专利名称：一种兽用疫苗的即用型佐剂、制备及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及兽用疫苗佐剂领域，具体涉及一种复方佐剂制备方法及其含该复方佐剂的疫苗制备方法。
背景技术：
油性佐剂疫苗是已公知的可有效强化免疫性的疫苗，是目前国内外疫苗市场上产品最多的类型之一，含油佐剂疫苗有三种剂型:油包水(W/0)型、水包油(0/W)型和水包油包水(W/0/W)型。油包水(W/0)型疫苗应用最普遍，该剂型的显著优点是可获得高水平持久的免疫增强效果；缺点是较粘稠，注射较困难，同时由于疫苗中白油含量相对较高，常常导致严重的接种副反应、形成无菌性化脓损害和接种部位周围的肉芽肿，可产生外部可见的浮肿、肿胀、硬结和坏死。有研究报道，油包水 (W/0)剂型疫苗在接种部位有留存的可能，因而妨碍了疫苗的使用。猪、犬、猫等动物对该剂型疫苗尤其敏感，这也限制了其在生产实际中的应用。水包油包水(W/0/W)剂型疫苗同时具有W/0型和0/W型的优点，效果很好。常规的做法是先制备W/0型疫苗，再经第二次分散到水相中制备而成。目的是降低黏度，既便于注射又具有良好的免疫原性。但制备技术上难度较大，疫苗稳定性差。为减少乳剂中的油含量，降低粘度、易于注射，开发了新型佐剂，并建立了水包油(0/W)剂型疫苗。但是，该剂型的疫苗应用并不普遍，仅仅在人用疫苗应用方面有商业化，如MF59佐剂用于流感疫苗的制作，在动物疫苗上尚未推广应用。原因在于水包油(0/W)剂型疫苗的免疫原性弱，仅诱导动物体内产生较弱的免疫应答，尚不能满足养殖业疫病的防控需求。同时现有水包油(0/W)剂型疫苗无缓控缓释的作用，一次免疫不能连续激发机体免疫反应，免疫持续期很短。

发明内容
本发明的目的是提供一种兽用疫苗的即用型佐剂，是水包油型佐剂，成分简单、剂型稳定，使用方便；该佐剂与抗原配制成的疫苗，稳定性好，副反应小，免疫效果好，保护期长。本发明的另一目的是提供上述兽用疫苗的即用型佐剂的制备方法。本发明的再一目的是提供含有兽用疫苗的即用型佐剂的水包油型疫苗。本发明的目的采用如下技术方案实现。一种兽用疫苗的即用型佐剂，按照质量百分含量由下列物质组成:
油 5%-30%，
亲水性表面活性剂0.1%-10%，
亲油性表面活性剂0.1%-10%，
高分子胶束物质0.1%-10%，水 40%-90%。所述油为白油、角鲨烷和角鲨烯中的一种或者两种的混合物。所述亲水性表面活性剂为吐温80、普鲁尼克121或其混合物。所述亲油性表面活性剂为司本80、司本85或其混合物。所述高分子胶束物质为壳聚糖、卡波姆971P、羟甲基纤维素和二甲基双十八烷基溴化铵中的一种或者两种的混合物。一种所述兽用疫苗的即用型佐剂的制备方法，该方法具体如下:分别称取各组分，混合后乳化，除菌即得所述兽用疫苗的即用型佐剂。所述乳化方法为胶体磨挤压法、微射流法或高压均质法。一种含有所述兽用疫苗的即用型佐剂的水包油型疫苗。所述水包油型疫苗由质量比为1:0.5-2的即用型佐剂和灭活抗原水溶液组成。所述灭活抗原水溶液为猪口蹄疫灭活病毒液或猪圆环病毒灭活病毒液。有益效果:
本发明提供的兽用疫苗的即用型佐剂，是水包油型佐剂，成分简单、剂型稳定，使用方便。由于油的用量由70%降至30%以下，显著减小了对动物的毒副反应，有效解决了疫苗副反应的问题。高分子胶束物质通过离子吸附和微孔包裹的机制，显著提高抗原的储留和递呈能力，有效解决了水包油(0/W)剂型疫苗免疫活性弱、持续期短的问题。即用型佐剂中油的使用量降低，易于注射。

本发明即用型佐剂的制备方法，工艺简单，成本低，得到的剂型稳定。采用兽用疫苗的即用型佐剂制备的水包油型疫苗，稳定期长，易储存，免疫效果好，保护期延长，易于注射，副反应很小。
具体实施例方式下面通过实施例进一步解释本发明，但本发明并不受这些实施例的限制。普鲁尼克121 (Pluronic L 121)购自上海生工生物有限公司。实施例1佐剂的制备 配方1:
白油10 g，
吐温 800.5g，
司本 850.5g,
壳聚糖2.0g,
卡波姆971P0.1g,
水83.9g。配方2:
角鲨烷10 g，
普鲁尼克1210.5g,
司本 800.5g,
卡波姆971P3.0g,
水83.0g。
配方3:
角鲨烷10 g，角鲨烯IOg
普鲁尼克121 5g，吐温800.3g,
司本805g,司本850.3g,
羟甲基纤维素1.0g，二甲基双十八烷基溴化铵 l.0g，
水67.4g。配方4:·
角鲨烷15g，白油15g，
普鲁尼克121 0.2g，吐温808.8g,
司本 800.2g,司本 858.8g,
羟甲基纤维素 2.0g，卡波姆971P 3.0g,
水47.0g。配方5:
角鲨烷5 g，
普鲁尼克121 0.1g,
司本 800.1g,
卡波姆971P1.0g，二甲基双十八烷基溴化铵 9.0g，
水84.8g。配方6:
角鲨烷30 g，
普鲁尼克121 IOg,
司本80IOg,
卡波姆971P 3.0g,
水47.0g。分别用配方1-6采用如下方法制备相应的即用型佐剂:按配方量分别称取各组分，冰水浴过夜后混合均匀，用机械乳化法乳化，0.22um滤膜过滤除菌后，分别得到即用型佐剂1-6，4度保存备用。机械乳化法为胶体磨挤压法、微射流法或高压均质法。乳化结束后，在3000rmp离心IOmin,无水相析出为合格。实施例2 水包油型猪口蹄疫疫苗的制备及其性质 (I)即用型佐剂的制备
按实施例1方法制得即用型佐剂1-6。ISA206佐剂购自SEPPIC公司。( 2 )准备猪口蹄疫灭活病毒液
猪口蹄疫灭活病毒液(0型，II)由金宇保灵生物药品有限公司提供，灭活前每0.2毫升病毒液中病毒含量为107_°LD5(l/0.2晕升。该猪口蹄疫灭活病毒液是按照《兽用生物质量质量标准汇编》(2006-2008)相关要求制备。猪口蹄疫灭活病毒液(0型，II)简称为猪口蹄疫灭活病毒液。(3)水包油型猪口蹄疫疫苗的制备
在无菌条件下，将即用型佐剂1-6分别与猪口蹄疫灭活病毒液混合，手摇均匀得水包油型猪口蹄疫疫苗1-6。其中水包油型猪口蹄疫疫苗I中即用型佐剂I与猪口蹄疫灭活病毒液的质量比为1:0.5。水包油型猪口蹄疫疫苗2中即用型佐剂2与猪口蹄疫灭活病毒液的质量比为1:2。水包油型猪口蹄疫疫苗3-6中即用型佐剂与猪口蹄疫灭活病毒液的质量比为1:1。用ISA206佐剂替代本发明即用型佐剂制备对照疫苗A，ISA206佐剂与猪口蹄疫灭活病毒液按质量比1:1在乳化缸内混合，3000rpm乳化30分钟制备对照疫苗A。(4)疫苗物理性状的比较
检测水包油型猪口蹄疫疫苗1-6及对照疫苗A的物理性状，比较各疫苗的稳定性。具体结果见表I。表I水包油型猪口蹄疫疫苗1-6与对照疫苗A的物理性状比较
权利要求
1.一种兽用疫苗的即用型佐剂，按照质量百分含量由下列物质组成:油 5%-30%， 亲水性表面活性剂0.1%-10%， 亲油性表面活性剂0.1%-10%， 高分子胶束物质0.1%-10%，水 40%-90%。
2.根据权利要求1所述兽用疫苗的即用型佐剂，其特征在于:所述油为白油、角鲨烷和角鲨烯中的一种或者两种的混合物。
3.根据权利要求2所述兽用疫苗的即用型佐剂，其特征在于:所述亲水性表面活性剂为吐温80、普鲁尼克121或其混合物。
4.根据权利要求3所述兽用疫苗的即用型佐剂，其特征在于:所述亲油性表面活性剂为司本80、司本85或其混合物。
5.根据权利要求4所述兽用疫苗的即用型佐剂，其特征在于:所述高分子胶束物质为壳聚糖、卡波姆971P、羟甲基纤维素和二甲基双十八烷基溴化铵中的一种或者两种的混合物。
6.一种权利要求1-5之一所述兽用疫苗的即用型佐剂的制备方法，其特征在于该方法具体如下:分别称取各组分，混合后乳化，除菌即得所述兽用疫苗的即用型佐剂。
7.根据权利要求6所述兽用疫苗的即用型佐剂的制备方法，其特征在于所述乳化方法为胶体磨挤压法、微射流 法或高压均质法。
8.一种含有权利要求1-5之一所述兽用疫苗的即用型佐剂的水包油型疫苗。
9.根据权利要求8所述水包油型疫苗，其特征在于:所述水包油型疫苗由质量比为1:0.5-2的即用型佐剂和灭活抗原水溶液组成。
10.根据权利要求8所述应用，其特征在于所述灭活抗原水溶液为猪口蹄疫灭活病毒液或猪圆环病毒灭活病毒液。
全文摘要
本发明提供一种兽用疫苗的即用型佐剂、制备及其应用，涉及兽用疫苗佐剂领域。所述即用型佐剂，由下列物质组成油5%-30%，亲水性表面活性剂0.1%-10%，亲油性表面活性剂0.1%-10%，高分子胶束物质0.1%-10%，水40%-90%。本发明还提供即用型佐剂的制备方法，分别称取各组分，混合后乳化，除菌即得所述兽用疫苗的即用型佐剂。本发明还提供含有即用型佐剂的水包油型疫苗。本发即用型佐剂，是水包油型佐剂，成分简单、剂型稳定，使用方便，易于注射。本发明即用型佐剂的制备方法，工艺简单，成本低，得到的剂型稳定；水包油型疫苗，稳定期长，易储存，免疫效果好，保护期延长，易于注射，副反应很小。
文档编号A61K9/107GK103071153SQ20131002101
公开日2013年5月1日 申请日期2013年1月21日 优先权日2013年1月21日
发明者张金秋, 卢宇, 邓碧华, 吕芳, 侯继波 申请人:江苏省农业科学院