专利名称：特异性吸附高脂血浆中低密度脂肪—胆固醇的方法
技术领域：
本发明涉及去除高脂血浆中低密度脂肪—胆固醇(LDL-C)的方法，是对原去除高脂血浆中LDL-C方法—肝素体外沉淀法(HELP)的改进。
背景技术：
LDL-C是高脂血症中的主要致病因素，已有大量资料证明，血液中LDL-C的大量增高会引起机体心血管疾病和血循环障碍。如动脉粥样硬化、脑血管梗阻、头晕目眩和运动障碍疾病等。目前，许多学者已研究出多种去除高脂血浆中LDL-C的办法，其中以德国B.Braun公司研制的肝素体外沉淀法技术最为成熟，临床应用最广，接受治疗的病人最多。
肝素体外沉淀法虽然是一项成熟的技术，但是由于作为吸附剂使用的肝素本身具有高抗凝活性，会使病人产生出血倾向，存在着不安全隐患。为此，当吸附反应完成后，必须去除过量的肝素。此外，肝素与LDL-C结合需在PH＝5.12的条件下进行。所以反应前，必须用一定浓度的酸来调节血浆PH至5.12，在吸附反应完成后，又必须用碱将PH调至生理范围。调酸、调碱的过程中会产生大量的盐和水。在回输脱脂血浆于体内之前，还必须有个脱盐脱水过程，因此，该吸附反应历程长，步骤复杂。

发明内容
本发明的目的在于针对肝素体外沉淀法所使用的肝素抗凝血活性高，存在的不安全隐患，提出一种类肝素体外沉淀法，它用低抗凝血活性的类肝素替代高抗凝血活性的肝素作为吸附剂，排除了对病人的不安全因素。此外，用二价阳离子作为催化剂，在脱脂过程中无需调节血浆PH值，省略了(HELP)方法中脱盐、脱水过程，大大简化脱脂反应过程，节约了反应时间。
本发明的技术解决方案如下它包括吸附反应、离心、分离等，其特征在于吸附反应中是以水不溶性载体偶联类肝素为吸附剂I和以水不溶性载体嫁接二价阳离子为吸附剂II共同完成的，其中吸附剂I每克偶联类肝素10～50mg，吸附剂II每克嫁接300～600mg二价阳离子，其反应步骤如下1)在脂质血浆收集器中，以脂质血浆总量为基数，按每100ml血浆中加入5～10g吸附剂I和3-5g吸附剂II的比例添加，在室温下轻轻振摇10～15分钟；2)将上述血浆置于大容量离心机上，以2000-3500rpm转速，离心10-20分钟，分离沉淀，收集上清脱脂血浆；3)用脂质过滤器去除上清脱脂血浆中的漂浮脂质悬浮物。
4)将过滤后的上清脱脂血浆，通过弱酸性阳离子吸附柱吸附脱脂血浆中过量的二价阳离子，收集经处理后的上清脱脂血浆，调节该血浆中血钙浓度达正常生理浓度。
由于水不溶性载体上的配体类肝素，能够对低密度脂蛋白进行特异性吸附，而本身就是一种降脂药物，因此用它作为吸附剂是安全可靠的。当反应完成后，也省了去除过量反应物再吸附的操作步骤，简化了反应历程。加入吸附剂II后，吸附剂II上嫁接的二价阳离子，通过离子桥发挥催化剂的作用，使得含有配体类肝素的吸附剂I可在瞬间完成与LDL-C的结合，形成肉眼可见的颗粒，大大缩短了反应时间。
上述反应中，水不溶性载体可以为以下二种类型之一1)玻璃微珠；2)纤维素颗粒，载体的颗粒度在200目-2mm之间。
上述反应步骤4中所用的弱酸性阳离子吸附柱可为以下几种类型之一1)磺酸型阳离子吸附柱；2)CM基团高流速阳离子吸附柱。
采用本发明方法去除高脂血浆，LDL-C去除率大于95％，HDL-C回收率大于95％，胆固醇去除率为40-50％，甘油三脂的去除率大于50％，与原肝素体外沉淀法相比较，具有相同的脱脂效果，最大的优点是不需要吸附过量的肝素，不需要调酸、调碱、脱盐、脱水等一系列操作步骤，使整个脱脂过程简单化，大大降低了脱脂过程的成本。催化剂的使用，节约了反应时间，具有很好的经济效益和社会效益。
具体实施例方式在本实施例中吸附剂I所用的水不溶性载体偶联类肝素载体为200目的玻璃微珠，用乙烯基三乙氧基硅烷[CH2＝CHSi(OC2H5)3]为偶联剂，经加热、脱水生成吸附剂I(如以纤维素颗粒为载体，则用环氧氯丙烷为偶联剂)，每克玻璃微珠上偶联类肝素(磺化葡聚糖)50mg。用大孔树脂D002(江苏江阴有机化工厂)为载体，注入二价钙离子生成吸附剂II，每克微球上嫁接300mg二价钙离子待用。
其反应步骤如下1)采集高脂血浆500ml置于脂质血浆收集器中，放入50g吸附剂I和15g吸附剂II，在室温下轻轻振摇10分钟；
2)将上述血浆置于大容量离心机上，以3000rpm转速，离心15分钟，分离沉淀，收集上清脱脂血浆；3)用脂质过滤器去除上清脱脂血浆中的漂浮脂质悬浮物。滤器中玻璃膜孔径10μm；4)将过滤后的上清脱脂血浆，通过磺酸型阳离子树脂732吸附柱，吸附脱脂血浆中的二价钙离子，收集经处理后的上清脱脂血浆，调节该血浆中血钙浓度达正常生理浓度。
经用该方法处理后，高脂血浆中LDL-C去除率大于95％，HDL-C回收率为95％(脂蛋白电泳法)。总胆固醇下降40％±10(酶法)。甘油三脂去除率为50％(氧化酶法)。取得了理想的效果。
权利要求
1.特异性吸附高脂血浆中低密度脂肪和胆固醇的方法，包括吸附反应和离心、分离等，其特征在于吸附反应中是以水不溶性载体偶联类肝素为吸附剂I和以水不溶性载体嫁接二价阳离子为吸附剂II共同完成的，其中吸附剂I每克偶联类肝素10～50mg，吸附剂II每克注入300～600mg二价阳离子，其反应步骤如下1)在脂质血浆收集器中，以脂质血浆总量为基数，按每100ml血浆中加入5～10g吸附剂I和3-5g吸附剂II的比例添加，在室温下轻轻振摇10～15分钟；2)将上述血浆置于大容量离心机上，以2000-3500rpm转速，离心10-20分钟，分离沉淀，收集上清脱脂血浆；3)用脂质过滤器去除上清脱脂血浆中的漂浮脂质悬浮物。4)将过滤后的上清脱脂血浆，通过弱酸性阳离子吸附柱吸附脱脂血浆中过量的二价阳离子，收集经处理后的上清脱脂血浆，调节该血浆中血钙浓度达正常生理浓度。
2.根据权利要求1中所述的特异性吸附高脂血浆中低密度脂肪和胆固醇的方法，其特征在于水不溶性载体为以下二种类型之一1)玻璃微珠；2)纤维素颗粒，水不溶性载体的颗粒度在200目-2mm之间。
3.根据权利要求1所述的特异性吸附高脂血浆中低密度脂肪和胆固醇的方法，其特征在于弱酸性阳离子吸附柱为以下几种类型之一1)磺酸型阳离子吸附柱；2)CM基团高流速阳离子吸附柱。
全文摘要
特异性吸附高脂血浆中低密度脂肪—胆固醇的方法，是对肝素体外沉淀法(HELP)的改进。吸附反应中是以水不溶性载体偶联类肝素为吸附剂I和以水不溶性载体嫁接二价阳离子为吸附剂II共同完成的，其反应步骤如下1)在脂质血浆收集器中，以脂质血浆总量为基数，按每100ml血浆中加入5～10g吸附剂I和3－5g吸附剂II的比例添加，在室温下轻轻振摇10～15分钟；2)将上述血浆置于大容量离心机上，以2000－3500rpm转速，离心10－20分钟，分离沉淀，收集上清脱脂血浆；3)用脂质过滤器去除上清脱脂血浆中的漂浮脂质悬浮物。4)将过滤后的上清脱脂血浆，通过吸附脱脂血浆中过量的二价阳离子，调节该血浆中血钙浓度达正常生理浓度。整个脱脂过程简单化，节约了反应时间，具有很好的经济效益和社会效益。
文档编号A61M1/38GK1488410SQ02138419
公开日2004年4月14日 申请日期2002年10月11日 优先权日2002年10月11日
发明者邹元国, 孙启俊, 李爱华 申请人:南京红十字血液中心, 南京双威科技实业有限责任公司