专利名称：用作法呢基蛋白转移酶抑制剂的新的三环n－氰亚胺类化合物的制作方法
背景专利申请WO 95/00497(1995年1月5日公开，Patent CooperationTreaty(PCT))公开抑制酶-法呢基蛋白转移酶(FTase)和癌基因蛋白质Ras法呢基化的化合物。致癌基因通常编码信号转导通路的蛋白组分，该转导通路导致刺激细胞生长和有丝分裂的发生。在培养的细胞中的致癌基因的表达产生细胞转化，其特征为细胞在软琼脂中的生长能力以及由非-转化细胞显示的缺乏接触抑制的细胞的浓集(dense foci)生长。某些致癌基因的突变和/或超表达常常与人类中的癌症有关。
为获得转化能力，Ras癌蛋白质的前体必须经历位于羧基末端四肽中半胱氨酸残基的法呢基化。因此，建议用催化该修饰的酶-法呢基蛋白转移酶的抑制剂作为肿瘤的抗癌药物，在该肿瘤中Ras有助于转化。在许多人类癌症，最显著的为在50％以上的结肠癌和胰腺癌中，常常发现Ras的突变、致癌形式(Kohl等，Science，第260卷，1834-1837页，1993)。
从目前对法呢基蛋白转移酶的兴趣来看，本领域所欢迎的贡献为发现用于抑制法呢基蛋白转移酶的另外的化合物。本发明提供这种贡献。
本发明的概述以前未有用本发明的三环类化合物抑制法呢基蛋白转移酶的报道。因此，本发明提供用本发明的三环类化合物抑制法呢基蛋白转移酶的方法，该方法包括(ⅰ)在体外可以有效抑制法呢基蛋白转移酶，但是不抑制香叶基香叶基蛋白转移酶Ⅰ；(ⅱ)阻断由转化Ras形式(法呢基受体)诱导的表型变化，而该变化不被改造为香叶基香叶基受体的转化Ras形式所诱导；(ⅲ)阻断为法呢基受体的Ras的细胞内加工，而不阻断改造的香叶基香叶基受体的Ras的细胞内加工；并(ⅳ)阻断由转化Ras诱导的培养基中细胞的异常生长。在动物模型中已经证明本发明的数种化合物具有抗肿瘤活性。
本发明提供通过给予有效量的本发明的化合物从而抑制细胞(包括转化细胞)异常生长的方法。细胞的异常生长指细胞不依赖于正常的调节机制生长(如接触抑制丧失)。这包括下列细胞的异常生长(1)表达激活的Ras致癌基因的肿瘤细胞(肿瘤)；(2)其中由于另一个基因的致癌突变使Ras蛋白被激活的肿瘤细胞；和(3)其它产生异常Ras激活的增生性疾病的良性和恶性细胞。
由式1.0代表用于权利要求的方法的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物
其中a、b、c和d之一代表N或NR9，其中R9代表O-、-CH3或-(CH2)nCO2H，其中n为1-3，而其余的a、b、c和d基团代表CR1或CR2；或每个a、b、c和d独立选自CR1或CR2；每个R1和每个R2独立选自H、卤代、-CF3、-OR10(如-OCH3)、-COR10、-SR10(如-SCH3和-SCH2C6H5)、-S(O)tR11(其中t为0、1或2，如-SOCH3和-SO2CH3)、-SCN、-N(R10)2、-NR10R11、-NO2、-OC(O)R10、-CO2R10、-OCO2R11、-CN、-NHC(O)R10、-NHSO2R10、-CONHR10、-CONHCH2CH2OH、-NR10COOR11、-SR11C(O)OR11(如-SCH2CO2CH3)、-SR11N(R75)2，其中每个R75独立选自H和-C(O)OR11(如-S(CH2)2NHC(O)O-t-丁基和-S(CH2)2NH2)、苯并三唑-1-基氧基、四唑-5-基硫基或取代的四唑-5-基硫基(如烷基取代的四唑-5-基硫基，像1-甲基-四唑-5-基硫基)、炔基、链烯基或烷基，所述烷基或链烯基任选被卤素、-OR10或-CO2R10取代；R3和R4相同或不同，分别独立代表H，R1和R2或R3和R4的任何取代基可以一起代表与苯环(环Ⅲ)稠合的饱和的或未饱和的C5-C7元环；R5、R6、R7和R8分别独立代表H、-CF3、-COR10、烷基或芳基，所述烷基或芳基任选被-OR10、-SR10、-S(O)tR11、-NR10COOR11、-N(R10)2、-NO2、-COR10、-OCOR10、-OCO2R11、-CO2R10、-OPO3R10取代，或R5、R6、R7和R8之一与下述定义的R40一起代表-(CH2)r-，其中r为1-4，它可以被低级烷基、低级烷氧基、-CF3或芳基取代，或R5与R6一起代表=O或=S，和/或R7与R8一起代表=O或=S；R10和R12独立代表H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂芳基、芳基、芳烷基或-NR40R42，其中R40和R42独立代表H、芳基、烷基、芳烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂烷基、环烷基、环烷基烷基、链烯基和炔基；R11代表烷基或芳基；X代表N、CH或C，使当X为N或CH时，有一个用实线表示的与碳原子11相连的单键；或当X为C时，有一个用实线和点线表示的与碳原子11相连的双键；碳原子5和6之间的点线表示任选的双键，使当存在双键时，A和B独立代表-NO2、-R10、卤代、-OR11、-OCO2R11或-OC(O)R10，当碳原子5和6之间不存在双键时，A和B分别独立代表H2、-(OR11)2、H和卤代、二卤代、烷基和H、(烷基)2、-H和-OC(O)R10、H和-OR10、氧代、芳基和H、=NOR10或-O-(CH2)p-O-，其中p为2、3或4；和Z代表烷基、芳基、芳烷基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、-OR40、-SR40、-CR40R42或-NR40R42，其中R40和R42与上述定义相同；优选在化合物(1.0)中，在碳原子11上有一个单键，X为碳，环上的3位、8位和10位优选被卤素取代；Z为-NHR40，优选其中的R40为杂芳基烷基，更优选为3或4-甲基吡啶基N-氧化物。
在另一个实施方案中，本发明涉及抑制细胞异常生长的药用组合物，该组合物包括有效量的化合物(1.0)以及药学上可接受的载体。
在另一个实施方案中，本发明涉及抑制细胞(包括转化细胞)异常生长的方法，该方法包括给予需要此治疗的哺乳动物(如人类)有效量的化合物(1.0)。细胞的异常生长指细胞不依赖于正常的调节机制生长(如接触抑制丧失)。这包括下列细胞的异常生长(1)表达激活的Ras致癌基因的肿瘤细胞(肿瘤)；(2)其中由于另一个基因的致癌突变使Ras蛋白被激活的肿瘤细胞；(3)其它产生异常Ras激活的增生性疾病的良性和恶性细胞；和(4)由除Ras蛋白机制之外的其它机制激活的良性和恶性细胞。不希望受缚于任何理论，但是我们认为这些化合物可以通过阻断G-蛋白异戊二烯化，而抑制G-蛋白例如ras p21功能起作用，因此它们可以用于治疗增生性疾病例如治疗肿瘤生长和癌症，或者通过抑制ras法呢基蛋白转移酶起作用，因此它们可以对于ras转化的细胞具有抗增生活性。
可被抑制的细胞可以是表达激活的ras致癌基因的肿瘤细胞。例如，可以被抑制的细胞类型包括胰腺肿瘤细胞、肺癌细胞、骨髓性白血病肿瘤细胞、甲状腺囊肿瘤细胞、骨髓增生异常肿瘤细胞、表皮癌肿瘤细胞、膀胱癌肿瘤细胞或结肠肿瘤细胞。而且，用化合物(1.0)治疗的细胞异常生长的抑制也可以是通过抑制ras法呢基蛋白转移酶。该抑制可以是肿瘤细胞的抑制，其中Ras蛋白由于除Ras基因以外的基因的致癌突变而被激活。另外，化合物(1.0)可以抑制被除Ras蛋白以外的蛋白激活的肿瘤细胞。
本发明也提供通过给予需要此治疗的哺乳动物(如人类)有效量的化合物(1.0)从而抑制肿瘤生长的方法，具体地讲，本发明提供通过给予有效量的上述化合物，从而抑制表达激活的Ras致癌基因的肿瘤生长的方法。可以被抑制的肿瘤的实例包括(但不限于)肺癌(如肺腺癌)、胰腺癌(如胰腺癌像外分泌胰腺癌)、结肠癌(如结肠直肠癌，像结肠腺癌和结肠腺瘤)、骨髓性白血病(如急性骨髓性白血病(AML))、甲状腺囊癌、骨髓发育不良综合征(MDS)、膀胱癌和表皮癌。
我们认为本发明也提供抑制增生性疾病的方法，所述增生性疾病包括良性的和恶性的，其中Ras蛋白由于其它基因的致癌性突变而被异常激活，即Ras基因本身并不被突变激活为致癌形式，所述抑制通过给予需要此治疗的哺乳动物(如人类)有效量的在此所述的羰基哌嗪基和哌啶基化合物(1.0)而获得。例如，其中Ras由于酪氨酸激酶致癌基因(如neu、src、abl、lck和fyn)的突变或超表达而使Ras被激活的良性的增生性神经纤维瘤或肿瘤可以被在此所述的羰基哌嗪基和哌啶基化合物(1.0)所抑制。
在另一个实施方案中，本发明涉及通过给予哺乳动物特别是人类有效量的化合物(1.0)，从而抑制ras法呢基蛋白转移酶和致癌基因蛋白质Ras法呢基化的方法。给予病人抑制法呢基蛋白转移酶的本发明的化合物可以用于治疗上述癌症。
本发明的详述如在此所述，下列术语除特别指明外具有下列意义M+-代表质谱中的分子的分子离子；MH+-代表质谱中的分子的分子离子加氢；Bu-代表丁基；
Et-代表乙基；Me-代表甲基；Ph-代表苯基；苯并三唑-1-基氧基代表
1-甲基-四唑-5-基硫基代表
烷基-(包括烷氧基、烷基氨基和二烷基氨基的烷基部分)-代表包含1-20个碳原子，优选1-6个碳原子的直链和支链的碳链；例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、已基等；其中所述烷基可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷基氨基、羟基、氧代(=O)、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；烷氧基-通过氧原子与相邻结构元素共价相连的1-20个碳原子的烷基部分，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等；其中所述烷氧基可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羟基、氧代、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；链烯基-代表具有至少一个碳碳双键和包含2-12个碳原子，优选2-6个碳原子，最优选3-6个碳原子的直链和支链碳链；其中所述链烯基可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羟基、氧代、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；炔基-代表具有至少一个碳碳三键和包含2-12个碳原子，优选2-6个碳原子的直链和支链碳链；其中所述炔基可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羟基、氧代、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；芳基(包括芳烷基的芳基部分)-代表含有6-15个碳原子和具有至少一个芳香环(如芳基为苯基)的碳环基，其中所述芳基任选可与芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基环稠合；且其中所述芳基和/或所述稠合环上的任何可取代碳原子和氮原子可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羟基、氧代、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；芳烷基-代表如上定义的烷基，其中所述烷基部分的一个或多个氢原子被一个或多个芳基取代；其中所述芳烷基可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羟基、氧代、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；芳烷基的代表性实例包括苄基和二苯基甲基；环烷基-代表3-20个碳原子，优选3-7个碳原子的支链或无支链的饱和碳环，其中所述环烷基可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羟基、氧代、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；环烷基烷基-代表上述定义的烷基，其中所述烷基部分的一个或多个氢原子被一个或多个环烷基取代；其中所述环烷基烷基可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羟基、氧代、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；卤代-代表氟、氯、溴和碘；杂烷基-代表含有1-20个碳原子，优选1-6个碳原子被1-3个选自-O-、-S-和-N-的杂原子间断的直链和支链碳链，其中所述杂烷基链上的任何可取代的碳原子和氮原子可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、C1-C6烷基、芳基、氰基、羟基、烷氧基、氧代、苯氧基、-CF3、-OCF3、氨基、烷氨基、二烷氨基、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10或-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；杂芳基-代表含有至少一个选自O、S和N的杂原子的环基，所述杂原子将碳环结构间断并具有足够数目的离域pi电子以具有芳族特征，并且所述芳杂环基含有2-14个碳原子，其中所述杂芳基可任选与一个或多个芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基环稠合；其中所述杂芳基和/或所述稠合的环上的任何可取代的碳原子或氮原子可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、C1-C6烷基、芳基、氰基、羟基、烷氧基、氧代、苯氧基、-CF3、-OCF3、氨基、烷氨基、二烷氨基、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10或-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10。杂芳基的代表性实例包括例如法呢基、咪唑基、嘧啶基、三唑基、2-、3-或4-吡啶基或2-、3-或4-吡啶基N-氧化物，其中吡啶基N-氧化物可以表示为
杂芳基烷基-代表上述定义的烷基，其中一个或多个氢原子已被一个或多个杂芳基取代；其中所述杂芳基烷基可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羟基、氧代、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；实例为2-、3-或4-吡啶基甲基或2-、3-或4-吡啶基甲基N-氧化物；杂环烷基-代表含有3-15个碳原子，优选4-6个碳原子的饱和的、支链或无支链的碳环，该碳环被1-3个选自-O-、-S-和-N-的杂原子间断，其中任选所述环可以含有一个或两个不赋予所述环芳族特征的不饱和键；其中所述环的任何可取代的碳原子和氮原子可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羟基、氧代、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10。代表性杂环烷基可以包括2-或3-四氢呋喃基、2-或3-四氢噻吩基、1-、2-、3-或4-哌啶基、2-或3-吡咯烷基、1-、2-或3-哌嗪基、2-或4-二氧六环基、吗啉基、
其中R1与上述定义相同，t为0、1或2。
杂环烷基烷基-代表上述定义的烷基，其中一个或多个氢原子已被一个或多个杂环烷基取代；其中任选所述环可以含有一个或两个不赋予所述环芳族特征的不饱和键；其中所述杂环烷基烷基可任选和独立被一个、两个、三个或多个下列基团取代卤代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羟基、氧代、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10。
下列溶剂和试剂用指定的缩写表示四氢呋喃(THF)；乙醇(EtOH)；甲醇(MeOH)；乙酸(HOAc或AcOH)；乙酸乙酯(EtOAc)；N,N-二甲基甲酰胺(DMF)；三氟乙酸(TFA)；三氟乙酸酐(TFAA)；1-羟基苯并三唑(HOBT)；间-氯代过苯甲酸(MCPBA)；三乙胺(Et3N)；乙醚(Et2O)；氯代甲酸乙酯(ClCO2Et)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(DEC)。
取代基R1、R2、R3和R4的位置参照下列编号的环结构
本发明的部分化合物可以以不同的立体异构形式(如对映体和非对映体)存在。本发明包括所有此类立体异构体，包括纯的形式和包括外消旋混合物的混合物形式。例如，C-11位的碳原子可以以S或R立体构型存在。
部分三环类化合物在性质上是酸性的，例如那些具有羧基或酚羟基的化合物。这些化合物可以形成药学上可接受的盐。此类盐的实例可以包括钠盐、钾盐、钙盐、铝盐、金盐和银盐。也包括与药学上可接受的胺例如氨、烷基胺、羟基烷基胺、N-甲基葡糖胺等形成的盐。
某些碱性三环类化合物也可以形成药学上可接受的盐，如酸加成盐。例如吡啶氮原子可以与强酸形成盐，而具有碱性取代基例如氨基的化合物也可以与弱酸形成盐。形成盐的适当的酸的实例包括盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸或其它的本领域技术人员熟知的无机酸和羧酸。用常规的方法，使游离碱形式与足量的所需酸接触产生盐可以制备所述盐。所述游离碱形式可以通过用适当的稀碱水溶液例如氢氧化钠、碳酸钾、碳酸氢铵和碳酸氢钠的稀水溶液处理所述盐再生。所述游离碱形式和它们各自的盐形式在某些物理性质上略有不同，如在极性溶剂中的溶解度，但是对本发明的目的而言，所述酸和碱的盐形式与它们各自的游离碱形式是等同的。
所有的此类酸和碱的盐都是包括于本发明范围的药学上可接受的盐，并且认为对本发明的目的而言，所述酸和碱的盐与相应化合物的游离形式是等同的。
根据下列实施例所述方法和根据WO 95/10516(1995年4月20日公开，如见式400.00化合物的制备方法)所述方法，可以制备本发明的化合物。
在WO 95/10516的第57页第7-16行，公开通过硝化式415.00化合物，在式1.0的吡啶环Ⅰ的C-3位上引入取代基的方法。然后，用公开的试剂或粉末状锌，或者在乙醇水溶液中用CuCl2或CuBr2将该硝基还原为相应的胺。
根据下列流程Ⅰ可以制备本发明的化合物
其中Z1代表烷基、芳基、芳烷基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基和-CR40R42；点线代表单键或双键；a、b、c、d、A、B、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R11、R40和R42与上述定义相同。
参照流程1，在适当的碱存在下，并任选在非-质子溶剂中，在有效得到化合物(1.3)的量和条件下，使式(1.1)化合物(优选其中R11为烷基，例如甲基)与式(2.1)的醇(R40OH)反应可以制备式(1.3)化合物。适当的碱包括有机碱，例如吡啶和三乙胺；或碱金属和碱土金属的无机碱，包括碳酸盐如钠、锂、钾和铯的碳酸盐，氢氧化物例如钠和钾的氢氧化物；氢化物例如钠或钾的氢化物；和叔丁醇钠，优选氢化钠。适当的非-质子溶剂包括乙醚、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、四氢呋喃(THF)、二甲氧基乙烷(DME)和它们的混合物，优选DMF。另外，该反应可以用过量的所述醇在无水条件下进行。对于每摩尔化合物(1.1)，所述醇(2.1)的量可以为约1-约10摩尔。温度可以为0°-100℃，或所述反应混合物的回流温度。
在适当的碱存在下并任选在非-质子溶剂中，用制备上述化合物(1.3)所述的反应条件，通过使式(1.1)化合物与式(1.1)的硫醇(R40SH)反应产生化合物(1.5)，可以制备式(1.5)化合物。
在任选的非-质子溶剂存在下，用制备上述化合物(1.3)所述的反应条件，通过使式(2.0)化合物与式(2.7)的N-氰基亚胺酸酯反应可以制备式(1.7)化合物。
根据下列流程Ⅱ可以制备本发明的化合物
其中a、b、c、d、A、B、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R8、R11、R40和R42与上述定义相同；点线代表单键或双键。
参照流程Ⅱ，在适当的质子或非-质子溶剂存在下，在有效地得到化合物(1.1)的量和条件下，使式(2.0)化合物与式(2.9)N-氰基二硫代亚胺基碳酸酯(NCN=C-(SR11)2反应可以制备式(1.1)化合物。适当的质子溶剂包括C1-10链烷醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、己醇、辛醇、癸醇等。适当的非质子溶剂如上所述。对于每摩尔化合物(2.0),N-氰基二硫代亚胺基碳酸酯(2.9)的量可以为约1-约10摩尔。温度可以为0℃-100℃，或反应混合物的回流温度。
用任选的碱和/或任选的质子或非-质子溶剂(如上述的那些溶剂)，通过使式(1.1)化合物与式(2.6)胺(NHR40R42)反应可以制备式(1.9)化合物。首先，使化合物(1.1)在约50℃-80℃温度范围内与纯胺(2.6)反应。第二步，在碱例如氢化钠和质子溶剂例如DMSO或DMF存在下，使化合物(1.1)与约等摩尔量的胺(2.6)反应。在第三步，在质子溶剂例如乙醇中，使化合物(1.1)与过量的胺(2.6)反应。在第四步，用催化量的碱例如氢化钠，使化合物(1.1)与无水胺(2.6)反应。在第五步，在非质子传递溶剂例如DMF中，在约75℃温度下，使化合物(1.1)与大于两个当量的胺(2.6)反应。除特别指明外，温度可以为0℃-100℃或反应混合物的回流温度，对于每摩尔化合物(1.1)，胺(2.6)的量可以为约1-约10摩尔。
在适当的非-质子溶剂存在下，在有效地产生化合物(2.4)的量和条件下，使式(2.0)化合物与式(2.2)的异硫氰酸酯(R40NCS)反应，可以制备式(2.4)化合物。适当的非-极性溶剂如上述。对于每摩尔的化合物(2.0)，异硫氰酸酯(2.2)的用量可以为约1-约10摩尔。温度可以为0℃-100℃或反应混合物的回流温度。
在适当的非-质子溶剂存在下，在有效地产生化合物(2.4)的量和条件下，使式(2.4)化合物与氰氨化铅(PbNCN)反应，可以制备式(1.8)化合物。适当的非-质子溶剂如上述，优选DMF。对于每摩尔的化合物(2.4)，氰氨化铅的用量为约1-约10摩尔。温度可以为0℃-100℃或反应混合物的回流温度。
用常规的方法，例如用有机溶剂从水中萃取反应混合物、蒸发有机溶剂、然后经硅胶或其它适当的层析介质层析，可以从反应混合物中中分离式1.0化合物。
用下列实施例(不应解释为限制本发明的范围)对本发明的化合物和其制备性原料进行说明。
实施例1.4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亚氨基硫代酸甲酯(carboximidothioate)
将4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶(40g,0.1mol)溶于600ml无水乙醇中。加入N-氰基二硫代亚氨基碳酸二甲酯(16.5g,0.11mol)，于干燥氮气环境下回流2小时。蒸发至干得到棕色泡沫状固体。经硅胶层析，用25％-50％乙酸乙酯/己烷洗脱得到50.8g目标化合物。FABMS M+1=489。
实施例2.4-[[[4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶基](氰基亚氨基)甲基]氨基]-1-哌啶羧酸乙酯
将4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亚氨基硫代酸甲酯(0.1g,0.20mmol)溶于1ml4-氨基-1-哌啶羧酸乙酯中。于100℃搅拌18小时。使其冷却至室温。将该混合物加至水中，过滤产生的固体。将该固体溶于二氯甲烷中，经硅胶层析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到0.15g(34％)目标产物。FABMS M+1=613。
实施例3.[[4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶基](4-吡啶基氨基)亚甲基]氨基]氨基氰(cyanamide)N1-氧化物
于氮气环境、室温下，将4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亚氨基硫代酸甲酯(0.3g,0.60mmol)和4-氨基吡啶基-N-氧化物(0.07g,0.60mmol)溶于5ml二甲基亚砜中。在搅拌下，逐份加入氢化钠(60％油分散液，24mg，0.6mmol)。搅拌2小时后，将该反应混合物加至盐水中，用20ml二氯甲烷萃取三次。合并萃取物，经硫酸镁干燥，过滤，蒸发得到油状物。经硅胶柱层析，用2％-10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到0.15g(47％)目标化合物，为固体。FABMS M+1=549.1。
实施例4.[[4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶基](环丙基氨基)亚甲基]氨基氰
将4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亚氨基硫代酸甲酯(0.15g,0.31mmol)溶于3ml无水乙醇中。加入环丙胺(0.3ml,4.30mmol)，于室温下搅拌24小时后，将该反应混合物加至盐水中，用20ml二氯甲烷萃取三次。合并萃取物，经硫酸镁干燥，过滤，蒸发得到油状物。该油状物经硅胶柱层析，用2％-10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到0.133g(86％)目标化合物，为固体。FABMS M+1=498。
实施例5.[[4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11 H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶基[[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]亚甲基]氨基氰
将4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亚氨基硫代酸甲酯(0.5g,1.02mmol)溶于5mlDMF中。加入4-甲氧基苄胺(0.4ml,2.9mmol)，于75℃搅拌24小时后，加至盐水中，用乙酸乙酯萃取三次。经硫酸镁干燥萃取物，过滤，蒸发至干。经硅胶层析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到0.4g(68％)目标化合物。FABMS M+1=578。
实施例6.[[4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶基][(4-氟代苯基)氨基]亚甲基]氨基氰
将4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亚氨基硫代酸甲酯(0.25g,0.51mmol)溶于2.5ml 4-氟代苯胺(analine)中。在搅拌下，于干燥氮气环境中，加入约10mg氢化钠，于100℃搅拌1小时。冷却至室温。加至盐水中，用乙酸乙酯萃取三次。经硫酸镁干燥萃取物，过滤，蒸发至干，经硅胶层析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到0.155g(55％)目标化合物。FABMSM+1=552。
实施例7.[[(4H-1,3-苯并二氧杂英(dioxin)-6-基)氨基][4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶基]亚甲基]氨基氰
将4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-N-(4H-1,3-苯并二氧杂英-6-基)-1-哌啶硫代甲酰胺(carbothioamide)(0.1g,0.198mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中。加入氰氨化铅(98mg,0.39mmol)和苄基三乙基氯化铵(5mg)，于90℃搅拌2天。再加入氰氨化铅(98mg,0.39mmol)和苄基三乙基氯化铵(5mg)，并搅拌24小时。加至盐水中，用乙酸乙酯萃取三次。经硫酸镁干燥萃取物，过滤，蒸发至干，经硅胶层析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到39mg(38％)目标化合物。FABMS M+1=701。
实施例8.[[4-(3,10-二溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶基](3-吡啶基)亚甲基]氨基氰
将4-(3,10-二溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶(0.2g,0.43mmol)溶于2ml DMF中。加入异丙基-N-氰基-3-吡啶亚胺酸酯[参见Chem.Pharm.Bull.42(12)2475(1994)](0.16g,0.86mmol)，于75℃搅拌24小时。加至盐水中，用乙酸乙酯萃取三次。经硫酸镁干燥萃取物，过滤，蒸发至干，经硅胶层析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到0.16g目标化合物。FABMS M+1=599。
实施例9.N-氰基-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-n’-(3-吡啶基甲基)-1-哌啶甲酰亚胺(carboximidamide)N1-氧化物
于干燥氮气环境、135℃、搅拌下，将4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亚胺基硫代酸甲酯(1.0g,1.76mmol)和3-氨基甲基吡啶基-N-氧化物(0.65g,5.8mmol)溶于10mlN,N-二甲基甲酰胺中。搅拌2小时后，将该反应混合物加至盐水中，用20ml二氯甲烷萃取三次。合并萃取物，经硫酸镁干燥，过滤，蒸发为油状物，经硅胶柱层析，用2％-10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到0.23g目标化合物，为固体。FABMS M+1=563。
用上述方法并替换适当的试剂，制备下列表中所述的化合物。
原料的制备用下列制备实施例说明本发明化合物制备中使用的原料，这些实施例不应解释为限制本发明的范围。用本领域已知的方法，例如在U.S.专利5089496、5151423、4454143、4355036,PCT/US94/11390(WO 95/10514)、PCT/US94/11391(WO 95/10515)、PCT/US94/11392(WO 95/10516)中所提出的方法以及Stanley R.Sandler和Wolf Karo在Organic Functional Group Preparations(第2版，Academic Press,Inc.,SanDiego,Califomia，第1-3卷，(1983)和J.March在Advanced OrganicChemistry,Reactions & Mechanisms,and Structure(第3版，John Wiley& Sons,New York,1346页(1985))所述方法可以制备所述三环类化合物所用的原料如化合物(2.0)、无机碱和有机碱、N-氰基亚胺酸酯和醇类。本发明范围的另外的反应历程和相似结构对本领域技术人员而言是显而易见的。
制备实施例7
步骤A
于-5℃，将15g(38.5mmol)4-(8-氯-3-溴代-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶-1-羧酸乙酯和150ml浓硫酸混合，然后加入3.89g(38.5mmol)硝酸钾，搅拌4小时，将该混合物倾至3L冰中，用50％氢氧化钠(水溶液)碱化。用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥，然后过滤并真空浓缩为残留物。使残留物从丙酮中重结晶得到6.69g产物。
步骤B
将6.69g(13.1mmol)步骤A的产物和100ml 85％乙醇/水混合，然后加入0.66g(5.9mmol)氯化钙和6.56g(117.9mmol)铁，于回流下将该混合物加热过夜。通过硅藻土过滤热的反应混合物，用热乙醇洗涤滤饼。真空浓缩滤液得到7.72g产物。
步骤C
将7.70g步骤B的产物和35ml乙酸混合，然后加入45mlBr2的乙酸溶液，于室温下将该混合物搅拌过夜。加入300ml 1N氢氧化钠(水溶液)，然后加入75ml 50％氢氧化钠(水溶液)，用乙酸乙酯萃取。经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩为残留物。将残留物经层析(硅胶，20％-30％乙酸乙酯/己烷)纯化得到3.47g产物(另外有1.28g部分纯化的产物)。
步骤D
将0.557g(5.4mmol)亚硝酸叔丁酯和3ml DMF混合，将该混合物加热至60℃-70℃。缓慢加入(滴加)2.00g(3.6mmol)步骤C产物和4ml DMF的混合物，然后将该混合物冷却至室温。于40℃再加入0.64ml亚硝酸叔丁酯，将该混合物再加热至60℃-70℃达0.5小时。冷却至室温，将该混合物倾至150ml水中。用二氯甲烷萃取。经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩为残留物。将残留物层析(硅胶，10％-20％乙酸乙酯/己烷)得到0.74g产物。
步骤E
将0.70g(1.4mmol)步骤D的产物和8ml浓盐酸(水溶液)混合，将该混合物于回流下加热过夜。加入30ml 1N氢氧化钠(水溶液)，然后加入5ml 50％氢氧化钠(水溶液)，用二氯甲烷萃取。经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩得到0.59g目标化合物。
制备实施例8
步骤A
制备8.1g得自制备实施例7的目标化合物的甲苯溶液，加入17.3ml 1M DIBAL的甲苯溶液。于回流下，加热该混合物，用40分钟再缓慢(滴加)21ml 1M DIBAL的甲苯溶液。冷却该反应混合物至约0℃，加入700ml 1M盐酸(水溶液)。分离并弃去有机相。用二氯甲烷洗涤水相，弃去萃取物，然后加入50％氢氧化钠(水溶液)碱化水相。用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩得到7.30g目标化合物，为对映体的外消旋混合物。
步骤B-对映体的分离
经制备性手性层析(Chiralpack AD,5cm×50cm柱，用异丙醇/己烷+0.2％二乙胺洗脱)分离外消旋步骤A目标化合物，得到目标化合物的(+)-异构体和(-)-异构体。
制备实施例48步骤A
将6g(15.11mmol)WO 95/10516的制备实施例47B的目标化合物和苯混合，加入2.3g(9.06mmol)碘。于回流下，将该混合物加热3小时，冷却，然后用50ml二氯甲烷稀释。用5％亚硫酸氢钠(水溶液)(3×80ml)洗涤有机相，然后用1M氢氧化钠(水溶液)(2×80ml)洗涤，经硫酸镁干燥。浓缩的残留物经层析(硅胶，30％乙酸乙酯/己烷)得到3.2g(42％产率)碘代化合物。质谱MH+=509。
步骤B
用与WO 95/10516实施例358步骤A所述基本相似的方法，水解步骤A的产物，得到碘代胺产物，产率为89％。
制备实施例49
用与WO 95/10516实施例358步骤A所述基本相似的方法，水解WO 95/10516实施例47步骤C的产物(2.42g)，得到1.39g(69％产率)溴代胺产物。
制备实施例51A
步骤A
将WO 95/10516制备实施例1步骤G的产物82.0g(0.26mol)与lL甲苯混合，然后加入20.06g(0.53mol)LiAlH4，于回流下将该反应混合物加热过夜。冷却该混合物至室温，加入约1L乙醚，然后滴加饱和的硫酸钠(水溶液)至沉淀形成。过滤并在硫酸镁中搅拌滤液30分钟，然后真空浓缩，得到产物化合物，产率为83％。质谱MH+=313。
步骤B
将24.32g(74.9mmol)步骤A的产物、500ml甲苯、83ml三乙胺和65.9ml氯代甲酸乙酯混合，于回流下将该混合物加热过夜。冷却至25℃，倾至200ml水中，用乙酸乙酯萃取。经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩为残留物，层析(硅胶，50％乙酸乙酯/己烷)得到15g产物化合物。质谱MH+=385。
步骤C
将3.2g(10.51mmol)四-正-丁基硝酸铵溶于25ml二氯甲烷中，加入2.2g(10.51mmol,1.5ml)TFAA。冷却至0℃，然后于0℃将该混合物(通过导管)加至3.68g(9.56mmol)步骤B产物的50ml二氯甲烷溶液中，接着于0℃搅拌3小时。使该混合物温热至25℃，同时搅拌过夜，然后用饱和的碳酸氢钠(水溶液)萃取，经硫酸镁干燥。真空浓缩为残留物，层析(硅胶，30％乙酸乙酯/己烷)得到1.2g产物化合物。质谱MH+=430。
步骤D
将2.0g(4.7mmol)步骤C的产物与150ml 85％乙醇(水溶液)混合，加入2.4g(42mmol)铁屑和0.24g(2.1mmol)氯化钙，于回流下加热16小时。通过硅藻土床过滤热的混合液，用热乙醇洗涤该硅藻土。真空浓缩滤液得到100％产率的产物化合物。质谱MH+=400。
步骤E
将2.0g(5.2mmol)步骤D产物和20ml 48％HBr混合，将该混合物冷却至-5℃。于-5℃将该混合物搅拌15分钟，缓慢加入1.07g(15.5mmol)亚硝酸钠的10ml水溶液。搅拌45分钟后，用50％氢氧化钠(水溶液)骤冷至pH约为10。用乙酸乙酯萃取，经硫酸镁干燥合并的萃取物，真空浓缩得到产物化合物。质谱MH+=465。
步骤F
通过与WO 95/10516的实施例358步骤A所述基本相似的方法，水解步骤E的产物4.0g，得到1.39g产物化合物。质谱MH+=392。
制备实施例53
步骤A
将14.95g(39mmol)WO 95/10516制备实施例34A的产物和150ml二氯甲烷混合，然后加入13.07g(42.9mmol)(nBU)4NNO3，将该混合物冷却至0℃。用1.5小时缓慢加入(滴加)6.09ml(42.9mmol)TFAA的20ml二氯甲烷溶液。将该混合物保持于0℃过夜，然后顺序用饱和的碳酸氢钠(水溶液)、水和盐水洗涤。经硫酸钠干燥有机溶液，真空浓缩为残留物，残留物经层析(硅胶，乙酸乙酯/己烷梯度)分别得到4.32g产物化合物53(ⅰ)和1.90g产物化合物53(ⅱ)。
质谱53(ⅰ):MH+=428.2；质谱53(ⅱ):MH+=428.3。
步骤B
通过与WO 95/10516(1995年4月20日公开)的实施例358步骤A所述基本相似的方法，水解步骤A的化合物53(ⅱ)(0.20g)，得到0.16g产物化合物。
用指定的原料化合物和与制备实施例53步骤B所述基本相似的方法，制备表1化合物表1
制备实施例54步骤A
将22.0g(51.4mmol)制备实施例53步骤A产物53(ⅰ)、150ml 85％乙醇(水溶液)、25.85g(0.463mol)铁粉和2.42g(21.8mmol)氯化钙混合，于回流下加热过夜。加入12.4g(0.222mol)铁粉和1.2g(10.8mmol)氯化钙，于回流下加热2小时。再加入12.4g(0.222mol)铁粉和1.2g(10.8mmol)氯化钙，再于回流下加热2小时。通过硅藻土过滤热的混合物，用50ml热乙醇洗涤该硅藻土，真空浓缩滤液为残留物。加入100ml无水乙醇，浓缩为残留物，残留物经层析(硅胶，甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)得到16.47g产物化合物。
步骤B
将16.47g(41.4mmol)制备实施例54步骤A的产物化合物和150ml48％HBr(水溶液)混合并冷却至-3℃。缓慢加入(滴加)18ml溴，然后缓慢(滴加)8.55g(0.124mol)NaNO2的85ml水溶液。于-3℃至0℃搅拌45分钟，然后通过加入50％氢氧化钠(水溶液)调节pH=10。用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤萃取物，经硫酸钠干燥萃取物。浓缩为残留物，层析(硅胶，乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)分别得到10.6g产物化合物54(ⅰ)和3.28g产物化合物54(ⅱ)。
质谱54(ⅰ):MH+=461.2；质谱54(ⅱ):MH+=539。
制备实施例55
该目标化合物是已知的，并且可以通过Bioorg.& Med.Cherr.Lett.(3,No.6,1073-1078(1993))所述方法制备。
制备实施例56
步骤A
将2.04g WO 95/10516(1995年4月20日公开)制备实施例44的产物、1.3ml PBr3、1.0ml Et3N和20ml CH2Br2混合，于回流下加热该混合物过夜。冷却该混合物，用二氯甲烷稀释，用1N氢氧化钠(水溶液)洗涤。经硫酸镁干燥，真空浓缩得到1.22g(53％产率)产物化合物。质谱MH+=541。
步骤B
将0.3g制备实施例56步骤A的产物化合物和8ml正丁胺混合，于120℃在密封的试管中搅拌48小时。真空浓缩为残留物，经制备板层析(硅胶，1.5-2.5％甲醇/二氯甲烷)纯化得到80mg(27％)产物化合物。质谱MH+=534。
步骤C
将66mg制备实施例56步骤B的产物化合物、4ml无水乙醇和15ml浓盐酸混合，于回流下搅拌60小时。将该反应混合物冷却至约0℃，加入氢氧化钾碱化。用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩得到46mg(81％产率)产物化合物。质谱MH+=462。
制备实施例57
步骤A
将1.19g WO 95/10516制备实施例44产物、10ml无水DMF、0.2g NaH(60％矿物油液)和0.19ml甲基碘混合，于室温下搅拌过夜。真空浓缩为残留物，用二氯甲烷稀释残留物，用饱和的碳酸氢钠(水溶液)洗涤，经硫酸镁干燥。真空浓缩得到1.13g(92％产率)产物化合物。质谱MH+=493。
步骤B
用与制备实施例56步骤C所述基本相似的方法，水解步骤A产物1.13g，得到0.61g(63％产率)产物化合物。
制备实施例58
步骤A
将1.07g(3.52mmol)四丁基硝酸铵、4ml无水二氯甲烷和0.743g(3.52mmol)TFAA混合，于室温下，将产生的混合物加至1.22g(3.20mmol)WO 95/10516制备实施例37的目标化合物的8ml无水二氯甲烷溶液中。于室温下搅拌过夜，然后用20ml饱和的碳酸氢钠(水溶液)和20ml盐水洗涤，经硫酸镁干燥。真空浓缩并层析残留物(硅胶，乙酸乙酯/己烷)，得到0.216g产物化合物58(ⅰ)和0.27g产物化合物58(ⅱ)。质谱58(ⅰ):MH+=426。m.p.58(ⅰ)97.5-99.2℃。
步骤B
根据与WO 95/10516制备实施例47步骤B所述基本相似的方法，还原步骤A产物58(ⅰ)，得到产物化合物。质谱MH+=396。
步骤C
根据与WO 95/10516制备实施例47步骤C所述基本相似的方法，使步骤B产物与HBr和溴反应，得到产物化合物。质谱MH+=459。
步骤D
根据与制备实施例56步骤C所述基本相似的方法，水解步骤C产物0.83g，得到产物化合物0.56g。质谱MH+=387。
制备实施例60
步骤A
将16.25g(40.83mmol)WO/10516制备实施例47步骤B产物与7.14g(61.11mmol)NOBF4的100ml二氯甲烷中的淤浆混合，将该混合物搅拌3小时。加入100ml邻-二氯苯，并加热5小时，从该混合物中蒸馏二氯甲烷。真空浓缩为残留物，加入200ml二氯甲烷，用水(2×200ml)洗涤。经硫酸镁干燥，真空浓缩得到残留物，经层析(硅胶，20％乙酸乙酯/己烷)得到4.1g产物化合物60(ⅰ)和4.01g产物化合物60(ⅱ)。质谱60(ⅰ):MH+=418。质谱60(ⅱ):MH+=401。
步骤B
根据与WO 95/10516实施例358步骤A所述基本相同的方法，水解3.4g步骤A的产物60(ⅱ)，得到3.01g产物化合物。质谱MH+=329。
根据与制备实施例60步骤B所述基本相同的方法，用制备实施例60步骤A的产物60(ⅰ)，制备下列化合物
(制备实施例60A)质谱MH+=346。
制备实施例66
将50.0g(20.5mmol)8-氯-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-酮冷却至0℃，用20分钟缓慢加入75ml(93.69mmol)一氯化硫，然后用15分钟缓慢加入25ml(48.59mmol)溴。于95℃加热20小时，加入12.5ml(24.3mmol)溴，并再加热24小时。冷却该混合物，于0℃缓慢加至二氯甲烷和1N氢氧化钠(水溶液)的混合物中。用水洗涤有机相，经硫酸镁干燥，真空浓缩为残留物。层析残留物(硅胶，500ml二氯甲烷，然后0.2％-5％(10％氢氧化铵的甲醇溶液)/二氯甲烷洗脱)，然后再一次经层析(硅胶，3％-8.5％乙酸乙酯/己烷)得到8.66g产物化合物。质谱MH+=322。
制备实施例67
将0.16g(0.46mmol)4-(8-甲基-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-乙氧基羰基-哌啶溶于2ml乙醇中，加入4ml 12NHCl。于85℃加热该溶液3小时，然后冷却至25℃。用50％氢氧化钠(水溶液)调至pH=10，用50ml乙酸乙酯萃取数次。合并有机层，经硫酸镁干燥，真空浓缩得到产物化合物。
制备实施例68
步骤A
将2g(5.22mmol)WO/10516制备实施例1F的目标化合物溶于2.6ml无水N-甲基吡咯烷酮中。加入0.87g(9.4mmol)CuCN和0.139g(0.93mmol)碘化钠。于200℃、氮气环境下，将该混合物加热20小时，冷却至25℃，重复研磨，与5份50ml二氯甲烷和7M氢氧化铵(水溶液)混合。用7M氢氧化铵洗涤有机层至有机层不再显蓝色或绿色。经硫酸镁干燥合并的有机层，真空浓缩为残留物。层析(硅胶，70％乙酸乙酯/己烷)，然后从乙酸乙酯/己烷中重结晶得到产物化合物。m.p.=152.4-153.5℃。质谱MH+=374。
步骤B
将4.08g(10.93mmol)步骤A的产物溶于12M HCl中，于85℃加热18小时。真空浓缩为残留物。将残留物溶于175ml甲醇中，用HCl气体饱和，于回流下加热18小时。真空浓缩得到产物化合物，为盐酸盐。质谱MH+=335。
制备实施例69
于0℃将75g(0.196mol)WO 95/10516实施例1步骤F的产物和300ml二氯甲烷混合，缓慢加入(滴加)72g(0.236mol)四丁基硝酸铵和35ml(0.247mol)TFAA的500ml二氯甲烷溶液。于25℃搅拌过夜，缓慢加入(滴加)1L饱和的碳酸氢钠(水溶液)。分离各层，用盐水洗涤有机相，经硫酸镁干燥。真空浓缩为残留物，层析两次(1kg硅胶，乙酸乙酯/二氯甲烷梯度)得到8.63g产物化合物69(ⅰ)和34g产物化合物(ⅱ)。使化合物69(ⅰ)从二氯甲烷/己烷中重结晶得到纯化的产物化合物69(ⅰ)。m.p.=186℃-187℃；质谱(FAB)MH+=401。
制备实施例69A
将0.4g(1mmol)WO 95/10516(1995年4月20日公开)实施例47步骤B产物和0.2ml(1.2mmol)2,5-二乙氧基四氢呋喃于3ml冰乙酸中混合，于回流下加热1.5小时。冷却该混合物，用饱和的碳酸氢钠(水溶液)洗涤，然后用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，真空浓缩为残留物。层析(硅胶，5％-15％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到0.34g产物化合物。质谱(FAB)MH+=448。
制备实施例70
步骤A
于0℃将13.8g(34.7mmol)WO 95/10516实施例47步骤B产物和90ml水混合，加入6.9ml浓硫酸的45ml水溶液，搅拌该混合物。缓慢加入(滴加)2.55g(40mmol)亚硝酸钠的75ml水溶液，于0℃-5℃搅拌0.5小时。加入35.1g硫酸铜的135ml水的沸腾溶液，于100℃加热15分钟。冷却该混合物，用二氯甲烷(2×200ml)萃取，用盐水洗涤萃取物，经硫酸镁干燥，真空浓缩为残留物。层析(硅胶，1.5％-10％甲醇/二氯甲烷)得到11.36g产物化合物。
步骤B
于0℃，将11.36g(28.5mmol)步骤A产物和12.4g(34.7mmol)N-
11)如果R3、R4、R5和R6都是H，且R2是
则R1不能是2-呋喃基或3-呋喃基；12)当R2、R4、R5和R6都是H，且R3是甲氧基时，则R1不能是苯基、2-羧基苯基、4-胍基苯基、4-硝基苯基、3,5-二硝基苯基、4-(二苯基膦酰基甲基)苯基、4-(2’-二乙基膦酰基乙氧基)苯基、4-(3’-二乙基膦酰基丙氧基)苯基、4-(乙基膦酰基甲基)苯基、4-(乙基，甲基膦酰基甲基)苯基、4-(苄基，乙基膦酰基甲基)苯基、4-(乙基，异丙基膦酰基甲基)苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、4-(二甲基膦酰基甲基)苯基、4-(二正丁基膦酰基甲基)苯基、
13)当R4、R5和R6都是H,R2是苄基或甲基，且R3是甲氧基时，R1不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；14)当R2、R4、R5和R6都是H，且R3是乙氧基时，R1不能是苯基、4-正丁氧基苯基、4-异丙氧基苯基、4-甲氧基苯基或4-乙氧基苯基；15)当R2、R4、R5和R6都是H，且R3是正丙氧基时，R1不能是4-乙氧基苯基；16)当R2、R4、R5和R6都是H，且R3是甲基时，R1不能是苯基、4-胍基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、或
(制备实施例70-A)m.p.=155℃-157℃，质谱MH+=465。
步骤D
根据与WO 95/10516实施例358步骤A所述基本相同的方法，水解步骤C产物1.18g(2.89mmol)，得到0.95g产物化合物。质谱(FAB)MH+=337。
制备实施例71
步骤A
将1.01g(19.9mmol)制备实施例48步骤A产物、30ml DMF、1.33g(6.96mmol)2,2-二氟-2-(氟代磺酰基)-乙酸甲酯和0.75g(3.97g)CuI混合。于60℃-80℃将该混合物加热3小时，然后浓缩为残留物。用水稀释残留物，用二氯甲烷萃取，真空浓缩为残留物。层析(硅胶，30％乙酸乙酯/己烷，然后10％甲醇/二氯甲烷+氢氧化铵)，得到0.15g产物化合物。质谱MH+=451.1。
步骤B
用与WO 95/10516制备实施例1步骤G基本相同的方法，水解步骤A的产物，得到所述产物化合物。质谱MH+=379。
制备实施例72
步骤A
将20g(50mmol)WO 95/10516制备实施例1步骤F产物溶于400ml浓硫酸中，冷却至-5℃，分小份加入5.1g(50mmol)硝酸钾。搅拌3小时后，冷却该混合物，用50％氢氧化钠(水溶液)缓慢碱化。用二氯甲烷(3×500ml)萃取，经硫酸镁干燥合并的萃取物，真空浓缩为残留物。层析(硅胶，50％乙酸乙酯/己烷)得到16.33g产物化合物(72ⅰ)和2.6g产物化合物(72ⅱ)。质谱72(ⅰ)和72(ⅱ)MH+=428。
步骤B
用与WO 95/10516制备实施例358步骤A基本相同的方法，水解步骤A的产物(72ⅰ)5.46g(12.76mmol)，得到产物化合物4.34g。质谱MH+=356。
制备实施例73
步骤A
将1.6g制备实施例54步骤B的产物(54ⅰ)、12ml二氯甲烷和1.16g四丁基硝酸铵混合，冷却至0℃，缓慢加入(滴加)0.8g TFAA的2ml二氯甲烷溶液。于0℃搅拌6小时，将该混合物于0℃放置过夜，然后顺序用饱和的碳酸氢钠(水溶液)、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥。真空浓缩为残留物，然后层析(硅胶，30％乙酸乙酯/己烷)得到0.38g产物化合物。
步骤B
用与WO 95/10516实施例358步骤A所述基本相同的方法，水解步骤A的产物0.38g，得到产物化合物0.235g。
制备实施例75.4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-N-(4H-1,3-苯并二氧杂英-6-基)-1-哌啶硫代甲酰胺
将4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氢-11H-苯并[5.6]环庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶(0.5g,1.61mmol)溶于5ml无水四氢呋喃中。加入4H-1,3-苯并二氧杂英-6-基)异硫氰酸酯(0.34g,1.77mmol)，于室温下搅拌24小时。蒸发该反应混合物为油状物，硅胶层析，用1％-5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到0.893g目标化合物。FABMS M+1=694。
测定1．体外酶测定根据WO/10515或WO 95/10516公开的方法，可以测定FPT IC50(体外酶测定中对法呢基蛋白转移酶的抑制)。该数据表明本发明的化合物为部分纯化的大鼠脑法呢基蛋白转移酶(FPT)的Ras-CVLS法呢基化的抑制剂。该数据也表明本发明的化合物被认为是部分纯化的大鼠脑FPT的Ras-CVLS法呢基化的有效的抑制剂(IC50＜10μM)。
2．细胞测定COS IC50值指抑制Ras加工的COS细胞活性，根据WO/10515或WO 95/10516公开的方法测定。
用本发明所述化合物制备药用组合物时，惰性、药学上可接受的载体可以为固体或液体。固体形式制剂包括粉末剂、片剂、分散颗粒剂、胶囊剂、扁胶囊剂和栓剂。粉末剂和片剂含有约5-约70％的活性成分。适合的固体载体是本领域已知的，如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖。片剂、粉末剂、扁胶囊剂和胶囊剂可以用作适合口服给药的固体剂型。
制备栓剂时，首先将低熔点蜡例如脂肪酸甘油酯或可可油的混合物融化，通过搅拌将所述活性成分均匀分散于其中。然后将熔化的均匀的混合物倾至常规大小的模具中，使其冷却、固化。
液体制剂包括溶液、悬浮液和乳液。作为实例包括胃肠外注射的水或水-丙二醇溶液。
液体制剂也可以包括鼻内给药的溶液。
适合吸入的气雾剂制剂可以包括溶液和粉末形式的固体，可以与药学上可接受的载体例如惰性压缩气体混合。
固体制剂也包括在使用前即刻转化为液体形式制剂以供口服或胃肠外给药的制剂。此类液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。
本发明的化合物也可以经透皮释放。透皮组合物可以为霜剂、洗液、气雾剂和/或乳液，可以包括本领域常规用于该目的的基质的透皮贴剂或储存形式。
优选所述化合物口服给药。
优选所述药用制剂为单位剂型。在此类剂型中，该制剂可以再分为含有适当量的活性成分，如有效量以达到所需目的的单位剂量。
根据特定的应用，单位剂量制剂中活性化合物的量可以变化，或者在约0.1mg至1000mg，更优选在约1mg至300mg之间调整。
实际使用的剂量可以根据病人的需要和所治疗的疾病的严重程度变化。本领域技术人员可以决定特定情况下的适合的剂量。一般而言，治疗从小于所述化合物最佳剂量的较小剂量开始。此后，逐渐增加剂量至获得该情况下的最佳效果。为方便起见，可以将总日剂量分开，并根据需要全天分次给药。
本发明的化合物和其药学上可接受的盐的给药量和给药频率由临床医生根据对下列因素，如年龄、病人的身体状况和身高、体重以及治疗的症状的严重程度进行判断调整。口服给药推荐的剂量一般为10mg-2000mg/天，优选10-1000mg/天，分2-4个亚剂量给药以阻断肿瘤生长。当在此剂量范围内给药时，所述化合物是非毒性的。
下列为含有本发明化合物的药用剂型的实例。本发明在药用组合物方面的范围不受所提供的实施例的限制。
药用剂型实施例实施例A-片剂
生产方法将组分1和2在适当的混合器中混合10-15分钟。用组分3将该混合物制粒。如果需要，将该湿颗粒通过粗筛(如1/4”,0.63cm)磨细。干燥湿颗粒。如果需要过筛干燥颗粒，与组分4混合，混合10-15分钟。加入组分5并混合1-3分钟。将该混合物压制成适当大小，在适当的片剂设备上称重。
实施例B-胶囊剂
<p>生产方法将组分1、2和3在适当的混合器中混合10-15分钟。加入组分4，混合1-3分钟。在适当的装胶囊机上将该混合物填充入适当的两部分的硬明胶胶囊中。
尽管结合上述特定的实施方案对本发明进行了描述，但是对本领域普通技术人员而言许多变通、修改和变化是显而易见的。所有的此类变通、修改和变化均在本发明的宗旨和范围内。
权利要求
1．下式的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物
其中a、b、c和d之一代表N或NR9，其中R9代表O-、-CH3或-(CH2)nCO2H，其中n为1-3，而其余的a、b、c和d基团代表CR1或CR2；或每个a、b、c和d独立选自CR1或CR2；每个R1和每个R2独立选自H、卤代、-CF3、-OR10(如-OCH3)、-COR10、-SR10(如-SCH3和-SCH2C6H5)、-S(O)tR11(其中t为0、1或2，如-SOCH3和-SO2CH3)、-SCN、-N(R10)2、-NR10R11、-NO2、-OC(O)R10、-CO2R10、-OCO2R11、-CN、-NHC(O)R10、-NHSO2R10、-CONHR10、-CONHCH2CH2OH、-NR10COOR11、-SR11C(O)OR11(如-SCH2CO2CH3)、-SR11N(R75)2，其中每个R75独立选自H和-C(O)OR11(如-S(CH2)2NHC(O)O-t-丁基和-S(CH2)2NH2)、苯并三唑-1-基氧基、四唑-5-基硫基或取代的四唑-5-基硫基(如烷基取代的四唑-5-基硫基，像1-甲基-四唑-5-基硫基)、炔基、链烯基或烷基，所述烷基或链烯基任选被卤素、-OR10或-CO2R10取代；R3和R4相同或不同，分别独立代表H,R1和R2或R3和R4的任何取代基可以一起代表与苯环(环Ⅲ)稠合的饱和的或未饱和的C5-C7元环；R5、R6、R7和R8分别独立代表H、-CF3、-COR10、烷基或芳基，所述烷基或芳基任选被OR10、-SR10、-S(O)tR11、-NR10COOR11、-N(R10)2、-NO2、-COR10、-OCOR10、-OCO2R11、-CO2R10、OPO3R10，或R5、R6、R7和R8之一与下述定义的R40一起代表-(CH2)r-，其中r为1-4，它可以被低级烷基、低级烷氧基、-CF3或芳基取代，或R3与R6一起代表=O或=S，和/或R7与R8一起代表=O或=S；R10和R12独立代表H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂芳基、芳基、芳烷基或-NR40R42，其中R40和R42独立代表H、芳基、烷基、芳烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂烷基、环烷基、环烷基烷基、链烯基和炔基；R11代表烷基或芳基；X代表N、CH或C，使当X为N或CH时，有一个用实线表示的与碳原子11相连的单键；或当X为C时，有一个用实线和点线表示的与碳原子11相连的双键；碳原子5和6之间的点线表示任选的双键，使当存在双键时，A和B独立代表-NO2、-R10、卤代、-OR11、-OCO2R11或-OC(O)R10，当碳原子5和6之间不存在双键时，A和B分别独立代表H2、-(OR11)2、H和卤代、二卤代、烷基和H、(烷基)2、-H和-OC(O)R10、H和-OR10、氧代、芳基和H、=NOR10或-O-(CH2)p-O-，其中p为2、3或4；和Z代表烷基、芳基、芳烷基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、-OR40、-SR40、-CR40R42或-NR40R42，其中R40和R42与上述定义相同；优选在化合物(1.0)中，在碳原子11上有一个单键，X为碳，环上的3位、8位和10位优选被卤素取代；Z为-NHR40，优选其中的R40为杂芳基烷基，更优选为3或4-甲基吡啶基N-氧化物。
2．权利要求1的化合物，其中a为N,R1为H；R2、R3和R4为卤代；X为CH；R5、R6、R7和R8为氢。
3．权利要求2的化合物，其中Z为-NR40R42。
4．权利要求3的化合物，其中R40为H,R42为杂芳基烷基。
5．权利要求4的化合物，其中R42为2-、3-或4-吡啶基甲基N-氧化物。
6．权利要求1的化合物选自实施例1-83化合物中的任何一种。
7．权利要求1的化合物选自实施例9的化合物。
8．抑制细胞异常生长的药用组合物，该组合物包含有效量的权利要求1的化合物以及药学上可接受的载体。
9．抑制细胞异常生长的方法，该方法包括给予有效量的权利要求1的化合物。
10．权利要求9的方法，其中所述被抑制的细胞为表达激活的ras致癌基因的肿瘤细胞。
11．权利要求9的方法，其中所述被抑制的细胞为胰腺肿瘤细胞、肺癌细胞、骨髓性白血病肿瘤细胞、甲状腺囊肿瘤细胞、骨髓增生异常肿瘤细胞、表皮癌肿瘤细胞、膀胱癌肿瘤细胞或结肠肿瘤细胞。
12．权利要求9的方法，其中所述细胞异常生长的抑制通过抑制ras法尼基蛋白转化酶产生。
13．为抑制肿瘤细胞的权利要求9的方法，其中所述Ras蛋白由于Ras基因以外基因的致癌突变而被激活。
全文摘要
公开为酶—法尼基蛋白转移酶抑制剂的新的三环N－氰亚胺化合物和药用组合物。也公开抑制Ras功能并因此抑制细胞异常生长的方法。该方法包括给予生物体系新的三环N－氰亚胺化合物。具体地讲,该方法抑制哺乳动物,如人类细胞的异常生长。
文档编号A61K31/445GK1226246SQ97196817
公开日1999年8月18日 申请日期1997年7月29日 优先权日1996年7月31日
发明者A·B·库珀, J·J·-S·王, R·G·洛维, J·A·德赛, A·K·萨克瑟纳, V·M·吉里贾瓦拉布汉, R·J·多尔 申请人:先灵公司