产品分类
高纯度紫丹参甲素的制备方法
专利名称：高纯度紫丹参甲素的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种从天然产物中分离制备高纯度的紫丹参甲素(Przewaquinone A，Przewatanshinquinone A)的方法。
背景技术：
目前报道含有紫丹参甲素的天然产物主要是丹参或紫丹参。药理研究表明，紫丹参甲素具有明显的抗肿瘤活性对小鼠Lewis肺癌、黑色素瘤1316和肉瘤180有不同程度的抑制作用。
紫丹参甲素的制备工艺在文献中报道的非常少，且很不成熟。高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography，HSCCC)是近年发展起来的一种连续的无需固体支撑物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。
发明目的本发明的目的是提出一种采用高速逆流色谱法可克量级制备紫丹参甲素的工艺，制备的紫丹参甲素纯度可达98％以上。
技术内容本发明的基本工艺路线是(1)用有机溶剂浸提含有紫丹参甲素的天然产物，得到其提取物；(2)将所得提取物用柱色谱层析法进行提纯，收集含紫丹参甲素的组分，蒸干溶剂；(3)将(2)所得样品用高速逆流色谱法分离制得纯度高于98％的紫丹参甲素产品。
柱色谱层析采用的固定相为硅胶(颗粒度为10-500目)；流动相可选不同比例的二元混合液A组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃；B组分可选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等脂肪酯类，优选氯仿-乙酸乙酯体系。A与B的体积比为1-10∶1。
高速逆流色谱法对紫丹参甲素精制溶剂体系主要有三个。均以上相为固定相，下相为流动相。一号溶剂体系由三个组分构成，A组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C组分为水，优选氯仿-甲醇-水体系，A、B、C的体积比为2-6∶2-6∶1-4。二号溶剂体系由四个组分构成，A组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C组分可选自正己烷、石油醚、环己烷等烷烃或醚类，D组分为水，优选氯仿-甲醇-正己烷-水体系，A、B、C、D的体积比为2-5∶2-5∶1-4∶1-4。三号溶剂体系由五个组分构成，A、C组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，D组分可选自正己烷、石油醚、环己烷等烷烃或醚类，E组分为水，优选四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水体系，A、B、C、D、E的体积比为0.5-3∶2-5∶0.5-3∶1-4∶1-4。
实验适合于在室温为15℃-30℃下进行。
优点及效果用本法制备的紫丹参甲素纯度可达到98％以上。本法适用于以各种含紫丹参甲素的天然产物、天然产物的提取物为原料制备高纯度的紫丹参甲素。适用于采用各种型号的逆流色谱仪分离制备紫丹参甲素。本发明率先提出了一种可克量级制备紫丹参甲素的工艺，本工艺具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。
实施例1采用氯仿-甲醇-正己烷-水体系制备纯度高于98％的紫丹参甲素首先用石油醚浸提丹参，减压蒸干溶剂，用硅胶柱对3g丹参提取物进行分离，洗脱剂比例为9∶1的氯仿-乙酸乙酯溶液，分步收集，将含有紫丹参甲素的溶剂减压浓缩至干，得到初步纯化产物。使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa3057便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。溶剂体系的制备将体积比为2.8∶3∶1.2∶2的氯仿-甲醇-正己烷-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步纯化样品进行分离，收集紫丹参甲素的组分峰，旋转蒸发至干，得到红色紫丹参甲素固体，经HPLC分析，其纯度达到98％以上。
实施例2采用二氯甲烷-乙醇-水体系制备纯度高于98％的紫丹参甲素首先用硅胶柱对3g丹参提取物进行分离，洗脱剂比例为7∶1的二氯甲烷-乙酸丙酯溶液，分步收集，将含有紫丹参甲素的溶剂减压浓缩至干，得到初步纯化产物。使用分析型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，2ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为40ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为1800rpm，以1.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。溶剂体系的制备将体积比为5∶3∶2的二氯甲烷-乙醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液2ml溶解初步纯化样品进行分离，收集紫丹参甲素的组分峰，旋转蒸发至干，得到红色紫丹参甲素固体，经HPLC分析，其纯度达到98％以上。
实施例3采用氯仿-甲醇-水体系制备纯度高于98％的紫丹参甲素首先用硅胶柱对3g丹参提取物进行分离，洗脱剂比例为4∶1的四氯化碳-乙酸异丙酯溶液，分步收集，将含有紫丹参甲素的溶剂减压浓缩至干，得到初步纯化产物。使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。溶剂体系的制备将体积比为3∶2∶2的氯仿-甲醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步纯化样品进行分离，收集紫丹参甲素的组分峰，旋转蒸发至干，得到红色紫丹参甲素固体，经HPLC分析，其纯度达到98％以上。
实施例4采用四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水体系制备纯度高于98％的紫丹参甲素首先用正己烷浸提丹参，减压蒸干溶剂，用硅胶柱对3g丹参提取物进行分离，洗脱剂比例为8∶1的氯仿-乙酸正丁酯溶液，分步收集，将含有紫丹参甲素的溶剂减压浓缩至干，得到初步纯化产物。使用分析型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。溶剂体系的制备将体积比为2∶3∶1∶1∶2的四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步纯化样品进行分离，收集紫丹参甲素的组分峰，旋转蒸发至干，得到红色紫丹参甲素固体，经HPLC分析，其纯度达到98％以上。
实施例5采用氯仿-乙醇-二氯甲烷-石油醚-水体系制备纯度高于98％的紫丹参甲素首先用乙醇浸提紫丹参，减压蒸干溶剂，用硅胶柱对3g紫丹参提取物进行分离，洗脱剂比例为9∶1的氯仿-乙酸乙酯溶液，分步收集，将含有紫丹参甲素的溶剂减压浓缩至干，得到初步纯化产物。使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。溶剂体系的制备将体积比为0.5∶3∶2∶1∶2的氯仿-乙醇-二氯甲烷-石油迷-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步纯化样品进行分离，收集紫丹参甲素的组分峰，旋转蒸发至干，得到红色紫丹参甲素固体，经HPLC分析，其纯度达到98％以上。
实施例6采用四氯化碳-甲醇-正己烷-水体系制备纯度高于98％的紫丹参甲素首先用硅胶柱对3g紫丹参提取物进行分离，洗脱剂比例为9∶1的氯仿-乙酸乙酯溶液，分步收集，将含有紫丹参甲素的溶剂减压浓缩至干，得到初步纯化产物。使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa 3057便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。溶剂体系的制备将体积比为3∶3∶1∶2的二氯甲烷-丙酮-环己烷-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步纯化样品进行分离，收集紫丹参甲素的组分峰，旋转蒸发至干，得到红色紫丹参甲素固体，经HPLC分析，其纯度达到98％以上。
权利要求
1.一种高纯度紫丹参甲素的制备方法，其特征在于他的基本工艺路线是(1)用有机溶剂浸提含有紫丹参甲素的天然产物，得到其提取物；(2)将所得提取物用柱色谱层析进行提纯，收集含紫丹参甲素的组分，蒸干溶剂；(3)将(2)所得样品用高速逆流色谱法分离制得纯度高于98％的紫丹参甲素产品。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度紫丹参甲素的制备方法，其特征在于柱色谱层析采用的固定相为硅胶(颗粒度为10-500目)，流动相可选不同比例的二元混合液，A组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃；B组分可选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等脂肪酯类，优选氯仿-乙酸乙酯体系。A与B的体积比为1-10∶1。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度紫丹参甲素的制备方法，其特征在于高速逆流色谱法对紫丹参甲素精制溶剂体系由三个组分构成，A组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C组分为水，优选氯仿-甲醇-水体系，A、B、C的体积比为2-6∶2-6∶1-4。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度紫丹参甲素的制备方法，其特征在于高速逆流色谱法对紫丹参甲素精制溶剂体系由四个组分构成，A组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C组分可选自正己烷、石油醚、环己烷等烷烃或醚类，D组分为水，优选氯仿-甲醇-正己烷-水体系，A、B、C、D的体积比为2-5∶2-5∶1-4∶1-4。
5.根据权利要求1所述的一种高纯度紫丹参甲素的制备方法，其特征在于高速逆流色谱法对紫丹参甲素精制溶剂体系由五个组分构成，A、C组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，D组分可选自正己烷、石油醚、环己烷等烷烃或醚类，E组分为水，优选四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水体系，A、B、C、D、E的体积比为0.5-3∶2-5∶0.5-3∶1-4∶1-4。
全文摘要
本发明涉及一种从天然产物中分离制备高纯度的紫丹参甲素的方法,他的基本工艺路线是:(1)用有机溶剂浸提含有紫丹参甲素的天然产物,得到其提取物;(2)将所得提取物用柱色谱层析进行提纯,收集含紫丹参甲素的组分,蒸干溶剂;(3)将(2)所得样品用高速逆流色谱法分离制得纯度高于98%的紫丹参甲素产品;本法适用于以各种含紫丹参甲素的天然产物、天然产物的提取物为原料制备高纯度的紫丹参甲素,适用于采用各种型号的逆流色谱仪分离制备紫丹参甲素,本发明率先提出了一种可克量级制备紫丹参甲素的工艺,本工艺具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。
文档编号A61P35/00GK1380295SQ02104328
公开日2002年11月20日 申请日期2002年2月27日 优先权日2002年2月27日
发明者韩笑, 张天佑 申请人:北京天纯维通生物技术有限公司
产品知识
行业新闻
- 专利名称：一种小儿黄疸散及其制作方法技术领域：本发明属于儿童治疗药品技术领域，涉及一种小儿黄疸散及其制作方法。 背景技术：小儿黄疸，疳积，烦燥厌食，黄疸性肝炎都是小孩子容易得的疾病，疾病不大但是对儿童的身体均具有不良影响，现在的治疗药品效果
- 专利名称：微量滑动式无应力遮挡钢板的制作方法技术领域：本发明涉及医疗器械技术领域，进一步是用于骨伤治疗用的固定钢板，尤其是一 种微量滑动式无应力遮挡钢板。背景技术：钢板固定是治疗下肢腿部骨折的常用方法，但是通常用的普通固定钢板，存在着 以下
- 专利名称：一种治疗痛经的中药组合物的制作方法技术领域：本发明涉及一种中药，更具体地说，涉及一种治疗痛经的中药组合物。 背景技术：痛经是指妇女在经期及其前后，出现小腹或腰部疼痛，甚至痛及腰骶。每随月经周期而发，严重者可伴恶心呕吐、冷汗淋漓、手
- 专利名称：药物组合物的制作方法技术领域：本发明涉及包含特定的血管紧张肽II受体拮抗剂和一种或多种利尿剂作为有效成分的药物组合物(特别是用于预防或治疗高血压的药物组合物)，涉及特定的血管紧张肽II受体拮抗剂和一种或多种利尿剂用于制造药物组合物
- 专利名称：一种输液管加温器的制作方法技术领域：本实用新型涉及一种输液管加温器，属于医疗器械领域。 背景技术：静脉注射输液是临床上抢救和治疗病人的重要措施之一。目前，在医疗中为患者输液时，由于药液不进行任何处理，其温度与当时所处环境的温度相当
- 专利名称：一种治疗男性不育的中药补肾种子丸的制作方法技术领域：本发明涉及中药制剂领域，尤其涉及一种治疗男性不育的中药补肾种子丸。 背景技术：男性不育指夫妇同居未采取避孕措施两年以上而无生育者，女方检查正常，男方检查异常。常见病因有先天不足，
- 专利名称：：噁嗪骈喜树碱衍生物及其制备方法和用途的制作方法技术领域：：本发明涉及药物化学及医药技术领域：，具体涉及一类新的具有抗肿瘤活性的噁嗪骈喜树碱衍生物及其酯的衍生物，还涉及这些衍生物的制备方法、含有这些衍生物的药物组合物和用途。背景技
- 专利名称：辐射成像设备和立体图像显示方法技术领域：本发明涉及用于显示两个图像的图像数据的辐射成像设备，该两个图像是右眼图像和左眼图像，用于显示立体图像。本发明也涉及立体图像显示方法。背景技术：传统上，已知通过组合和显示多个图像，利用视差的图
- 专利名称：氨基喹啉衍生物的制作方法技术领域：本发明涉及通式Ⅰ的氨基喹啉衍生物以及通式Ⅰ碱性化合物的可药用盐， 其中符号R1至R6代表氢、或其中的一个或二个代表烷基，而其他的代表氢，R7和R8代表烷基、链烯基或芳烷基，或者R7和R8与N原子一
- 专利名称：用于加压计量吸入器的稳定的药用溶液制剂的制作方法技术领域：本发明涉及与适用于气溶胶给药的加压计量吸入器(MDIs)一起应用的稳定的药用溶液制剂。特别地，本发明涉及与适用于气溶胶给药的加压计量吸入器(MDIs)一起应用的溶液，其含有
- 一种可以增加胎儿吸氧量的负压氧舱的制作方法【专利摘要】本实用新型涉及孕妇负压吸氧的装置，具体为一种可以增加胎儿吸氧量的负压氧舱，包括负压舱室，舱室上带有可以开启和关闭的舱门，舱门四周装置有气体密封圈，舱室内部装有和外部空气连通的戴到孕妇头上
- 眼科治疗托架的制作方法【专利摘要】本实用新型是一种眼科治疗托架，其特点是：它包括立柱、横梁、夹紧装置，所述立柱的底端与夹紧装置固连、顶端与垂直调整装置滑动连接，所述横梁与水平调整装置滑动连接，水平调整装置与垂直调整装置固连，所述肘托装置与横
- 一种监测睡眠中的呼吸状态及自动唤醒的装置制造方法【专利摘要】本装置公开了一种监测睡眠中的呼吸状态及自动唤醒的装置，包括呼吸音响及频率的检测模块、智能终端音响模块、智能终端腕带振动模块，呼吸音响及频率检测模块的数据输出端连接智能终端音响模块的
- 专利名称：一种气管套管固定装置的制作方法技术领域：本实用新型属于医疗器械技术领域，具体涉及一种气管套管固定装置。 背景技术：目前，固定气管套管时使用绷带或布带，固定带容易被痰液、汗液、血液以及伤口渗出液等污染，一次性气管套管虽配有化纤带，但
- 专利名称：一种治疗咽喉部炎症的中药制剂及其制备方法技术领域：本发明涉及一种治疗咽喉部炎症的药物及其制备方法，尤其是一种用于治疗慢性咽喉炎、咽喉滤泡增生、咽喉有异物感和咽喉疼痛的中药喷雾制剂及其制备方法。背景技术：慢性咽喉炎、咽喉滤泡增生、咽
- 专利名称：8位取代异喹啉衍生物及其用途的制作方法技术领域：本发明涉及新颖的在8位具有取代的异喹啉衍生物以及以该衍生物作为有效成分的药物组合物。背景技术：核因子κ B (NF-κ B)是一种对基因(该基因涉及与生物体生存相关的反应)的表达进行
- 一种内置冲洗滴注管的封闭创面敷料装置制造方法【专利摘要】本实用新型公开了一种内置冲洗滴注管的封闭创面敷料装置，该敷料装置包括：上下设置的第二敷料层和第一敷料层，多个内置冲洗滴注管，总管，负压引流管和外置冲洗滴注管；制备第二敷料层的材料的孔径
- 专利名称：纳米经络通贴敷剂的制作方法技术领域：本发明涉及经络贴敷剂技术领域，尤其是一种纳米经络通贴敷剂。背景技术：现有的经络通贴敷剂不能快速到达病灶靶部位修补破损细胞，使细胞质复原和激活调整体内的免疫系统不能达到人们预期的效果，且该贴敷剂治
- 一种含双氯芬酸钠的微丸组合物及其制备方法【专利摘要】本发明属于制药领域，具体涉及一种双氯芬酸钠的微丸组合物及其制备方法。本发明中所述组合物由不同释放性能的微丸组成，具体为总重量20-35％的肠溶微丸和80-65％的缓释微丸，其中肠溶微丸通过
- 专利名称：一种治疗子宫肌瘤、卵巢囊肿的中药组合物的制作方法技术领域：:本发明涉及中医成药，尤其是一种治疗妇科子宫肌瘤、卵巢囊肿的中药水丸剂。背景技术：:子宫肌瘤是由于子宫平滑肌组织增生而形成的良性肿瘤，其发病原因尚不明确，从年龄及临床表现揭
- 专利名称：一种防治神经衰弱的奶茶的制作方法技术领域：本发明属于营养保健食品领域，具体涉及一种防治神经衰弱的奶茶的制作方法。背景技术：目前大多数学者认为精神因素是造成神经衰弱的主因，凡事能引起持续的紧张 心情和长期的内心矛盾的一些因素，使神经
