专利名称：作为抗肿瘤剂的2－[[(2－羟乙基)氨基]乙基]－5－[[(2－甲基氨基)乙基]氨基]吲唑并 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及2-[[(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-[[(2-甲基氨基)乙基]氨基]吲唑并[4，3-gh]异喹啉-6(2H)-酮及其药用盐。
此化合物具有强抗肿瘤活性。
在临床试验中，一些1，4-二[(氨基烷基)氨基]蒽-9，10-二酮具有抗肿瘤活性。特别有益的是阿美蒽醌4-双{[2-(2-羟乙基氨基)乙基]氨基}蒽-9，10-二酮，和米托蒽醌5，8-二羟基-1，4-双{[2-(2-羟乙基氨基)乙基]氨基}蒽-9，10-二酮(Zee-Cheng等，药物化学杂志，(1978)，21，291-4；Cheng等，“药物化学进展”，Ellis，G.P.and West，G.B.，eds；ElsevierAmsterdam，1983；pp.20，83及其引用文献)。米托蒽醌是广谱抗肿瘤剂，其活性与蒽环类抗菌素阿霉素相似。临床试验表明在治疗发展性乳腺癌、急性白血病和淋巴瘤方面有特别确实的活性(Legha，Drugsof Today，(1984)，20，629)。这些药物的局限性在于其心脏毒性(特别是米托蒽醌)及mielo抑郁毒性(这两种药物)。此外，这两种药物对阿霉素已具有耐药性的细胞组织型表现出交叉耐药性，所述耐药性由糖蛋白P的过度表达介导。一部分抗肿瘤抗菌素具有这种所谓的多重耐药性，如安吖啶和鬼臼毒素及其衍生物。这是用所述抗菌素治疗实体瘤时治疗失败的主要原因。
为了克服这些缺陷，制备了一些用发色团修饰的蒽二酮类。例如，EP-A-103381要求保护具有抗肿瘤活性的2-氨基烷基-5-氨基烷氨基蒽并[1，9-cd]吡唑-6(2H)-酮类(蒽并吡唑类)。H.D.Hollis Showalter等报道了在预临床试验中所述化合物的抗肿瘤活性(J.Med.Chem.，30，121-131(1987))。
但是，蒽并吡唑不能避免毒性副作用，如严重的白细胞减少症(W.H.O3和4级)及中性粒细胞减少症(W.H.O.4级)，结果导致蒽并吡唑CI-941在临床I期和II期试验中用药剂量受到限制(I.E.Smith等，J.Clin.Oncol.，9，2141-2147(1991))。此外，用CI-941治疗鼠产生了显著的肾毒性(D.Campling e M.E.C.Robbins，Nephrotoxicity，Peter H.Dekker Bach and.，Pag.345-352(1991)，New Yorkvedi Chem.Abstracts116294n(1992))，并且这些作者提出肾损伤可能是蒽并吡唑治疗的临床问题。再者，最近文献[Drugs of the Future，17，725(1992)；Judson，I.R.等，Proc.Amer.Assoc.Cancer Res.，32，abstr.1059(1991)]说明蒽并吡唑CI-941对人引起不可逆的心脏毒性，但尚无急性心脏病症状的报道。
基于上述原因，研究新的活性药物仍迫在眉睫。
蒽并吡唑氮杂类，其氮原子在8位和9位引入，描述于PCT/US93/08241(1994年3月31日公开，WO94/06795)。在体外和体内模型中所述化合物具有较高的抗肿瘤活性，且与阿霉素和米托蒽醌比较，对LoVo/DX细胞系无交叉耐药性。这些数据促使人们设计对抗肿瘤抗菌素治疗敏感的白血病和实体瘤有临床活性的药物。
现已发现，蒽并吡唑9-氮杂类，2-[[(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-[[(2-甲基氨基)乙基]氨基]吲唑并[4，3-gh]异喹啉-6(2H)-酮具有出人意料的活性。这使它与此类其它衍生物明显不同。事实上，所述化合物与其同类物比较，除接受治疗动物的平均存活时间有较大增长外，在数量具有统计学意义的动物中肿瘤彻底退化，因此，可确信其在临床试验中是有效的。
本发明涉及式(I)的2-[[(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-[[(2-甲基氨基)乙基]氨基]吲唑并[4，3-gh]异喹啉-6(2H)-酮及其药用酸加成盐
药用酸的例子为无机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、焦磷酸，或者有机酸，如乙酸、三氟乙酸、丙酸、枸橼酸、苯甲酸、乳酸、马来酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、谷氨酸、天冬氨酸、葡糖酸、抗坏血酸、对甲苯磺酸、甲磺酸，或者其它常用酸。
具体地讲，本发明涉及2-[[(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-[[(2-甲基氨基)乙基]氨基]吲唑并[4，3-gh]异喹啉-6(2H)-酮三盐酸盐。
本发明化合物可由式(II)的中间体与式(III)的肼反应制备
其中U选自F、Cl、对甲苯磺酰氧基(OTs)、甲磺酰氧基(OMs)，而M是F或Cl，条件是U和M不同时为Cl；H2N-NH-CH2-CH2-N(-P)-CH2CH2-OP″(III)其中P和P′可以独立地是氢或在反应条件下稳定的适当保护基。
所得式(IV)的化合物
再通过与式(V)的胺反应转化为式(I)的化合物H2N-CH2CH2-N(-P)Me (V)其中P限定如上，随后将存在的保护基P和P′裂解。在此情况下，得到式(I)化合物的盐，其相反离子是裂解反应用酸的官能团。如果使用过量的气态氢氯酸，将得到式(I)化合物的三盐酸盐。
合成式(I)化合物优选的方法包括式(II′)的中间体
与式(III)的肼反应，再与式(V)的胺反应并随后将存在的保护基P和P′裂解。保护基P和P′的例子为(C1-C3)-酰基衍生物(优选乙酰基)、(C1-C4)-烷氧羰基衍生物(优选叔丁氧羰基)和(C7-C10)-芳烷氧基羰基衍生物(优选苄氧羰基)。
式(II)中间体与式(III)肼的反应可以通过将中间体(II)与化学计量用量或过量的肼(III)加热进行反应。一般在惰性溶剂中，如二氯甲烷、氯仿、1，1，1-三氯乙烷、二甲氧基乙烷、四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、吡啶、甲基吡啶、醇(甲醇、乙醇)或其混合物(或者，化合物(III)作为溶剂)，在任意无机碱如碱金属或碱土金属碳酸盐或碳酸氢盐、或有机碱如三烷基胺的存在下，在温度为-20℃至溶剂沸点之间进行此反应。优选在溶剂如吡啶、四氢呋喃、二甲基亚砜或N，N，N′，N′-四甲基乙二胺中，用2至10当量的肼(III)并在温度为5℃至50℃条件下进行此反应。
式(II′)中间体与式(III)肼的反应优选在能溶解试剂的溶剂，如四氢呋喃和醇(乙醇、甲醇)的混合物中，在温度为-10℃至室温条件下进行。
式(IV)化合物与式(V)胺的反应可以通过化合物(IV)与化学计量用量或过量的胺(V)加热反应进行。一般在惰性溶剂如二氯甲烷、氯仿、1，1，1-三氯乙烷、二甲氧基乙烷、四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、吡啶、甲基吡啶或其混合物中(如果需要，使用胺(V)本身作为溶剂)，任意在无机碱如碱金属或碱土金属碳酸盐或碳酸氢盐、或者有机碱如三烷基胺的存在下，在温度为-20℃至溶剂沸点之间进行此反应。
优选在溶剂如吡啶、氯仿或二甲基亚砜中，用2至10份的胺(V)并在温度为室温至100℃条件下进行此反应。
U是OTs的中间体式(IV)与式(V)胺的反应可以在溶剂如吡啶或二甲基亚砜，在温度为室温至100℃之间进行。
任何保护基P和P′的裂解可以按照本领域技术人员熟知的方法进行，例如Green，T.W.，Wuts，P.G.M.，有机合成中的保护基(ProtectiveGroups in organic Synthesis)，第二版，John Wiley & Sons，1991。
例如，在温度为20℃至50℃，在溶剂如乙醇、甲醇、二氯甲烷、氯仿或其混合物中，用过量的无水氯化氢处理被保护的中间体可以将N-叔丁氧羰基裂解。此反应时间在几分钟至若干小时。
式(II′)化合物可以由化合物(VI)起始
通过对1，4-二氟苯的Friedel-Crafts酰化反应，在氯化铝存在下，在约90℃反应约22小时，得到(VIIa)和(VIIb)区域异构体的混合物
或者，将中间体(VI)与1-锂-2，5-二氟苯反应得到区域异构体(VIIa)和(VIIb)的混合物。1-锂-2，5-二氟苯由1，4-二氟苯与烷基锂如仲丁基锂在THF中在低温下制备。
然后将区域异构体(VIIa)和(VIIb)的混合物用发烟硫酸(20％SO3)在130-140℃环化得到化合物(VIII)
然后将化合物式(VIII)用于下列反应a)在甲醇和THF中，(VIII)和甲醇钠反应得到中间体(IX)
b)用甲磺酸在约110℃将中间体(IX)的甲氧基去甲基化，用异丙醇结晶后得到中间体(X)
c)在吡啶中，室温下，化合物(X)与对甲苯磺酰氯反应得到所需的中间体(II′)。
式(II)的中间体，其中U是氯而W是氟，可以按照下列反应步骤制备(a)在-50℃至-78℃，在惰性溶剂如醚(THF)及碱(如丁基锂或二异丙基氨基锂)的存在下，3-氯吡啶与二氧化碳反应得到3-氯-烟-4-甲酸；(b)3-氯-烟-4-甲酸酯化后得到3-氯-异烟酸甲酯。可以使用的一种试剂是重叠甲烷，在惰性溶剂如乙酸乙酯中。
(c)在二氯二(三苯基膦)镍催化剂的存在下，3-氯-异烟酸甲酯与有机锌(由2-氟-5-氯α-溴-甲苯和反应活性锌，在THF中，在约0℃得到)反应[Knochel等，Chem.Rev.93，717-2188(1993)；Negishi等，J.Org.Chem.，42，1821-1823(1997)]得到中间体(XI)
所述反应可以在惰性溶剂如醚(THF)，在-10℃至室温下进行；(d)中间体(XI)甲酯水解得到相应的酸衍生物。水解反应的条件为使用碱金属氢氧化物(例如，氢氧化钠)，在水性和/或醇介质中，并且温度为室温至溶剂或溶剂混合物的沸点之间；(e)步骤(d)中得到的酸在发烟硫酸和/或发烟硫酸(oleum)存在下，在100-130℃环化得到中间体(II)，其中U为氯而W为氟。
或者，可以用下列方案得到U为氯而W为氟的中间体(II)(a)在催化剂量的氮杂-异丁腈或二苯甲酰过氧化物的存在下，在惰性溶剂如四氯化碳中，在室温至80℃，用N-溴-琥珀酰亚胺将2-氯-5-氟甲苯溴化。
(b)步骤(a)中得到的α-溴-2-氯-5-氟甲苯在四氢呋喃中与活化的锌反应；随后将所得的有机锌与N-苯氧羰基烟酰氯(在四氢呋喃中用氯甲酸苯基酯将烟酸甲酯酰化得到)反应得到中间体(XII)
所述反应可以在-5℃和室温之间进行。(c)将中间体(XII)的二氢吡啶环芳香化后得到吡啶环，例如通过与硫在萘烷中回流。
(d)用碱金属或碱土金属氢氧化物的醇溶液将此甲酯水解。例如，可以将甲醇中的氢氧化钠用作该试剂。
(e)将(d)中得到的酸衍生物在发烟硫酸(20％SO3)中，在高温(100-150℃)下环合得到中间体(II)。
式(VI)化合物可以由3，4-吡啶-二甲酸(市售)与适宜的脱氢试剂如羧酸酐(乙酸或三氟乙酸酐)、碳化二亚胺(N，N′-二环己基碳化二亚胺或类似的试剂反应制得。
优选的方法是用乙酸酐在约110℃处理3，4-吡啶-二甲酸。
按照本领域技术人员熟知的常规方法，式(I)化合物的盐可以由一种转化为另一种。本发明化合物的生物试验按照下列体外和体内方法由美国国家癌症研究所对本发明化合物生物活性进行评价。
用由转移节(metastaticnodule)分离的人集落腺癌细胞系(Lovo)评价体外细胞毒活性。按照MTT试验(Mosman，T.“细胞生长和存活的快速比色试验应用于繁殖和细胞毒性试验”，J.Immunol.Methods，(1983)，65，55-63；Green，L.M.，“细胞生存力的快速比色试验应用于细胞毒性和生长抑制淋巴因子的定量试验”，J.Immunol.Methods，(1984)，70，257-268)进行本发明化合物与米托蒽醌、阿霉素和CI-941比较试验。如表I报告，本发明化合物比阿霉素相比具有活性。
用P388鼠白血病模型进行体内生物活性研究。将P388鼠白血病细胞静脉(iv)注射到CD2F1鼠体内。肿瘤移植后约24小时开始治疗，并且此产品静脉给药的剂量按照先前确定的方案，通常3天为一个疗程。试验进行60天以上并记录每只动物死亡的日期。用每组的平均存活时间(MST)按照下式确定％T/CT/C％＝[(MST治疗组)/(MST对照组)]×100
与对照组相比(未治疗组)，本发明的化合物在增加接受治疗动物的存活时间方面具有活性。此外，证明本发明的化合物较米托蒽醌具有更好的耐受性(表II)。
用两种人肿瘤异体移植物，人乳腺MX-1肿瘤和卵巢肿瘤A2780，进一步研究本发明化合物的体内生物活性(表II)。证明以“肿瘤重量抑制(TWI)”表示，本发明的化合物的活性即使不高于CI-941，也与其相等。“肿瘤重量抑制”按照如下计算TWI％＝100-[(肿瘤的平均相对重量治疗组)/(肿瘤的平均相对重量对照组)×100]此外，与CI-941相反，本发明的化合物以试验剂量使用时肿瘤彻底退化的数量显著大，并且无毒性作用。肿瘤退化是指与肿瘤的起始重量相比，治疗结束后测量30天中显示的肿瘤质量的降低。肿瘤彻底退化是指肿瘤块消失。
因此，基于所示的结果，预计本发明的化合物对于对用抗肿瘤抗菌素和蒽二酮治疗敏感的人白血病和实体瘤具有活性。
因此，当以0.5至20mg/kg体重的剂量给药时，本发明的化合物可以用作药物组合物的活性成分，该药物组合物用来退化和/或治疗哺乳动物的肿瘤。优选的给药剂量可以为1至18mg/kg哺乳动物体重。更具体地讲，对于人优选的给药剂量可以为5至200mg/m2体表。
可以调整此剂量以适于其它治疗方案，例如放疗。表I用药物治疗1小时后，本发明化合物(I)、米托蒽醌、阿霉素和CI-941对人集落腺癌细胞系(LoVo)的体外生物活性评价化合物 IC50±S.D.(μg/ml)化合物(I) 0.54±0.17米托蒽醌0.026±0.017阿霉素 0.7±0.49CI-941 0.039±0.035表II对鼠白血病P388和人肿瘤异体移植物(MX-1和A2780)鼠模型，本发明的化合物(I)、米托蒽醌和CI-941的体内生物活性评价化合物P388 iv/iv+1，4，7 MX-1 sc/iv q7dx3 剂量 A 2780 sc/iv q4dx3剂量T/C％ 毒性 剂量 TWI％ 毒性 (mg/kg) TWI％ 毒性 肿瘤退化(mg/kg) (mg/kg)化合物(I) 7.5 1670/88.9 78 0/5 7.5 99 0/74/717.596 0/5 9.7 100 0/76/7米托蒽醌 3 19516/284 4.5 74 16/60 - -- -CI-9416 1330/89 83 0/7 8 87 0/70/79 1440/813.593 0/4010.497 0/70/713.51330/817.597 9/3313.5100 5/71/7
含式(I)化合物的药物组合物包括在本发明的范围内。这些组合物可以含有在哺乳动物体内，对阿霉素、蒽二酮和蒽并吡唑类治疗敏感的肿瘤表现出抗肿瘤活性的任意量的式(I)化合物。
除式(I)化合物外，此药物组合物可以含有适于任何给药途径的且为液体或固体形式的药用赋形剂、给药途径如口服、非肠道、静脉内、皮内、皮下或局部给药。
式(I)化合物的给药途径是口服。口服组合物一般含有惰性稀释剂或可食性载体。它们可以包在明胶胶囊中或压成片剂。其它口服给药形式为胶囊、丸剂、酏剂、混悬剂或糖浆剂。
片剂、丸剂、胶囊剂及相似的组合物可以含有下列组份(除活性成分外)粘合剂，如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖；崩解剂如藻酸、淀粉甘醇酸钠(primogel)、玉米淀粉等；润滑剂如硬脂酸镁；助流剂如胶态二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精，或者调味剂如薄荷香料、水杨酸甲酯或桔味香料。当组合物是胶囊形式时，其中还含有液体载体如脂肪油。其它组合物中可以含有能改变其物理形式的多种物质，例如包衣剂(对片剂和丸剂)如糖或紫胶片。用于制备组合物的物质应是药学纯的，且其使用剂量是无毒的。
为了制备非肠道给药的药物组合物，活性组份可以含在溶液或混悬液中，其中还可以含有下列物质无菌稀释剂如注射用水、盐水、油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇；抗氧剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、枸橼酸盐或磷酸盐及调节溶液张力的试剂，如氯化钠或右旋糖。非肠道制剂可以包装于安瓿、单剂量注射器、玻璃或塑料小瓶中。本发明化合物的合成制备13，4-吡啶-二羧酸酐(VI)将3，4-吡啶-二羧酸(15g)和乙酸酐(30ml)的混合物回流2小时。蒸馏掉过量的乙酸酐并将此残余物通过升华(123℃，3mmHg)纯化得到3，4-吡定-二羧酸酐，为白色固体，m.p.74-76℃。1H-NMR(200MHz)in CDCl37.94ppm(d，1H)；9.24ppm(d，1H)； 9.39ppm(s，1H).制备2(VIIa)和(VIIb)的混合物将3，4-吡啶-二羧酸酐(5g)和三氯化铝(17.5g)在1，4-二氟苯(65ml)中油浴110℃加热22小时。通过蒸馏回收过量的1，4-二氟苯。在冰浴中将残余物冷却并加入水/冰(75ml)和浓盐酸(6.3ml)。过滤出沉淀的固体并干燥得到4-(2，5-二氟苯甲酰基)烟酸和3-(2，5-二氟苯甲酰基)烟酸约4∶1的混合物(7.7g)，为白色粉末，用乙腈和水重结晶；m.p.214-217℃。1H-NMR(200MHz)in d6-DMSO7.4ppm(m)；7.5ppm(m)；7.9ppm(m)；8.8ppm(d)；8.9ppm(d)；9.15ppm(s).制备36，9-二氟苯并[g]异喹啉-5，10-二酮(II′)将制备2中的(VIIa)和(VIIb)的混合物(61.07g)的发烟硫酸(20％SO3，100ml)溶液在140℃加热并分四批(每批13.2ml)再加入发烟硫酸，加入间隔为20分钟。最后一批加完后，将混合物进一步加热20分钟，然后在室温冷却并加入冰(1500ml)、水(1500ml)和35％氢氧化钠(350ml)的混合物。用二氯甲烷(1×1000ml，然后3×500ml)提取此混合物。用水(2×1000ml)洗涤合并的有机提取液、用硫酸钠干燥并减压蒸出溶剂。所得暗红色固体(56g)溶解在热THF(840ml)中并用活性炭(8.4g)脱色。30分钟后将尚温热的混合物过滤并将滤液浓缩至200ml。过滤分离出所得沉淀得到43g产品，m.p.201-203℃。
通过滤液浓缩至体积为70ml，得到第二批产品(3.35g)，m.p.200-202℃。制备49-氟-6-甲氧基苯并[g]异喹啉-5，10-二酮将在氮气氛下由无水甲醇(97.6ml)和钠(2.024g)新制备的甲醇钠溶液，在2小时35分钟内滴加到6，9-二氟苯并[g]异喹啉-5，10-二酮(19.615g，制备3)的无水THF(883ml)溶液中，室温下搅拌。加毕，将此反应混合物浓缩至原体积的一半，然后在18℃保持30分钟。将固体滤出并用100ml THF洗涤，然后将其悬浮于水(80ml)中，搅拌放置过夜并再次过滤得到9.3g粗品。将其悬浮于二氯甲烷(45ml)中并回流30分钟。室温冷却后，将产品过滤并用二氯甲烷(5×3ml)洗涤分离的固体，然后在40℃真空干燥得到8.65g纯品，m.p.248-250℃。1H-NMR(200MHz)in CDCl34.05ppm(s，3H)；7.40ppm(dd，J＝9.39，3.91Hz，1H)；7.55ppm(dd，J＝10.37，9.39Hz，1H)；8.00ppm(dd，J＝5.09，0.78Hz，1H)；9.05ppm(d，J＝5.09Hz，1H)；9.48ppm(d，J＝0.78Hz，1H).制备59-氟-6-羟基苯并[g]异喹啉-5，10-二酮在惰性气体氛和搅拌的条件下，将29g 9-氟-6-甲氧基苯并[g]异喹啉-5，10-二酮在145ml甲苯磺酸中的混合物在110℃加热2小时，然后加入到3000ml水中。搅拌1小时后，过滤出形成的沉淀，用约300ml水洗涤，并再置于2000ml水中，搅拌30分钟后，再过滤。用乙酸乙酯500ml提取母液。分离有机相并减压蒸出溶剂。将残余物(3g)与第一批结晶合并，并将它们全部置于500ml异丙醇中。搅拌1小时后，过滤出结晶的产品得到24.16g产品，m.p.189-192℃。制备69-氟-6-(对甲苯磺酰氧基)苯并[g]异喹啉-5，10-二酮室温，搅拌并在惰性气体氛下，向9-氟-6-羟基苯并[g]异喹啉-5，10-二酮(18g)和三乙胺(17.51ml)在二氯甲烷(540ml)的溶液中，加入21.37g甲苯磺酰氯。约8小时后，用200ml水洗涤此反应混合物并用二氯甲烷提取洗涤液。用硫酸钠干燥合并的有机相并将溶剂减压蒸发掉得到80g残余物。用294ml己烷吸收此残余物并在室温放置1小时，然后过滤并用200ml己烷洗涤过滤器。在40℃，将所得固体(29g)用二氯甲烷(160ml)和异丙醇(60ml)的混合物结晶。用玻璃纤维过滤器将温热的溶液过滤并浓缩至约120ml。搅拌下2小时后结晶出产品，将其过滤得到第一批产品12.92g。进一步浓缩结晶母液至一半体积得到第二批产品(7.65g)。m.p.170-172℃。制备72-[[(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-(对甲苯磺酰氧基)吲唑并[4，3-gh]异喹啉-6(2H)-酮室温搅拌下，将N-[2-[2-(羟乙基)氨基]乙基]肼(J.Het.Chem.，26，85(1989)；0.179g)在纯乙醇(0.5ml)的溶液滴加至9-氟-6-(对甲苯磺酰氯氧基)苯并[g]异喹啉-5，10-二酮(0.2g，制备6)和三乙胺(0.073g)在2ml THF的溶液中。2小时后，加入第二批N-[2-[2-(羟乙基)氨基]乙基]肼(0.179g)在纯乙醇(0.5ml)的溶液，2小时后将反应混合物浓缩至约1ml。加入20ml水并将所得混合物在室温搅拌过夜，然后过滤分离固体，在40℃真空干燥，最后用热乙酸乙酯吸收得到0.06g产品，m.p.131-133℃。1H-NMR(200MHz)in d6-DMSO/D2O2.45ppm(s，3H)；2.62ppm(t，2H)；3.13ppm(t，2H)；3.40ppm(t，2H)；4.65ppm(t，2H)；7.25ppm(d，1H)；7.40ppm(d，2H)；7.75ppm(d，2H)；7.95ppm(d，1H)；8.15ppm(d，1H)；8.80ppm(d，1H)； 9.40ppm(s，1H).制备82-[2-[N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-(对甲苯磺酰氧基)-异喹啉[8，7，6，-cd]吲唑并-6(2H)-酮向碳酸二叔丁基酯(1.12g)在THF(20ml)和水(4ml)在的溶液中，搅拌下，在2分钟内，分批加入2.132g固体2-[[(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-(对甲苯磺酰氧基)吲唑并[4，3-gh]异喹啉-6(2H)-酮(制备7)。将此混合物在室温下搅拌1小时，然后浓缩至小体积。将残余物用乙醇反复吸收并浓缩至将近干燥，以除去残余的水。用热甲基叔丁基醚将所得固体研碎，然后加入二氯甲烷将固体彻底溶解。然后在轻微的氮气流下将二氯甲烷蒸馏掉。将混合物在室温冷却并过滤分离固体，用大量甲基叔丁基醚洗涤并在40℃真空干燥。得到1.91g绿色固体，m.p.175-178℃。1H-NMR(200MHz，323°K)in d6-DMSO9.43ppm(s，1H)；8.85ppm(d，1H)；8.17ppm(d，1H)；7.98ppm(d，1H)；7.78ppm(d，2H)；7.50-7.30ppm(m，3H)； 4.80ppm(t，2H)；4.67ppm(br.s，1H)；3.75ppm(br.s，2H)；3.57-3.35ppm(br.m，2H)；3.30-2.95ppm(br.m，2H)；2.38ppm(s，3H)；1.17ppm(br.s，4H)；0.90ppm(br.s，5H).制备92-[2-[N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-[(N-甲基-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基)乙基氨基]异喹啉[8，7，6，-cd]吲唑并-6(2H)-酮将2-[2-[N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-(对甲苯磺酰氧基)-异喹啉并[8，7，6，-cd]吲唑并-6(2H)-酮(0.74g)和N-甲基-N-BOC乙二胺(1.561g；Saari，W.S.等，J.Med.Chem.，33，97-101(1989))在6ml吡啶中的混合物在65℃加热6小时30分钟。全部固体溶解。在100℃将此反应混合物加热2小时30分钟，然后将此反应混合物浓缩至小体积。用二氯甲烷100ml和1N氢氧化钠水溶液50ml吸收此残余物，然后分离碱性的水相并用二氯甲烷(2×50ml)提取。用水(50ml)和磷酸二氢钠饱和水溶液(25ml)的混合物洗涤有机提取物，用硫酸钠干燥并减压除去溶剂。通过硅胶色谱(70g，洗脱液二氯甲烷/甲醇973-955)将残余物(950mg)纯化得到585mg产品，为桔黄色泡沫。H1-NMR(200MHz，333°K)in d6-DMSO1.17ppm(s br.，9H)；1.33ppm(s，9H)；2.87ppm(s，3H)；3.05-3.20ppm(m，2H)；3.45ppm(q，2H)；3.52ppm(t，2H)；3.72ppm(q，2H)；3.76ppm(t，2H)；4.46ppm(t br.，1H)；4.76ppm(t，2H)；7.27ppm(d，1H)；7.98ppm(d，1H)；8.20ppm(dd，1H)；8.79ppm(d，1H)；9.20ppm(t br.，1H)；9.51ppm(d，1H).制备102-[2-[N-(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-[(N-甲基-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基)乙基氨基]异喹啉并[8，7，6，-cd]吲唑并-6(2H)-酮向N-甲基-N-BOC乙二胺(2.12g)在7ml无水吡啶的溶液中加入710mg2-[[(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-(对甲苯磺酰氧基)吲唑并[4，3-gh]异喹啉-6(2H)-酮(制备7)，然后将此反应混合物在50℃加热，在氮气氛下搅拌22小时。此后，在70℃再将此混合物加热1小时，然后在40℃减压除去溶剂。在25ml 0.1N氢氧化钠和75ml二氯甲烷之间萃取此残余物。用盐水(25ml)将合并的有机相洗涤两次，用硫酸钠干燥并减压除去溶剂得到约2g棕色油。通过硅胶色谱(50g，洗脱液二氯甲烷/甲醇/氢氧化铵95∶5∶0-85∶15∶0.6)将残余物纯化，随后用二氯甲烷/甲基叔丁基醚重结晶得到339mg产品。m.p.139.5-141.5℃。H1-NMR(200MHz)in CDCl31.48ppm(s，9H)；2.85ppm(t，2H)；2.94ppm(s，3H)； 3.30ppm(t，2H)；3.50-3.75ppm(m，6H)；4.66ppm(t，2H)；6.95-7.20ppm(m，1H)；7.70ppm(d，1H)；8.27ppm(d，1H)；8.80ppm(d，1H)；9.28ppm(t br.，1H)；9.51ppm(d，1H).实施例12-[2-[N-(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-[(N-甲基氨基)乙基氨基]异喹啉并[8，7，6，-cd]吲唑并-6(2H)-酮三盐酸盐向2-[2-[N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-[(N-甲基-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基)乙基氨基]异喹啉并[8，7，6，-cd]吲唑并-6(2H)-酮(563mg；制备9)在20ml纯乙醇中的溶液中，加入5ml 4.11M氯化氢在纯乙醇中的溶液。在室温和氮气氛下，将所得暗红色溶液保持搅拌约20小时。滤出形成的红色固体，用乙醇彻底洗涤并在50℃真空干燥得到414mg产品。m.p.220-222℃(分解)。H1-NMR(200MHz)in D2O2.80ppm(s，3H)；3.35ppm(q，2H)；3.45ppm(t，2H)；3.83ppm(t，2H)；3.87-3.93ppm(m，2H)；4.00ppm(t，2H)； 4.97ppm(t，2H)；7.11ppm(d，1H)；7.91ppm(d，1H)；8.39ppm(d，1H)；8.77ppm(d，1H)；9.34ppm(s，1H).实施例22-[2-[N-(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-[(N-甲基氨基)乙基氨基]异喹啉并[8，7，6，-cd]吲唑并-6(2H)-酮三盐酸盐向2-[2-[N-(2-羟乙基)氨基]乙基]-5-[(N-甲基-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基)乙基氨基]异喹啉并[8，7，6，-cd]吲唑并-6(2H)-酮(320mg；制备10)在14ml纯乙醇中的悬浮液中，在1分钟内，加入5ml6.5M氯化氢的纯乙醇溶液，将温度保持在约0℃。出现红色固体沉淀，加入1.5ml水后该沉淀部分溶解。将此反应混合物在室温保持23小时，然后在约55℃加热2小时。此后，在氮气氛下过滤出红色沉淀，然后用乙醇洗涤，在40℃，然后在室温真空干燥1小时。得到271mg红色固体产品，m.p.220-222℃(分解)。H1-NMR(200MHz)in D2O2.80ppm(s，3H)；3.35ppm(q，2H)；3.45ppm(t，2H)；3.83ppm(t，2H)；3.87-3.93ppm(m，2H)；4.00ppm(t，2H)；4.97ppm(t，2H)；7.11ppm(d，1H)；7.91ppm(d，1H)；8.39ppm(d，1H)；8.77ppm(d，1H)；9.34ppm(s，1H).
权利要求
1.游离碱形式的式(I)化合物及其药用酸加成盐
2.三盐酸盐形式的式(I)的化合物。
3.制备式(I)化合物或其盐的方法，该方法包括下列步骤(a)式(II)的中间体与式(III)的肼反应制备
其中U选自F、Cl、对甲苯磺酰氧基、甲磺酰氧基，而M是F或Cl，条件是U和M不同时为Cl；H2N-NH-CH2-CH2-N(-P)-CH2CH2-OP′(III)其中P和P′可以独立地是氢或在反应条件下稳定的适当保护基；(b)步骤(a)得到的化合物与式(V)的胺反应H2N-CH2CH2-N(-P)Me (V)其中P限定如上；(c)将存在的保护基裂解。
4.权利要求3所述的方法，其中U是对甲苯磺酰氧基，而W是氟。
5.式(II′)化合物的制备方法，该方法包括下列步骤(a)在氯化铝存在下，用3，4-吡啶二羧酸酐对1，4-二氟苯进行Friedel-Crafts酰化反应，得到(VIIa)和(VIIb)区域异构体的混合物
(b)将区域异构体(VIIa)和(VIIb)用发烟硫酸(20％SO3)环化得到化合物(VIII)
(c)将化合物式(VIII)与甲醇钠反应得到式(IX)化合物
(d)用甲磺酸将化合物(IX)中的甲氧基脱甲基化；(e)步骤(d)得到的化合物与对甲苯磺酰氯反应得到式(II′)的化合物。
6.权利要求5所述的方法，其中区域异构体(VIIa)和(VIIb)的混合物是通过3，4-吡啶二羧酸酐与1-锂-2，5-二氟苯反应得到的。
7.制备式(II)中间体的方法，其中U是氯而W是氟，该方法包括下列步骤(a)在碱的存在下，3-氯吡啶与二氧化碳反应得到3-氯-烟-4-羧酸；(b)步骤(a)的酸酯化后得到3-氯-异烟酸甲酯；(c)在二氯二(三苯基膦)镍催化剂的存在下，步骤(b)的3-氯-异烟酸甲酯与2-氟-5-氯-甲苯基锌反应得到中间体式(XI)
(d)化合物(XI)水解并随后将所得酸用发烟硫酸和/或发烟硫酸(oleum)环合得到式(II)化合物，其中U为氯而W为氟。
8.制备式(II)中间体的方法，其中U是氯而W是氟，该方法包括下列步骤(a)将2-氯-5-氟甲苯溴化并随后与反应活性锌反应得到2-氯-5-氟甲苯基锌；(b)步骤(a)中得到的化合物与N-苯氧羰基烟酰氯，后者是用烟酸甲酯与氯甲酸苯基酯反应得到的，反应得到中间体(XII)
(c)将式(XII)二氢吡啶环芳香化后得到相应的吡啶衍生物；(d)将步骤(c)中得到的此化合物的甲酯水解并随后用发烟硫酸(20％SO3)环合得到式(II)的化合物，其中U是氯而W是氟。
9.药物组合物，其中含有与适当的载体或赋形剂混合的权利要求1-2的化合物。
10.权利要求1-2的化合物在制备具有抗抗肿瘤活性的药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及式(Ⅰ)的2－[[2－羟乙基)氨基]乙基]－5－[[(2－甲基氨基)乙基]氨基]吲唑并[4,3－gh]异喹啉－6(2H)－酮及其药用盐。此化合物具有高的抗肿瘤活性。
文档编号A61P35/00GK1196055SQ96196912
公开日1998年10月14日 申请日期1996年9月9日 优先权日1995年9月13日
发明者E·门它, A·奥里瓦, S·斯比内里, P·克拉普朔 申请人:意大利柏林格·曼海姆股份公司, 佛蒙特大学与州立农业学院