专利名称：促代谢型谷氨酸盐受体5调节剂Ⅲ的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗应用的如上文定义的式I化合物。
本发明涉及用于治疗mGluR5-介导的疾病的如上文定义的式I化合物。
本发明涉及如上文定义的式I化合物，其用于治疗阿尔茨海默病老年性痴呆、AIDS-诱导的痴呆、帕金森氏综合症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿舞蹈病、偏头痛、癫痫、精神分裂症、抑郁、焦虑、急性焦虑、眼科疾病例如视网膜病、糖尿病性视网膜病、青光眼、听觉神经性疾病例如耳鸣、化疗诱导的神经病变、疱疹后神经痛和三叉神经痛、耐受、依赖、脆弱x、自闭症、智力迟钝、精神分裂症和唐氏综合征。
本发明涉及如上文定义的式I化合物，其用于治疗与偏头痛，炎性痛，神经性疼痛疾病例如糖尿病性神经病症、关节炎和类风湿病，腰痛，术后疼痛和与各种病症包括癌症、心绞痛、肾脏或胆汁性绞痛、月经、偏头痛和痛风相关的疼痛。
本发明涉及如上文定义的式I化合物，其用于治疗中风、头部创伤、缺氧和局部缺血、低血糖症、心血管疾病和癫痫。
本发明还涉及如上文定义的式I化合物在制备用于治疗mGluR组I受体-介导的疾病和上文列举的任何疾病的药物中的用途。
本发明的一个实施方式涉及式I化合物在治疗胃肠道病症方面的用途。
本发明的另一个实施方式涉及式I化合物在制备用于抑制暂时性食道下端括约肌松弛、治疗GERD、预防胃食管反流、治疗反流、治疗哮喘、治疗喉炎、治疗肺病、治疗发育停滞、治疗肠应激综合征(IBS)和治疗机能性消化不良(FD)的药物中的用途。
本发明的另一个实施方式涉及式I化合物用于治疗膀胱过度活动症或尿失禁的用途。
词语“TLESR”，短暂性食管下端括约肌松弛，在本文中的定义如同Mittal，R.K.，Holloway，R.H.，Penagini，R.，Blackshaw，L.A.，Dent，J.，1995；Transient lower esophagealsph incter relaxat ion.Gastroenterology 109，pp.601-610所述的那样。
词语“反流”在本文中被定义为由于机械性障碍在所述期间暂时性丧失，胃中的流体能够进入食道内。
词语“GERD”，胃食管反流疾病，在本文中的定义如同vanHeerwarden，M。A.，SmoutA.J.P.M，2000，Diagnosis of reflux disease.Baillière’sClin.Gastroenterol.14，pp.759-774所述的那样。
上述式I化合物可用于治疗或预防肥胖症或超重(例如促进体重减轻或维持体重减轻)，用于预防或逆转体重增加(例如反弹，药物治疗诱发的或继发的吸烟停止)，用于调节食欲和/或饱食、进食障碍疾患(例如暴饮暴食、食欲缺乏、食欲过盛和强迫进食)和嗜欲(对于药物、烟草、酒精、任何促进食欲的大量营养物和非必需的食物产品)。
本发明还提供了一种治疗患者的mGluR5-介导的疾病和上文列举的任何疾病的方法，包括对患者施用有效量的上文所定义的式I化合物，所述患者正在患有上述疾病或者有患病危险。
用于治疗或预防特定疾病需要的剂量根据被治疗主体、给药途径和被治疗疾病的严重程度而有所不同。
在本说明书中，除非有相反的明确解释，术语“疗法”和“治疗”包括预防或预防法。术语“治疗的”和“治疗地”应当被相应地解释。
在本说明书中，除非另有说明，术语“拮抗剂”和“抑制剂”是指通过任何方式部分或完全地阻断由配体产生应答的转导途径的化合物。
除非另有说明，术语“疾病”是指与促代谢型谷氨酸受体活性相关的任何状况或病症。
本发明的一个实施方式是式I化合物和酸分泌抑制剂的组合。本发明的“组合”可以“固定组合”或“部分组合的药盒”存在。“固定组合”定义为以下组合(i)至少一个酸分泌抑制剂；和(ii)至少一个式I化合物存在于一个单元中。“部分组合的药盒”定义为以下组合(i)至少一个酸分泌抑制剂；和(ii)至少一个式I化合物存在于一个以上的单元中。“部分组合的药盒”的组分可同时、连续或分别施用。酸分泌抑制剂/本文使用的式I化合物的摩尔比在1:100-100:1范围内，如1:50-50:1或1:20-20:1或1:10-10:1。两种药物可以相同的比例分开施用。酸分泌抑制剂的实例是H2阻滞剂，如西米替丁、雷尼替丁；以及质子泵抑制剂如吡啶基甲基亚磺酰基苯并咪唑类如奥美拉唑、埃索美拉唑、兰索拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑或相关的物质如来明拉唑。
非医学应用 除了在治疗药物方面的应用外，式I化合物及其盐和水合物还可在研制和标准化体外和体内试验系统方面用作药理学工具，所述试验系统作为新药研究的一部分，用于在实验动物例如猫、狗、兔、猴子、大鼠和小鼠上评价mGluR相关活性的抑制作用。
制备方法 本发明的另一方面提供了制备式I化合物、其盐或水合物的方法。制备本发明化合物的方法如下文所述。
在下文所述的所有制备方法中，应当理解其中在各种反应物和中间体上增加并随后去除适当的、合适的保护基团都是以有机合成领域技术人员易于理解的方式完成的。使用此类保护基团的常规方法以及适当的保护基团的例子见于，例如“Protective Groups in Organic Synthesis”，T.W.Green，P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience，New York，(1999)。还应当理解的是，通过化学处理一个基团或取代基向另一个基团或取代基的转化可以发生在合成最终产物路线上的任何中间体或终产物上，其中转化的可能类型仅受限于转化所采用的条件或反应物涉及的分子具有的其他功能的内在不相容性。此类内在不相容性以及以适当的顺序进行适宜的转化和合成步骤防止不相容性发生的方法，对于有机合成领域的技术人员而言是很容易被理解的。转化的例子如下文所述，应当理解的是所述的转化并不仅限于举例说明的转化所采用的常规基团或取代基。其他适当转化的参考和说明见于“Comprehensive Organic Transformations-A Guideto Functional Group Preparations”R.C.Larock，VHC Publishers，Inc.(1989)。对于其他适当的反应的参考文献和说明，例如见于“AdvancedOrganic Chemistry”，March，4th ed.McGraw Hill(1992)or，“OrganicSynthesis”，Smith，McGraw Hill，(1994)。纯化中间体和最终产物的技术包括，例如直接和反相的柱或旋转板色谱法、重结晶、蒸馏和液-液或固-液萃取，这些对于本领域技术人员而言很容易被理解。除非另有说明，取代基和基团的定义如式I所述。除非另有说明，术语“室温”和“环境温度”是指16-25℃的温度。
除非另有说明，术语“回流”将表示参照使用的溶剂，命名溶剂的沸点温度或沸点温度以上的温度。
缩写 atm 大气压 aq. 水的 BINAP 2，2′-双(二苯基膦)-1，1′-联萘基 Boc 叔丁氧基羰基 CDI N，N’-碳二咪唑 DCC N，N-二环己基碳二亚胺 DCM 二氯甲烷 DBU 二氮(1，3)二环并[5.4.0]十一烷 DEA N，N-二异丙基乙胺 DIBAL-H 二异丁基铝氢化物 DIC N，N’-二异丙基碳化二亚胺 DMAPN，N-二甲基-4-氨基吡啶 DMF 二甲基甲酰胺 DMSO二甲亚砜 DPPF二苯基膦二茂铁 EA 乙酸乙酯 EDCIN-[3-(二甲氨基)丙基]-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐 EDC 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺 Et2O二乙醚 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH乙醇 EtI 碘乙烷 Et 乙基 Fmoc9-芴基甲氧羰基 h 小时 HetAr 杂芳基 HOBtN-羟基苯并三唑 HBTUO-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯 HPLC高效液相色谱法 LAH 氢化铝锂 LCMSHPLC质谱 MCPBA m-氯苯甲酸 MeCN 乙腈 MeOH 甲醇 min 分钟 MeI 碘甲烷 MeMgCl甲基氯化镁 Me甲基 n-BuLi1-叔丁基锂 NaOAc 乙酸钠 NMR 核磁共振 NMP N-甲基吡咯烷酮 nBuLi 1-丁酰基锂 o.n. 过夜 RT，rt，r.t. 室温 TEA 三乙胺 THF 四氢呋喃 nBu 正丁基 OMs 甲磺酸酯或甲烷磺酸酯 OTs 甲苯磺酸酯，甲苯磺酸酯或4-甲基苯磺酸酯 PCC 氯铬酸吡啶鎓 PPTS 对甲苯磺酸吡啶鎓 TBAF 氟化四丁铵 pTsOH 对甲苯磺酸 SPE 固体萃取(通常含有小型色谱法用硅胶) sat. 饱和的 中间体的制备 下面给出的合成途径中提供的中间体用于进一步制备式I化合物。其它起始原料是市售可得的或可通过文献中描述的方法制备。下面描述的合成途径是可使用的非限制性制备实例。本领域的技术人员应理解可使用其它的途径。
异噁唑的合成
方案1 方案1中的式VI醛可用于制备异噁唑。市售可得的酸衍生物式II，其中N-G1(G1是保护基团)可被N-保护，以得到式III化合物，其中G1是保护基团如Boc，或使用本领域公知的方法得到。式III化合物中的酸部分可被转化为式IV的烷基酯，如甲基或乙基酯，使用温和的还原剂如DIBAL-H在溶剂如甲苯中于低温如-78℃下，该酯可被转化为式VI的醛。较高的温度或较强的还原剂可致使形成式V的伯醇，其可以是唯一的或以和式VI的醛的混合物。其它官能团，如式V化合物中的醇，式VII化合物中的腈和式VIII化合物中的Weinreb酰胺，利用本领域已建立的操作可被转化为式VI的醛。另外，式II的酸通过本领域已知的方法可被转化为式VII的腈，例如通过将酸转换为伯酰胺，随后脱水为腈。
通过用羟胺处理，在溶剂如吡啶中，于温度0℃至室温下，式VI的醛可被转化为式IX的肟。式X的异噁唑可通过使用试剂如N-氯代琥珀酰亚胺(NCS)，随后用适当的R-取代乙炔进行1，3-双极环加成作用，进行式IX肟的氯化而制备，其中R可以是芳基、取代的芳基或掩蔽基团(例如烷基锡烷)(Steven，R.V.等人J.Am.Chem.Soc.1986，108，1039)。随后，异噁唑中间体X通过标准方法可脱保护，得到XI。

方案2 其中R是掩蔽基团的式X异噁唑可以这种方法制备，且通过交叉耦合反应将掩蔽基团转化为需要的R基团。例如，三烷基甲锡烷基乙炔(trialkylstannylacetylenes)的使用将导致三烷基甲锡烷基异噁唑，其可进行反应如Stille型交叉耦合，通过与适宜的芳基卤耦合以引入芳基取代基。
[1，2，4]-噁二唑的合成
方案3 通过活化酸部分，加上适当的R-取代的羟基脒(hydroxylamidine)形成酯，随后通过噁二唑的环化，式III的羧酸可用于制备对应的式XII的3-R取代的[1，2，4]噁二唑。[参见，Tetrahedron Lett.，2001，42，1495-98，Tetrahedron Lett.，2001，42，1441-43，and Bioorg.Med.Chem.Lett.1999，9，1869-74]。使用氯甲酸烷基酯如氯甲酸异丁酯，在碱如三乙胺存在下，在溶剂如THF中，上述酸可被活化为混合酸酐。或者，可使用其它公知的活化酸的方法，包括原位活化酸，使用试剂如EDCI、DCC、DIC或HBTU，存在或不存在共试剂如HOBt或DMAP，在适宜的溶剂如DMF、DCM、THF或MeCN中，于温度-20～100℃下。成环作用可通过在溶剂如吡啶或DMF中加热，在微波照射下或通过使用催化剂如TBAF来完成。R-取代的羟基眯通过以下方法从腈得到羟胺盐酸盐在碱如NaOH、NaHCO3或Na2CO3存在下加成，产生游离羟胺，在溶剂如乙醇或甲醇等中，于温度室温～100℃下。

方案4 通过将与[1，2，4]-噁二唑相连的取代基有效反转，式XIIb的5-R取代的[1，2，4]噁二唑可由式VII的腈制备。根据上述方法，式VII的腈与羟胺反应，得到中间体羟基脒，并使用含有R基团的酰化剂，使用上述的将式III化合物转化为式XII化合物的方法，其可被转化为式XIIb的[1，2，4]噁二唑。
四唑的合成
方案5 式VII的腈可用于制备对应的式XVIII的四唑，通过用叠氮化合物如NaN3、LiN3、三烷基锡叠氮化物(trialkylyltinazide)或三甲基叠氮基硅烷处理，优选用催化剂如二丁基氧化锡或ZnBr2，在溶剂如DMF、水或甲苯中于温度50～200℃下，经常规加热或微波照射[参见，J.Org.Chem.2001，7945-7950；J.Org.Chem.2000，7984-7989 or J.Org.Chem.1993，4139-4141]。
使用各种耦合体，5-取代的四唑的N2-芳基化在文献中已有报道。其中R式芳基基团的式XVIII化合物可使用以下方法制备使用例如式XV的硼酸[含B(OH)2部分]，或式XVII的对应的碘鎓盐[含I+-Ar部分]，或对应的三芳基铋二醋酸酯[含Bi(OAc)2Ar2部分]，作为由过渡金属介导的芳基化试剂[参见，Tetrahedron Lett.2002，6221-6223；Tetrahedron Lett.1998，2941-2944；Tetrahedron Lett.1999，2747-2748]。和硼酸、化学计量的醋酸Cu(II)和吡啶在溶剂如二氯甲烷、DMF、二噁烷或THF中，于温度室温～100℃下使用。和碘鎓盐，催化量的Pd(II)-化合物如Pd(OAc)2，或Pd(O)复合物如Pd(dba)2或与催化量的Cu(II)-羧酸盐如Cu(II)-苯基环丙基羧酸盐和二齿配位体如BINAP或DPPF一起，在溶剂如t-BuOH中于温度50～100℃下使用。和三芳基铋二醋酸酯，催化量的醋酸铜可在N，N，N’，N’-四甲基胍存在下，在适宜的溶剂如THF中使用，伴40-60℃温度下加热。式XVI的碘鎓盐可得自，例如各自的硼酸通过用高价碘取代的芳香剂如羟基(甲苯磺酰基氧)碘苯或PhI(OAc)2x 2TfOH在二氯甲烷等中处理[参见，Tetrahedron Lett.2000，5393-5396]。三芳基铋二醋酸酯可由芳基溴化镁(aryl magnesium bromides)制备，用三氯化铋在适当的溶剂如回流THF中，得到三芳基铋烷，然后使用氧化剂如高硼酸钠在醋酸中其被氧化为二乙酸酯[Synth.Commun.1996，4569-75]。
氨基-三唑的合成
式1 方案6 式XI、XIII、XVIII和XIX的脱保护胺可顺序进行硫脲的形成，甲基化和三唑的形成，得到其中R1和/或R2如式I中所定义的式I化合物。式XX的硫脲由已建立的方法得到，例如异硫氰酸酯R4SCN(显示于方案6中的MeNCS)，或1，1-硫代羰基-二咪唑在R2NH2存在下，在溶剂物甲醇、乙醇等中，在温度室温～100℃下，并通常在60℃进行。硫脲中间体的烷化可使用烷化剂如碘甲烷(显示于方案6中)或碘乙烷，在溶剂如DMF、丙酮、二氯甲烷中，室温或升高的温度下进行，得到式XXI的异硫脲。当使用碘烷时，产物可以氢碘化物盐被分离[参见，Synth.Commun.1998，28，741-746]。式XXI化合物可与酰肼，或与肼随后与酰化剂反应，形成中间体，通过于0～150℃在适宜的溶剂如吡啶或DMF中，其可被环化为式I的3-氨基三唑。
实施例 现将通过以下非限制性实施例阐述本发明。
一般方法 所有起始原料都是市售购得或早期文献描述获得。
除非另外指出，使用TMS或残留溶剂信号作为参比，以氘化氯仿作为溶剂，在Bruker 300、Bruker DPX400或Varian+400分光计上分别于300、400和400MHz操作1H NMR，记录1H和13C NMR光谱。所有报告的化学转移在δ-场以ppm表示，信号的细微分裂出现在记录中(s单峰，br s宽单峰，d双峰，t三重峰，q四重峰，m多重峰)。
液相色谱分离随后质谱检测的流线分析在Waters LCMS中记录，其由Alliance 2795(LC)和ZQ单四极质谱仪构成。质谱仪装配有以正和/或负离子模式操作的电喷射离子源。离子喷射电压为±3kV，且质谱仪从m/z 100-700以0.8s的扫描时间扫描。对于柱子，X-Terra MS，Waters，C8，2.1 x 50mm，3.5mm，使用5％～100％乙腈的10mM乙酸铵水溶液或0.1％TFA水溶液为线性梯度。
制备型反相色谱法在装配有二极管阵列检测器的Gilson自动制备型HPLC中使用XTerra MS C8柱，19 x 300mm，7mm进行。
通过chromatotron的纯化在旋转硅胶/石膏(Merck，60PF-254和硫酸钙)涂层的玻璃片上进行，使用TC Research 7924T chromatotron仪涂层为1、2或4mm。产物的纯化也经快速色谱法在填装硅胶酐的玻璃柱中进行。
在Smith合成器单模微波炉中，于2450MHz产生连续照射进行微波加热(Personal Chemistry AB，Uppsala，Sweden)。
实施例1(R)-2-氨甲酰基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将N-甲基吗啉(9.85g，97.5mmol)和氯甲酸异丁酯(13.3g，97.5mmol)于-78℃加入(R)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯(20.0g，92.9mmol)的THF(200mL)溶液中，并搅拌1h。缓慢加入氨水(58mL)，同时将反应温热至RT，并再搅拌2h。反应混合物分配于CH2Cl2和水中。有机提取物用1M HCl洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题产物(10.8g，54％)，为无色半固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)5.91-6.13(m，1H)，4.17-4.30(m，2H)，3.37-3.48(m，2H)，2.10-2.18(m，2H)，1.84-1.96(m，2H)，1.45(s，9H). 实施例2(R)-2-氰基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将实施例1的标题产物(10.81g，50.45mmol)和氰尿酰氯(5.58g，30.3mmol)在DMF(30mL)中搅拌1h。反应混合物分配于乙酸乙酯和水中。有机提取物用碳酸钠水溶液、水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题产物(8.34g，84％)，为无色油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)4.42-4.55(m，1H)，3.32-3.52(m，2H)，2.00-2.27(m，4H)，1.46-1.50(m，9H). 实施例3(R)-2-(2H-四唑-5-基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
实施例2的标题化合物(8.34，42.5mmol)、叠氮化钠(3.04g，46.8mmol)和氯化铵(2.50，46.8g)在DMF(30mL)中于100℃搅拌12h。将反应浓缩并在DCM和3M HCl中分配。有机提取物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。得到的固体和醚研磨，并过滤，得到标题产物(5.31g，52％)，为白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)5.09-5.12(m，2H)，3.43-3.65(m，2H)，2.81-2.95(m，1H)，2.04-2.18(m，4H)，1.29-1.49(m，9H). 实施例4.1(R)-2-[2-(3-溴-苯基)-2H-四唑-5-基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
实施例3的标题化合物(4.88g，20.4mmol)、实施例11.2的标题化合物(11.8g，22.4mmol)、叔丁醇钠(2.15g，22.4mmol)、BINAP(0.508g，0.816mmol)、Pd2(dba)3(0.211g，0.204mmol)、2-苯基丙烷羧酸铜(0.157g，0.408mmol)在t-BuOH(150mL)中于90℃搅拌12h。反应混合物在硅胶上浓缩并经柱色谱法纯化，得到标题产物(4.97g，62％)，为黄色油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.31(s，1H)，8.08(d，1H)，7.62(t，1H)，7.44(q，1H)，5.22-5.34(m，1H)，3.73-3.75(m，1H)，3.54-3.61(m，1H)，2.37-2.43(m，1H)，1.98-2.16(m，3H)，1.42(s，3H)，1.27(s，6H). 用相似的方法合成以下化合物
实施例5(R)-2-[2-(3-氰基-苯基)-2H-四唑-5-基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
实施例4.1的标题化合物(4.97g，12.6mmol)、dppf(0.042g，0.076mmol)、氰化锌(0.89g，7.57mmol)、Pd2(dba)3(0.026g，0.025mmol)、醋酸锌(0.185g，1.01mmol)和Zn粉(0.066g，1.01mmol)在DMF(50mL)和水(1.5mL)中于90℃搅拌12h，再于120℃再搅拌6h。反应混合物分配于乙酸乙酯和水中。有机提取物经硫酸钠干燥，过滤浓缩并经柱色谱法纯化，得到标题产物(1.83g，43％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.39-8.44(m，2H)，7.66-7.81(m，2H)，5.22-5.35(m，1H)，3.73-3.76(m，1H)，3.54-3.72(m，1H)，2.37-2.45(m，1H)，2.00-2.18(m，3H)，1.42(s，3H)，1.27(s，6H). 实施例6.13-((R)-5-吡咯烷-2-基-四唑-2-基)-苄腈
将实施例5的标题化合物(0.919g，2.70mmol)的DCM(6.0mL)溶液于0℃加入TFA(6mL)中。反应搅拌30分钟，并浓缩。将其分配在DCM和2M Na2CO3中。有机提取物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题产物(0.593g，92％)，为浅黄色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.47(t，1H)，8.43(dd，1H)，7.78(dd，1H)，7.13(t，1H)，4.66(q，1H)，3.23-3.25(m，1H)，3.12-3.21(m，1H)，2.20-2.42(m，2H)，2.12-2.19(m，2H)，1.96-2.04(m，2H). 用相似的方法合成以下化合物
实施例7.1(R)-2-[2-(3-氰基-苯基)-2H-四唑-5-基]-吡咯烷-1-硫代羧酸甲酰胺
实施例6.1的标题化合物(0.593g，2.47mmol)和(甲基亚胺基)(硫代)甲烷(0.287g，3.93mmol)在CH3Cl(10mL)中搅拌1.5h。将反应混合物浓缩，并在醚中研磨，过滤后得到标题产物(0.656g，85％)，为灰白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ.(ppm)8.39-8.44(m，2H)，7.78(dd，1H)，7.72(t，1H)，5.89-5.99(m，2H)，3.68-3.77(m，1H)，3.46-3.53(m，1H)，3.15(d，3H)，2.38-2.45(m，2H)，2.24-2.26(m，2H). 用相似的方法合成以下化合物
实施例8(R)-2-[2-(3-氯-苯基)-2H-四唑-5-基]-N-甲基-吡咯烷-1-甲亚胺硫代酸(carboximidothioic acid)甲酯
实施例7.2的标题化合物(0.385g，1.20mmol)和碘甲烷(0.298g，2.1mmol)在MeOH(5.0mL)中于80℃搅拌1h。反应浓缩，并分配于DCM和碳酸钠中。有机提取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题产物(0.400g，88％)，为琥珀油。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.15(t，1H)，8.03(dt，1H)，7.43-7.51(m，2H)，5.60-5.63(m，1H)，3.82-3.84(m，1H)，3.67-3.70(m，1H)，3.19(s，3H)，2.40-2.43(m，1H)，2.27(s，3H)，2.02-2.17(m，3H). 实施例9(R)-2-[2-(3-氰基-苯基)-2H-四唑-5-基]-N-甲基-吡咯烷-1-甲亚胺硫代酸甲酯
实施例7.1的标题化合物(0.656g，2.091)和叔丁醇钠(0.2012.09mmol)在THF(5mL)中搅拌。加入碘甲烷(0.89g，0.624mmol)的THF(2mL)溶液，并将反应搅拌20分钟。将反应混合物倾到入水中，并分配于乙酸乙酯中。有机提取物用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题产物(0.522g，76％)，为琥珀油。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.43-8.39(m，2H)，7.76(dd，1H)，7.70(t，1H)，5.59-5.63(m，1H)，3.83-3.85(m，1H)，3.68-3.71(m，1H)，2.40-2.51(m，1H)，2.27(s，3H)，2.06-2.17(m，3H). 实施例10.1m-氯苯基碘二乙酸酯
1-氯-3-碘苯(5.0g，21mmol)于30℃搅拌。将过氧乙酸(40％，8.35mL，50.3mmol)逐滴加入该溶液中，使反应搅拌12h。将形成的白色固体过滤，用10％醋酸洗涤1次，并用己烷洗涤3次，真空干燥，得到标题产物(27.5g，92％)，为白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.10(s，1H)，7.99(d，1H)，7.57(d，1H)，7.46(t，1H)，2.04(s，6H). 用相似的方法合成以下化合物
实施例11.1双(3-氯苯基)碘鎓四氟硼酸盐
将三氟化硼合乙醚(16.51g，116.3mmol)于-5℃缓慢加入3-氯苯基硼酸(17.37g，111.0mmol)的DCM(170ml)溶液中，同时搅拌。15分钟后，缓慢加入实施例10.1的标题化合物(37.71g，105.8mmol)的DCM(150mL)溶液。反应于0℃搅拌1h，加入四氟硼酸钠(225g，在300mL水中)，并搅拌1h。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤浓缩，并与醚研磨，得到标题产物(31.6g，68％)，为浅棕色固体。
1H NMR(300MHz，(CD3)2SO)δ(ppm)7.60(t，2H)，7.74(dd，2H)，8.26(dd，2H)，8.50(s，2H). 用相似的方法合成以下化合物
实施例12.12-氯-6-甲氧基-异烟酸甲酯
向2-氯-6-甲氧基-异烟酸(16g，85mmol)的DMF(220mL)溶液中加入K2CO3(47g，341mmol)和MeI(6.37mL，102mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物过滤，然后浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯中，用水(3次)和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。经快速柱色谱法纯化，用10-30％乙酸乙酯的己醇溶液洗脱，得到标题产物(15g，87％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)7.45(s，1H)，7.23(s，1H)，3.98(s，3H)，3.95(s，3H). 用相似的方法合成以下化合物
实施例13.12-甲氧基-异烟酸甲酯
实施例12.1的标题化合物(15g，74.8mmol)与Pd/C(7.4g，82.2mmol)的乙醇(350mL)溶液混合。将反应混合物冲洗并充满氢，然后于室温下搅拌过夜。反应混合物经

垫过滤，并在真空中浓缩。将残余物溶解于氯仿中，并用水和盐水洗涤两次。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到产物(9.51g，75％)，为浅黄色油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.29(d，1H)，7.41(d，1H)，7.32(s，1H)，3.98(s，3H)，3.95(s，3H). 用相似的方法合成以下化合物
实施例14.12-甲氧基-异烟肼
向实施例13.1的标题化合物(9.51mg，57.0mmol)的乙醇(100mL)溶液中加入水合肼(3.45mL，71.2mmol)，然后于78℃加热过夜。将反应混合物冷却并在真空中浓缩。残余物与乙酸乙酯研磨，过滤并干燥，得到标题产物(6.69mg，70.3％)，为白色固体。
1H NMR(300MHz，(CD3)2SO)δ(ppm)10.04(br，1H)，8.27(d，1H)，7.32(d，1H)，7.15(s，1H)，4.62(br，2H)，3.88(s，3H). 用相似的方法合成以下化合物
实施例15.14-(5-{(R)-2-[2-(3-氯-苯基)-2H-四唑-5-基]-吡咯烷-1-基}-4-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-吡啶
实施例8的标题化合物(60mg，0.18mmol)和实施例14.2的标题产物(53mg，0.35mmol)在异丙醇(2mL)中混合，并置于含有搅拌棒和配有干燥冷凝管的小瓶中。反应混合物于90℃搅拌24小时。将反应混合物浓缩，然后用DCM稀释。加入异氰酸酯支持的聚合物，并搅拌混合物以除去过量的2-甲基异烟肼。过滤混合物并浓缩滤液。残余物粗品用醚研磨过夜。从研磨粉末形成标题产物(35mg，47％)，为淡黄色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.61(m，1H)，8.12(m，1H)，8.08(m，1H)，7.58(m，1H)，7.46(m，3H)，5.75(m，1H)，4.00(m，1H)，3.69(s，3H)，3.57(m，1H)，2.70(s，3H)，2.36(m，4H). 用相似的方法合成以下化合物

生物学评价 在表达mGiuR5D的细胞系中mGluR5拮抗的功能评价 利用药理活性的标准分析方法可测定本发明化合物的性质。谷氨酸盐受体测定的实例在本领域是已知的，例如参见Aramori等人，Neuron8757(1992)，Tanabe等人，Neuron 8169(1992)，Miller等人，J.Neuroscience 156103(1995)，Balazs，等人，J.Neurochem istry 69151(1997)。这些公开文献中所述的方法通过引用并入本文。适当地，本发明化合物可通过分析法(FLIPR)进行研究，所述FLIPR法测定的是细胞内钙的活动，表达mGluR5的细胞中的[Ca2+]i；或者采用其他分析法(IP3)，该法测定肌醇磷酸盐循环。
FLIPR测定 W097/05252公开了表达人mGluR5d的细胞，将该细胞以100,000每孔的密度种植在覆盖有胶原的澄清的黑色边96-孔板中，接种24h后开始分析。所有的分析均在缓冲液中进行，所述缓冲液包括127mMNaCl、5mM KCl、2mM MgCl2、0.7mM NaH2PO4、2mM CaCl2、0.422mg/ml NaHCO3、2.4mg/ml HEPES、1.8mg/ml葡萄糖和1mg/ml BSA馏分IV(pH7.4)。将96-孔板中的细胞培养物负载60分钟，所述缓冲液包括4μM在0.01％普卢兰尼克酸(pluronic acid，所有权，非离子表面活性剂多元醇-CAS编号9003-11-6)中的荧光钙指示剂氟-3(MolecularProbes，Eugene，Oregon)的乙酸甲酯形式。在上述时间结束后，移除氟-3缓冲液，加入新鲜的分析缓冲液。利用0.800W和CCD照相机快门速度为0.4秒的激光装置进行FLIPR试验，激发波长和发射波长分别为488nm和562nm。采用存在于细胞板的每个孔中的160μl缓冲液启动每个试验。从拮抗剂板中加入40μl拮抗剂，然后加入50μl激动剂。拮抗剂和激动剂的加入间隔为90秒。在每次加入拮抗剂或激动剂后，立即以间隔1秒的时间对荧光信号采样50次，然后以5秒的间隔采样3次。测量反应，将其作为在取样期间激动剂反应的峰高低于背景荧光的差值。利用线性最小二乘法拟合法程序确定IC50值。
IP3测定 对于mGluR5d的另一个功能评价方法被描述在W097/05252中，其基于肌醇磷酸的转化。受体活化激发了磷酯酶C的活性，并且导致肌醇1，4，5，三磷酸(IP3)的形成增加。
将稳定地表达人mGluR5d的GHEK以处在培养基中的40 x 104细胞/孔种植在覆盖有聚-L-赖氨酸的24孔板上，培养基包含1μCi/孔[3H]肌醇。将细胞孵化过夜(16小时)，然后洗涤三次，在37℃在HEPES缓冲盐水(146mM NaCl，4.2mM KCl，0.5mM MgCl2，0.1％葡萄糖，20mMHEPES，pH7.4)中培养1小时，该缓冲盐水补充有1单位/ml谷氨酸盐丙酮酸盐转氨酶和2mM丙酮酸盐。在HEPES缓冲盐水中洗涤细胞一次，并在包含10mM LiCl的HEPES缓冲盐水中预孵化10分钟。将两份化合物在37℃孵化15分钟，然后加入谷氨酸盐(80μM)或DHPG(30μM)，再孵化30分钟。加入0.5ml高氯酸(5％)冰溶液并在4℃条件下孵化至少30分钟，以结束反应。将样品收集至15ml聚丙烯管中，使用离子交换树脂(Dowex AG1-X8 formate form，200-400目，BIORAD)柱分离出肌醇磷酸。通过下述方法分离肌醇磷酸首先用8ml 30mM甲酸铵洗脱甘油磷脂酰肌醇，然后使用8ml 700mM甲酸铵/100mM甲酸洗脱所有的肌醇磷酸，将其收集至闪烁瓶中。然后混合洗脱物和8ml闪烁体，利用闪烁计数确定其中的[3H]肌醇。将从两份样品得到的dpm计数绘成图，利用线性最小二乘法拟合程序确定IC50值。
缩写 BSA 牛血清白蛋白 CCD 电荷耦合器件 CRC 浓度响应曲线 DHPG 3，5-二羟基苯基甘氨酸 DPM 每分衰变数 EDTA 乙二胺四乙酸 FLIPR 荧光成像板读数器 GHEK 含有GLAST的人胚肾 GLAST 谷氨酸盐/天冬氨酸运载体 HEPES 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(缓冲液) IP3 肌醇三磷酸 通常，化合物在超过低于10000nM的IC50值测定中是活性的。本发明的一方面中，IC50值低于1000nM。本发明的另一方面中，IC50值低于100nM。
大鼠中大脑/血浆比率的测定 在雌性Sprague Dawley大鼠中评估大脑/血浆比例。将化合物溶解于水或另一种适当的载体中。为测定大脑/血浆比率，皮下或静脉推注或静脉输注或口服给药施用化合物。在施用后预设的时间点，通过心脏穿刺采集血样。心脏切开处死大鼠，并立即保存大脑。将血样收集于肝素化试管中，并在30分钟内离心，以便从血细胞中分离血浆。将血浆转移至96-孔板中，并保存于-20℃直至分析时。将大脑分成两半，每一半置于预先涂了焦油的试管中，并保存于-20℃直至分析时。分析之前，将大脑样品解冻，并将3ml/g脑组织的蒸馏水加入试管中。将大脑样品在冰浴中进行声处理直至样品被匀化。大脑和血浆样品用乙腈沉淀。离心后，上清夜用0.2％甲酸稀释。在具有快速梯度洗脱和MSMS检测的短反相HPLC柱中，使用具有电喷射离子化和选择性反应监测(SRM)采集的三联四极仪器进行分析。液-液萃取可用作选择性的样品净化。加入适宜的缓冲液后，通过振摇将样品萃取至有机溶剂中。将整份有机层转移至新的小瓶中，并在氮气气流下蒸发至干燥。残余物重新配制后，样品准备注射入HPLC柱中。
通常，外在限制本发明的化合物在脑中的药物与血浆中药物的比率在大鼠中为<0.5。一个实施方式中，该比率小于0.15。
体外稳定性测定 大鼠肝微粒体由Sprague-Dawley大鼠的肝脏样品制备。人肝微粒体由人肝脏样品制备，或由BD Gentest获得。37℃下，微粒体蛋白总浓度为0.5mg/mL时，在0.1mol/L磷酸氢二钾缓冲液，pH7.4中，在辅助因子NADPH(1.0mmol/L)存在下，孵化化合物。化合物的起始浓度为1.0μmol/L。采集样品用于在5个时间点分析孵化开始后0、7、15、20和30分钟。收集的样品中的酶活性通过加入3.5体积的乙腈立即终止。每一份收集的样品中保持的化合物浓度通过LC-MS方法测定。mGluR5抑制剂的消除速率常数(k)以In[mGluR5抑制剂]-孵化时间(分钟)的曲线斜率计算。然后，消除速率常数用于计算mGluR5抑制剂的半衰期(T1/2)，半衰期随后用于根据下式计算mGluR5抑制剂在肝微粒体中的固有清除率 CLint.＝(ln2x孵化时间)/(T1/2x蛋白质浓度)＝μl/min/mg 筛选抗TLESR的活性化合物 使用两种性别的成年拉布拉多寻回犬，训练站立于Pavlov悬带上。形成粘膜-皮肤食管造口术，并且在进行实验之前使犬完全恢复。
运动性测量 简言之，自由饮水、禁食约17h后，通过食管造口术引入多孔套管/侧孔集合装置(Dentsleeve，Adelaide，South Australia)，以测定胃、食道下端括约肌(LES)和食道的压力。使用低顺应性压力灌注泵(Dentsleeve，Adelaide，South Australia)，用水灌注集合装置。空气-灌注管通过口腔方向，以测定吞咽，并且锑电极监测pH，LES以上3cm。所有信号都被放大，并且于10Hz处在个人电脑上获得。
当得到游离于禁食胃/LES III相运动活动的基线测定时，从前脚静脉静脉施用(i.v.，0.5ml/kg)安慰剂(0.9％NaCl)或试验化合物。i.v.给药后10分钟，通过集合装置的中央腔室以100ml/min向胃中灌输营养餐(10％蛋白胨，5％D-葡萄糖，5％Intralipid，pH3.0)，至终体积为30ml/kg。营养餐灌输后，以500ml/min速率灌输空气，直至胃内压力达到10±1mmHg。然后，使用输注泵另外输注空气或从胃内排出空气，使压力在整个实验期间都维持在该水平下。从营养灌输开始至空气吹入结束的实验时间为45min。操作作为触发TLESRs的可靠方法已被验证。
TLESRs定义为以速率>1mmHg/s减少食道下端括约肌压(参照胃内压)。在其发生之前，舒张不应先于咽的信号≤2s，这种情况下，舒张被分类为由吞咽诱发的。LES和胃的压差将低于2mmHg，并且完全舒张的持续时间长于1s。
标本结果显示于下表中
权利要求
1.一种式(I)化合物
其中
R1是甲基、卤素或氰基；
R2是氢或氟；
R3是氢、氟或C1-C3烷基；
R4是C1-C3烷基或环丙基；
X是
或
且Z是
其中
R5是氢、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基或卤素；
R6是氢、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基或卤素；
R7是氢、氟或C1-C3烷基；
以及其药学上可接受的盐、水合物、异形体、互变异构体和/或对映体。
2.权利要求1的化合物，其中R1是卤素或氰基。
3.权利要求2的化合物，其中R1是氯。
4.权利要求2的化合物，其中R1是氰基。
5.权利要求1-4任一项的化合物，其中R2是氢。
6.权利要求1-5任一项的化合物，其中R3是氢或氟。
7.权利要求1-6任一项的化合物，其中R4是C1-C2烷基。
8.权利要求7的化合物，其中R4是甲基。
9.权利要求1-8任一项的化合物，其中R5是氢、C1-C2烷基或C1-C2烷氧基。
10.权利要求1-9任一项的化合物，其中R6是氢、C1-C2烷基或C1-C2烷氧基。
11.权利要求1-10任一项的化合物，其中R7是C1-C2烷基或C1-C2烷氧基。
12.一种化合物，选自
4-(5-{(R)-2-[2-(3-氯-苯基)-2H-四唑-5-基]-吡咯烷-1-基}-4-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-吡啶；
3-{5-[(R)-1-(4-甲基-5-吡啶-3-基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-吡咯烷-2-基]-四唑-2-基}-苄腈；
3-(5-{(R)-1-[5-(2-甲氧基-吡啶-4-基)-4-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-吡咯烷-2-基}-四唑-2-基)-苄腈；和
3-(5-{(R)-1-[4-甲基-5-(2-甲基-吡啶-4-基)-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-吡咯烷-2-基}-四唑-2-基)-苄腈；
以及它们药学上可接受的盐、水合物、异形体、互变异构体和/或对映体。
13.用于治疗的权利要求1-12任一项的化合物。
14.一种药物组合物，包含作为活性成分的权利要求1-12任一项的化合物及药理学和药学上可接受的载体。
15.权利要求1-12任一项化合物或其药学上可接受的盐或旋光异构体在制备用于抑制暂时性食道下端括约肌松弛的药物中的用途。
16.权利要求1-12任一项化合物或其药学上可接受的盐或旋光异构体在制备用于治疗或预防胃食管返流疾病的药物中的用途。
17.权利要求1-12任一项化合物或其药学上可接受的盐或旋光异构体的用途，其用于制备用于治疗或预防疼痛的药剂。
18.权利要求1-12任一项化合物或其药学上可接受的盐或旋光异构体的用途，其用于制备用于治疗或预防焦虑的药剂。
19.权利要求1-12任一项化合物或其药学上可接受的盐或旋光异构体在制备用于治疗或预防肠应激综合征(IBS)的药物中的用途。
20.一种抑制暂时性食道下端括约肌松弛的方法，其中对需要这类抑制的受试者施用有效量的权利要求1-12任一项的化合物。
21.一种治疗或预防胃食管返流疾病的方法，其中对需要这类治疗或预防的受试者施用有效量的权利要求1-12任一项的化合物。
22.一种治疗或预防疼痛的方法，其中对需要这类治疗或预防的受试者施用有效量的权利要求1-12任一项的化合物。
23.一种治疗或预防焦虑的方法，其中对需要这类治疗或预防的受试者施用有效量的权利要求1-12任一项的化合物。
24.一种治疗或预防肠应激综合征(IBS)的方法，其中对需要这类治疗或预防的受试者施用有效量的权利要求1-12任一项的化合物。
25.一种包含(i)至少一种权利要求1-12任一项的化合物和(ii)至少一种酸分泌抑制剂的组合。
26.权利要求25的组合，其中所述酸分泌抑制剂选自西米替丁、雷尼替丁、奥美拉唑、埃索美拉唑、兰索拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑或来明拉唑。
27.一种化合物，选自
(R)-2-(2H-四唑-5-基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯；
(R)-2-[2-(3-溴-苯基)-2H-四唑-5-基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯；
(R)-2-[2-(3-氯-苯基)-2H-四唑-5-基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯；
(R)-2-[2-(3-氰基-苯基)-2H-四唑-5-基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯；
3-((R)-5-吡咯烷-2-基-四唑-2-基)-苄腈；
2-(3-氯-苯基)-5-(R)-吡咯烷-2-基-2H-四唑；
(R)-2-[2-(3-氰基-苯基)-2H-四唑-5-基]-吡咯烷-1-硫代羧酸甲酰胺；
(R)-2-[2-(3-氯-苯基)-2H-四唑-5-基]-吡咯烷-1-硫代羧酸甲酰胺；
(R)-2-[2-(3-氯-苯基)-2H-四唑-5-基]-N-甲基-吡咯烷-1-甲亚胺硫代酸甲酯；和
(R)-2-[2-(3-氰基-苯基)-2H-四唑-5-基]-N-甲基-吡咯烷-1-甲亚胺硫代酸甲酯。
全文摘要
本发明涉及新型化合物，涉及其制备方法，在治疗中的应用以及包含此新型化合物的药物组合物。
文档编号A61K31/4406GK101437813SQ200780016188
公开日2009年5月20日 申请日期2007年4月25日 优先权日2006年5月5日
发明者M·伊萨克, A·斯拉西, L·爱德华兹, T·辛, T·斯特法纳克 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司