专利名称：一种含神经节苷脂为主的糖脂类物质的生产方法
技术领域：
本发明是一种脑保健营养品的生产方法，即从动物脑中提取含有神经节苷脂为主的糖脂类物质的生产方法神经节苷脂是一类含有N-乙酰神经氨酸的膜糖脂，能有益于人脑功能的发育和增强记忆，六十年代已被溶液提取法制得(Folchpi，J.等，J.Biol，Chem，226∶497，1957)，主要制成化学试剂供生理、医学等领域的科学实验，其来源除在各实验室自行少量试制外，由美国西格玛(SIGMA)公司生产供应，该方法是以牛脑为主要原料，用氯仿-甲醇为主要提取剂，然后加水和盐溶液分层提取，再经层析纯化获得。由于采用对人体有害的大量氯仿和甲醇作溶剂，无论从生产操作、废液排放、废气外逸均不利于生产操作人员的身体健康，如用作保健营养品是极不合适，而且产品中还会留存微量的甲醇，对服用者是极不安全的，曾报导用氯仿一乙醇溶液提取神经节苷脂为主的糖脂类物质的方法(CN93112578.2)由于仍然采用大量的氯仿，不仅对工业生产环境带来不少有害因素，而且一旦产品中残留微量氯仿将对人体是不利的，作为保健品的制备，需严禁使用任何有毒有害物质参与工艺生产中。因此，采用无毒无害的溶剂提取生产含有神经节苷脂为主的糖脂类物质的方法仍是人们研究的课题。
本发明的目的是提供一种采用无毒无害的溶剂从动物脑中提取含有神经节苷脂为主的糖脂类物质的生产方法。
本发明的方法采用动物脑为原料，经粉碎、溶剂提取、过滤，浓缩，即可制得含有神经节苷脂为主的糖脂类物质的粗制品。含量≥70％，将浓缩前的含有溶剂的粗制品经第二次溶剂提取，提取液经浓缩后可获得精制品，精制品可以用食用水稀释，还可加入少量防腐剂或/和食糖、葡萄糖或甘露糖，充分搅拌后制成保健口服营养液。精制品也可以与食用淀粉混合后，包装成胶囊或压制成片剂，成为保健口服营养品。
本发明的方法中，将动物脑粉碎，加入40～100％含量的酒精和石油醚提取，动物脑与酒精和石油醚的重量比是1∶1～20∶0.5～8，推荐重量比为1∶2～10∶1～5，经过滤、清液、浓缩，除杂质和溶剂后获得粗制品，也可以在动物脑中加入40～100％含量的酒精后先粉碎，再加入石油醚提取，过滤获清液，浓缩获粗制品。
本发明方法中可以将上述浓缩前的含有溶剂的粗制品清液中，加入石油醚进行第二次提取，动物脑与第二次溶剂的重量比为1∶3～20，推荐重量比为1∶5～15，然后进行浓缩，除溶剂，或冷冻干燥，获得精制品。
本发明方法中所述的溶剂提取比例，采用更大量酒精或石油醚也是可以的，但实际效果仍然一样，反而浪费能源和人力。
本发明的方法还可以将浓缩后的粗制品或精制品用1～2000倍重量食用水稀释配制成保健营养口服液，该口服液还可含有少量防腐剂或/和食糖、葡萄糖或甘露糖。
本发明的方法还可以将冷冻干燥后的粉末与1～100倍重量的食用淀粉混合，压片或装入胶囊。
本发明的方法中所用的动物脑最好是哺乳动物的脑，采用新鲜或冷冻的动物脑，通常需去除碎骨、杂物、漂去血污、沥干。
本发明的方法中所述的酒精最好是食用酒精，含量以≥85％的酒精为好。所述的石油醚推荐60～90℃的石油醚。提取时间一般为0.1～5小时，推荐为0.5～3小时。
本发明的方法中，提取和浓缩温度控制在60℃以下，以10～30℃为宜。
采用本发明的方法制得的含有神经节苷脂为主的糖脂类物质的保健营养品，均具有增强学习和记忆的功能，能促进神经细胞的生长发育和神经系统损伤后的恢复，不但生产方法简便，使用溶剂对环境和人体均无害，产率≥90％，适宜于大规模的工业化生产。
通过下述实施例将有助于理解本发明，但并不限制本发明的内容实施例1粗制品的制备将新鲜或冷冻的猪脑1Kg，除去杂物、漂去血污后沥干。加入70～95％的食用酒精1～5Kg，在转速1000～3000转/分和室温下，捣碎机捣碎0.5～5分钟，再加入1～4Kg石油醚，搅拌0.5～3小时，过滤，滤液经浓缩。获粗产物。产物含有神经节苷脂为主的糖脂类物质≥90％。
实施例2粗制品的制备将新鲜干净的牛脑1Kg，在0～30℃时，加入2～5Kg 85％的酒精和1～3Kg的60～90℃石油醚，在捣碎机中捣碎0.1～2小时，过滤，滤出清液经浓缩，获粗产物。
实施例3精制品的制备将实验例1或2中未经浓缩的清液，用5～10Kg石油醚提取，有机相经减压浓缩和/或冷冻干燥分别得到以神经节苷脂为主的糖脂类物质的保健口服营养液或粉未的精制品。
实施例4制剂的制备将实施例3浓缩后的精制品，用1～2000倍重量的食用水稀释，成保健口服营养液。还可少量加入防腐剂、食糖。
将实施3冷冻干燥后获的粉末，用1～100倍重量的食用淀粉混合，压制成片剂或分装成胶囊。
实施例5提取物对小鼠条件性主动回避行为的影响实验动物昆明种小鼠40只，雌雄兼有，服用前的体重为12～17g。
每5只饲养在一笼内。实验方法40只小鼠随机分为两组，一组为对照组，另一组为实验组。
实验前禁饮水一天，实验时，每只动物每天饮水量为5ml水左右(实施例1或3的保健口服营养液溶于5ml水中)。
次日开始服用营养液。自然口服进药，共服二周，然后在小鼠穿梭箱内进行主动回避条件反射训练。10次测试中有9次出现条件性反应定为学会标准。达到学会标准后，停止训练1个月后再进行记忆保持的检查。学习实验结束后，从对照组和实验组分别随机各选出2只小鼠送上海医科大学病理教研室作病理切片检查，心、肝、肺、肾、脑等主要脏器均无异常。给药剂量实验组的动物每笼给含神经节苷脂为主的糖脂类物质5mg/25ml，每天每只动物平均服用含神经苷脂为主的糖脂类物质1mg/5ml左右水溶液。对照组服用等量的自来水。实验结果学习的情况对照组小鼠达到学会标准所需的训练次数为31.4±3.2，而实验组所需的次数为26.9±2.4。经统计处理P＜0.001，两组间的差异非常显著，服用含神经节苷脂为主的糖脂类物质的实验组明显快于对照组(请看表1)。
这一实验结果表明保健口服营养液有增强小鼠学习能力的作用。记忆保持情况停止训练1个月后，对照组小鼠正确反应的百分数为32.8±9.0，而实验组正确反应的百分数为50.8±10.6，经统计处理P＜0.001，两组间的差异非常显著(请看表2)。这说明实验组的记忆保持明显优于对照组，该口服营养液有增强记忆的作用。体重变化服用2周后对照组体重平均增加10.85g。实验组动物的体重平均增加18.1g。这说明本发明的保健口服营养液可能有较高的营养价值。毒性病理试验将对照组和实验组的小鼠随机各取二只，各取心、肝、肺、肾、脑、脾等组织切片，经光镜检查均未见异常病理改变，二者间完全相同，均显示正常小鼠组织学所见范围。
根据以上实验可以认为含神经节苷脂为主的糖脂类物质确能增强小鼠的学习、记忆功能。
实施例6提取物对老年人记忆功能的影响本实验从94年11月至95年1月进行，测试对象为徐汇区肇嘉浜路第一居委会所属范围内老年居民。测试对象的最大年龄为82周岁，最小为61周岁，男女皆有，共34人。在服用实施例所述的保健口服营养液或安慰剂前，先对测试对象进行了一次记忆商的测试，并按中国科学院心理研究所编制的临床记忆量表计算，求得记忆商(MQ)，并根据这三十四人得分情况进行分组，(年龄段相对均等、记忆商值两组也相对均等)，随机把其中的一组定为对照组(共16人)服用不含提取物的安慰剂；另一组为实验组(共18人)服用脑组织提取物，剂量为5mg/10ml/日。口服一个月后，对受试者再进行一次记忆商(MQ)的测试，并按记忆量表算出记忆商(MQ)。
测试结果表明(见表3)，对照组服用安慰剂前后的记忆商分别为97.9±12.6和98.6±13.5。经统计学处理(P＞0.05)，无显著性差别。实验组服用提取物前后的记忆商分别为101.9±8.9和112.3±10.6。经统计学处理(P＜0.001)，表明服用提取物前后的记忆商有显著性差异。18位服用提取物的老人中有15位的记忆商有不同程度的改善，占服用人数的83％。
以上结果表明，脑组织提取物有改善老年人记忆能力的功效。表1.达到学会标准所需 表2.正确反映的百分数的训练次数 (记忆保存的结果)次数 对照组实验组次数对照组实验组1. 34291. 20352. 31312. 35653. 29243. 30654. 28264. 45355. 25315. 25406. 33306. 50557. 36267. 20458. 35278. 35459. 33299. 307010. 322810. 355011. 322811. 354512. 342812. 504013. 302513. 305014. 332214. 255515. 262615. 306516. 332716. 304517. 362617. 405518. 322618. 255519. 322420. 2725 平均数 32.7778 50.8333标准差 8.9479 10.6066平均数 31.4 26.9标准差 3.15232.3819 P＜0.001P＜0.001
表3老年人记忆商测试结果服用安慰剂前后的比较 服用提取物口服液前后的比较序号 服用前 服用后一个月序号 服用前 服用后一个月1. 81 74 1. 111 1152. 94100 2. 106 1033. 80 93 3. 99964.118132 4. 97 1045.113112 5. 97 1146.117113 6. 106 1297.104 95 7. 89 1098.100100 8. 119 1349.103104 9. 112 12410. 104 93 10. 109 12311.93100 11. 101 11812.83 80 12. 104 10213. 107104 13. 94 11314.98 94 14. 899715.81 93 15. 88 10816.91 90 16. 110 11317. 96 105平均数 97.937598.652518. 108 115标准差 12.609413.4659平均数 101.9444 112.3333P＞0.05 标准差8.907810.5607P＜0.00权利要求
1.一种从动物脑中提取含有神经节苷脂为主的糖脂类物质的生产方法，包括粉碎、溶剂提取、过滤和浓缩，其特征是将干净的动物脑经粉碎，加入40～100％含量的酒精和石油醚提取，或者在干净的动物脑中加入40～100％含量的酒精后粉碎，加入石油醚提取，上述提取物过滤，清液浓缩，所述的动物脑、酒精和石油醚的重量比是1∶1～20∶0.5～8。
2.一种如权利要求1所述的生产方法，其特征是动物脑、酒精和石油醚的重量比是1∶2～10∶1～5。
3.一种如权利要求1所述的生产方法，其特征是将所述的提取液用石油醚进行第二次提取，将提取液浓缩，动物脑和二次提取用的石油醚重量比为1∶3～20。
4.一种如权利要求3所述的生产方法，其特征是所述的动物脑与二次提取用的石油醚重量比为1∶5～15。
5.一种如权利要求1、2、3或4所述的生产方法，其特征是所述的酒精是含量≥85％的食用酒精。
6.一种如权利要求1、2、3或4所述的生产方法，其特征是所述的石油醚是60～90℃的石油醚。
7.一种如权利要求1、2、3或4所述的生产方法，其特征是所述的提取时间为0.1～5小时。
8.一种如权利要求1、2、3或4所述的生产方法，其特征是所述提取和浓缩温度是低于60℃以下，
9.一种如权利要求1、2、3或4所述的生产方法，其特征还可用1～2000倍重量的食用水稀释浓缩物。
10.一种如权利要求1、2、3或4所述的生产方法，其特征是还可用1～100倍重量的食用淀粉与浓缩物混合，压片或装胶囊。
全文摘要
本发明是一种从动物脑中提取含有神经节苷脂为主的糖脂类物质的生产方法，包括粉碎、溶剂提取、过滤和浓缩。浓缩物是一种脑保健食用品，还可用食用水稀释或与食用淀粉混合。本发明的方法采用无毒无害的溶剂，提取率高，方法简便，适于工业化生产。
文档编号A61K31/70GK1119190SQ95111569
公开日1996年3月27日 申请日期1995年3月24日 优先权日1995年3月24日
发明者梅镇彤, 韩永根, 孙立群 申请人:中国科学院上海生理研究所