至一个月后收成；其中该培养液是由高氮有 机物料发酵后经过曝气，使该培养液的PH值大于或等于8，且于1吨该培养液中加入含 量为8g-12g的硫酸锌(ZnSO4. 7H20)，优选为9. lg-11. 2g ；含量为0. lg-0. 2g的亚硒酸 钠(Na2SeO4)，优选为0. 12g_0. 18g及含量为0. 2g-0. 4g的硫酸铬(Cr(SO4)3. H2O)，优选为 0. 24g-0. 37g。因此，螺旋藻将自行吸收储存该等微量元素于藻体中，使目标量的微量元素 得以稳定保存，减少如一般营养品中因后续加工所造成的微量元素流失。本发明高氮有机物料中的“高氮”是与中国人民共和国农业部农业行业标准比较 而得的，即与标准号是NY525-2002中规定N为5% wt的标准比较而得的。再者，由于本发 明的螺旋藻最终是供予人类食用，因此培养其培养液也必须为人类可食用的，基于上述两 点说明，本领域技术人员应不难得知本发明中的高氮有机物料是指以可食用豆类为原料经 发酵、腐熟后，所得N含量超过5 % wt的有机物料，不包含化学物质尿素、或不可食用的动物 粪便等。本发明组成物的辅助B型肝炎药物治疗效果通过测试患者肝指数变化、病毒抗原 变化及氧化压力变化获得。此外亦检测患者体内的微量元素的含量，以比较使用本发明的 组合物前后的差异。
一般称为“肝指数”的“GOT”及“GPT”值各代表麸氨基酸草醋酸转氨基酵素 (Glutamic Oxaloacetic Transaminase, GOT)及麸氨基酸焦葡萄转氨基酵素(Glutamic Pyruvic Transaminase，GPT)，其为肝细胞中的重要酵素。一旦肝细胞受到破坏，该等酵素 将大量流失至血清，导致血清中GOT及GPT值的上升，藉此可得知肝细胞坏死的程度，而GOT 及GPT正常值均为0-35mU/mL。“e抗原”一般为病毒活性的指针，e抗原测试为阳性时表示病毒的复制相当活跃， 因此B型肝炎病毒e抗原(HbeAg)的“转阴率”为治疗肝炎疗效的重要指标之一。“e抗原转 阴”的定义为B型病毒DNA自血清中清除及出现e抗体(HbeAb呈阳性)。而病毒定量是通 过萃取纯化患者血清中的HBV DNA，接着使用FastStart DNA Master SYBR Green I套组、 10 uM B63S 讯息股引子(sense primer)及 10M B301AS 反义股引子(antisense primer) 进行扩增，搭配Roche LightCycler Machine进行定量PCR而完成。B型肝炎患者体内的氧化压力较健康者为高，其是影响病毒清除率及组织复原能 力的因素之一。氧化压力是通过测试体内脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyd^MDA) 的含量得知。MDA指数的降低为体内脂质的过氧化降低的结果，其代表体内氧化压力的降 低。而麸胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase,GPx)及麸胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)均为抗氧化酵素，因此GPx及GR活性的提升代表体内氧化压力的降低。B型肝炎患者体内一般含有较高含量的铁、铜、铝及较低含量的锌及硒。较高含量 的铁或铜是与氧化压力上升有关，而高铝含量则与肝功能受损无法正常代谢铝有关。此外， 由于B型肝炎患者体内有较高的氧化压力，因而耗损过多的含锌或硒的相关抗氧化酵素， 导致体内锌或硒的含量明显降低。因此，补充锌及铬可供体内因氧化压力升高所耗损的抗 氧化酵素制造所需，进而提升免疫功能，降低对细菌的易感性。以下是通过实施例检测使B型肝炎患者服用本发明的用于辅助B型肝炎药物治疗 效果的组合物所造成的各项指标性数值的影响，以证明本发明组合物确实具有抗发炎、抗 病毒及抗氧化的功效，进而提升B型肝炎患者服药的治愈率。
实施例本发明的最优选实施例中是以符合下列5项条件的慢性B型肝炎患者为测试对 象1.B型肝炎表面抗原(HBsAg)为阳性、2. B型肝炎e抗原(HBeAg)为阳性、3.抗B型肝 炎e抗原(anti-HBe)为阴性、4. GPT值大于200mU/mL (约为正常值五倍)、及5. B型肝炎病 毒DNA(HBV-DNA)大于lOOcopies/ml。符合上述条件的患者共20人分为“实验组”及“对 照组”。本发明的最优选实施例中所提供的每一单位(500mg)的辅助B型肝炎药物治疗效 果的组合物由100wt%螺旋藻组成，其中该螺旋藻含有1250ppm的锌、38ppm的硒及35ppm 的铬。本发明最优选实施例中的螺旋藻培养液(其量为1吨)由加入含量为10. 16g 的硫酸锌(ZnS04. 7H20)、含量为0. 15g的亚硒酸钠(Na2Se04)及含量为0. 3lg的硫酸铬 (Cr (S04) 3. H20)组成。实验方式在本发明的最优选实施例中，给予实验组患者市售药品肝安能(lamivudine，每日口服一锭IOOmg)及长效型干扰素(interferon-alpha，罗氏药厂，1周1支，每周注射1次)， 并用上述本发明最优选实施例的组合物(口服一次两锭500mg*2，一天三次)。对照组患者 则给予同样的肝安能及长效型干扰素治疗，不并用上述本发明最优选实施例的组合物。于 治疗期第0、第3及第6个月分别对实验组及对照组患者抽血，以检测病毒数及e抗原转阴 率、肝功能指数、MDA指数及血液中铁、铜、铝、锌、硒及铬的含量。患者于抽血前是隔夜禁食 8至12小时。实验结果1.肝功能指数使用本发明组合物的实验组于治疗第3个月及第6个月的平均GOT及GPT值如表 1所示，均明显较治疗前低，且在第3个月即恢复至正常范围。此外，实验组患者在服药过程中，血液中血红素(Hb)、离心后红血球比例(Hct)、 红血球(RBC)及白血球(WBC)的测试结果均在正常范围中，显示本发明的组合物对于患者 的白血球总数及血红素值等，并无显著副作用。表1 2. B型肝炎病毒量及e抗原转阴率实验组于治疗第3月及第6月的病毒量如表2所示，均明显较治疗前下降。e抗原 转阴率的定义如所述的，为B型病毒DNA自血清中清除及出现e抗体(HbeAb呈阳性)，治疗 前HBeAb呈阴性的患者有10位，在第3个月有3位转为阳性，第6个月又增加3位呈现阳 性，总计实验组中e抗原转阴率为50%。与一般仅使用干扰素治疗达到e抗原转阴率(约 为30-40% )相比明显提高。
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表 2 注*代表 ρ < 0. 05，** 代表 ρ < 0. 013.氧化压力如表3所示，实验组患者血液中的MDA指数于治疗3个月及治疗6个月时均较治 疗前低，而对照组患者血液中的MDA指数则略微上升，且如表4及表5所示，抗氧化酵素GPx 及GR的活性于治疗3个月及治疗6个月时均较治疗前高，显示实验组患者体内的氧化压力 较对照组患者低。表3 注*代表 ρ < 0. 05，** 代表 ρ < 0. 01表 4 注*代表 ρ < 0. 05，** 代表 ρ < 0. 01表 5 注*代表 p < 0. 05，** 代表 p < 0. 014.血液中微量元素的含量如表6所示，实验组患者血液中的含铁量于治疗3个月及治疗6个月时均较治疗 前低，代表治疗后的实验组患者体内的氧化压力较对照组低。表 6 注*代表 p < 0. 05，** 代表 p < 0. 01如表7所示，实验组患者血液中的含铜量于治疗3个月及治疗6个月时均较治疗 前低，而对照组则略微上升，代表治疗后的实验组患者体内的氧化压力较对照组低。表7 注*代表 p < 0. 05，** 代表 p < 0. 01如表8所示，实验组患者血液中的含铝量于治疗3个月及治疗6个月时均较治疗 前低，而对照组则略微上升，代表治疗后的实验组患者的肝脏具有优选的铝代谢能力。表8: 注*代表 ρ < 0. 05，** 代表 ρ < 0. 01如表9所示，实验组患者血液中的含锌量于治疗3个月及治疗6个月时均明显较 治疗前高，而对照组则无明显变化，代表治疗后的实验组患者得以藉由本发明的组成物有 效补充体内锌的含量。表 9 注*代表 ρ < 0. 05，** 代表 ρ < 0. 01如表10所示，实验组患者血液中的含硒量于治疗3个月及治疗6个月时均明显较 治疗前高，而对照组则持续下降，代表治疗后的实验组患者得以藉由本发明的组成物有效 补充体内硒的含量。表10 注*代表 ρ < 0. 05，** 代表 ρ < 0. 01如表11所示，实验组患者血液中的含铬量于治疗3个月及治疗6个月时均明显较 治疗前高，而对照组则代表治疗后的实验组患者得以藉由本发明的组成物有效补充体内铬 的含量。表11: 注*代表 ρ < 0. 05，** 代表 ρ < 0. 01由上述实验结果可知，本发明的用于辅助B型肝炎药物治疗效果的组合物可有效 降低B型肝炎患者的肝功能指数、病毒量、氧化压力，且有效降低B型肝炎患者血液中的铁、 铜及铝含量，另外藉由本发明的组合物中所含的锌、硒及铬补足B型肝炎患者所缺乏的该 等微量元素，充分达到辅助B型肝炎药物治疗的效果。其它实施态样本发明的实施方法已详述于所述的实施例，任何熟悉本技术领域的人士皆可依本 发明的说明，在不背离本发明的精神与范围内视需要进行更动或修饰。
权利要求
一种用于辅助B型肝炎药物治疗效果的组合物，包含螺旋藻，其中所述的螺旋藻包含锌元素含量为1000ppm-1500ppm，硒元素含量为34ppm-42ppm，及铬元素含量为30ppm-40ppm。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述的螺旋藻含量为80wt%-100wt%。
3.如权利要求2所述的组合物，其中所述的螺旋藻含量为100wt%。
4.如权利要求1所述的组合物，其中所述的螺旋藻包含的锌元素含量为 1200ppm-1300ppmo
5.如权利要求1所述的组合物，其中所述的螺旋藻包含的硒元素含量为36ppm-40ppm。
6.如权利要求1所述的组合物，其中所述的螺旋藻包含的铬元素含量为34ppm-36ppm。
7.如权利要求1所述的组合物，其中还包含藻蓝蛋白40mg/g-80mg/g。
8.如权利要求1所述的组合物，其中所述的螺旋藻通过以下方法培养而成取得藻种；接种至培养液；进行扩大培养；及持续培养至一个月后收成；其中该培养液是由高氮有机物料发酵后经过曝气，使该培养液的PH值大于或等于 8，且以1吨该培养液为基准，其中加入重量为8g-12g的硫酸锌(ZnS04. 7H20)、重量为 0. lg-o. 2g 的亚硒酸钠(Na2Se03)及重量为 0. 2g_0. 4g 的硫酸铬(Cr(S04)3. H20)。
9.如权利要求1所述的组合物，其中于所述的螺旋藻的培养液中加入9.lg-11.2g的硫 酸锌，以该培养液1吨为基准。
10.如权利要求1所述的组合物，其中于所述的螺旋藻的培养液中加入0.12g-0. 18g的 亚硒酸钠，以该培养液1吨为基准。
11.如权利要求1所述的组合物，其中于所述的螺旋藻的培养液中加入0.24g-0. 37g的 硫酸铬，以该培养液1吨为基准。
全文摘要
本发明提供了一种用于辅助B型肝炎药物治疗效果的组合物，其包含螺旋藻，其中所述的螺旋藻包含的锌元素含量为1000ppm-1500ppm，硒元素含量为34ppm-42ppm及铬元素含量为30ppm-40ppm，其是通过补充微量元素以达到辅助B型肝炎药物治疗的目的。
文档编号A61K33/30GK101869585SQ200910134129
公开日2010年10月27日 申请日期2009年4月24日 优先权日2009年4月24日
发明者柯万盛, 郭志宏, 阙壮群, 陈伯中 申请人:远东生物科技股份有限公司