专利名称：酪氨酸和聚合过敏素的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于过敏症患者的脱敏治疗的新型组合物。
GB-A-1492973描述了制备一种分散有改性过敏素的酪氨酸共沉淀物的方法。该过敏素已用一种试剂(例如戊二醛)处理而改性，使内部分子交联并且相对于未改性的过敏素降低了产物的过敏性。
EP-A-0367306和Nakada等人(Allergy，54437 et seq.)描述了制备聚合的过敏素的方法。这些方法是延长用交联剂处理时间从而使分子间交联，接着过滤或渗析除去未聚合的产物。该聚合的过敏素具有低过敏性。
本发明提供一种含有酪氨酸和聚合过敏素的药物组合物。该过敏素通常用酪氨酸包衣或吸附在酪氨酸上，例如用共沉淀方法。
该过敏素可以从任何引起过敏的物质衍生，例如从花粉(如豚草属或桦属花粉)、食物、昆虫毒液、霉菌，动物皮毛，或室内灰尘小虫(D.farnae或屋尘螨(D.pteronyssinus))。该过敏素特别是从D.pteronyssinus衍生的。这里所说的“过敏素”包括可以是单一来源或多于一种来源的过敏素混合物。
本发明的另一个方面提供了制备本发明药物组合物的方法，该方法包括(a)将过敏素聚合，(b)将该过敏素的含水溶液与在含水强酸中的酪氨酸溶液混合，(c)将该溶液混合物中和，由此而使酪氨酸和聚合过敏素共沉淀，和(d)任选地将该产物与生理可接受的载体混合。
合适的生理可接受的载体包括苯酚盐水和无菌水。
通过在pH3-10，一般7±1，和0-100℃，一般4-37℃的温度下，用二醛(例如戊二醛)处理长达10小时，例如在室温下处理约2小时，将该过敏素聚合。过敏素与戊二醛的比例一般是在1∶25-1∶2的范围，例如约1∶4(重量/重量)，但用更长的反应时间可以使用更高的过敏素比例(例如见EP-A-0367306)，该文献使用了约3∶1的比例和反应时间为约7小时)。
然后通过凝胶过滤或渗析，例如切向流渗析，除去低分子量产物。该产物冷冻干燥或直接用于下一阶段。分子量一般限在至少100千道尔顿，例如至少250千道尔顿，更优选300千道尔顿。
然后，将聚合过程中作为反应混合物得到的或者从固体的溶剂化得到的pH为7±1的聚合过敏素溶液与在含水强酸中的酪氨酸溶液混合。该强酸通常是无机酸，优选盐酸。在该步骤使用的聚合过敏素溶液一般含有0.1μg/ml-100μg/ml的过敏素蛋白。在该混合物中过敏素∶酪氨酸的比例一般在1∶4×105-1∶4×102的范围(重量/重量)。
中和所得到的过敏素和酪氨酸溶液的混合物。“中和”是指将pH调节到4.0-7.5的范围内。重要的是，在中和期间，该溶液的pH任何时间都不能或至少在很长时间内不能明显地升高到7.5以上。通过剧烈地搅拌该溶液，并如果需要，通过仅使用所需要量的碱可以满足这一条件。可以将各种缓冲剂有效地加入到过敏素溶液中，以便有助于在混合和中和阶段控制pH。
进行中和的特别有用的方法是使在酸中的酪氨酸溶液和中和碱液流分开流进过敏素的溶液中。用pH控制加入液流的速度，即由一个设备调节一个或两个溶液的流量，致使反应混合物的pH基本上恒定在预定量上。我们发现，通过将pH控制在6.5-7.5的范围内通常得到最佳结果，尽管精确的pH可以根据过敏素的性质而变化。
中和的结果是在酪氨酸内夹杂和/或在酪氨酸上吸附的过敏素溶液立即发生沉淀。沉淀后，或者立即洗涤该混合物，或者在洗涤前让其静置几小时-1或2天的时间。最好是得到尽可能细的沉淀物，这可以通过配合剧烈搅拌和快速中和该溶液来实现。
在将其再悬浮在生理可接受的载体例如苯酚盐水或无菌水中从而生产适用于脱敏治疗的可注射的组合物之前，通过离心分离或过滤和洗涤(例如用苯酚盐水)，可以从溶液中分离出所得到的沉淀。
下面的实施例说明本发明。
实施例将已经通过渗析或分馏而部分纯化的约2.5mg/ml的D.pteronyssinus提取蛋白的中性溶液通过加入等体积的1％(w/v)戊二醛并在室温搅拌该混合物约2小时使其聚合。该反应通过加入等体积的2％(w/v)甘氨酸并在室温下将该混合物再搅拌1小时而使反应停止。通过能排除300千道尔顿分子量的膜渗析过滤除去低分子量物质。然后将该混合物过滤灭菌和冷冻干燥。
或者直接从灭菌过滤的溶液，或者通过该冷冻干燥的固体，重新配制该聚合过敏素溶液。在pH7±1的磷酸盐缓冲剂中该溶液含有10μg/ml。在剧烈搅拌下同时将1体积在HCl中的L-酪氨酸(通过将24g的L-酪氨酸用3.4M HCl溶解到100ML制备)和1体积的3.2M NaOH加入到4体积的过敏素溶液中，使该过敏素溶液与酪氨酸共沉淀。这样形成悬浮液，离心分离、用缓冲盐水重复地洗涤，以便除去杂质并再悬浮于开始体积的pH6±1的缓冲盐水中。
权利要求
1.一种含有酪氨酸和聚合过敏素的药物组合物。
2.按照权利要求1的组合物，其中该过敏素用酪氨酸包衣和/或被吸附在酪氨酸上。
3.按照权利要求1或2的组合物，其中该过敏素是从屋尘螨衍生的。
4.一种制备前述任一权利要求的药物组合物的方法，该方法包括(a)将过敏素聚合，(b)将该过敏素的含水溶液与在含水强酸中的酪氨酸溶液混合，(c)将该溶液混合物中和，由此而使酪氨酸和聚合过敏素共沉淀，和(d)任选地将该产物与生理可接受的载体混合。
5.用于治疗的权利要求1-3中任一权利要求的组合物。
6.按照权利要求1-3中任一权利要求的组合物，用于过敏症患者的脱敏治疗。
7.权利要求1-3中任一权利要求的组合物在制备用于过敏症患者脱敏治疗的药物中的用途。
全文摘要
一种含有酪氨酸和聚合过敏素的药物组合物。该组合物通过以下步骤制备:(a)将过敏素聚合,(b)将该过敏素的含水溶液与在含水强酸中的酪氨酸溶液混合,(c)将该溶液混合物中和,由此而使酪氨酸和聚合过敏素共沉淀,和(d)任选地将该产物与生理可接受的载体混合。
文档编号A61P37/08GK1183046SQ96193592
公开日1998年5月27日 申请日期1996年4月25日 优先权日1995年4月29日
发明者艾伦·W·惠勒, 伊恩·泰勒 申请人:史密斯克莱·比奇曼公司