专利名称：一种人参次苷h提取物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物及其制备，特别涉及人参次苷H提取物及其制备。
背景技术：
人参在治疗心脑血管疾病方面，有许多报道。人参次苷类成分，可治疗冠心病和缺血性中风。人参次苷H为人参类皂苷经水解产生的次级皂苷，再经硅胶柱层析精制所得到的 有效部位-H组皂苷，其组分为人参皂苷他1、他2和他3，其中他2为该药的主要成分，也是 该药的主要抗癌活性成分。药效学研究表明人参皂苷他2对肝癌、黑色素瘤B16、宫颈癌 及肉瘤S180等癌细胞的增殖有显著的特异性的抑制作用。其作用机理为在癌细胞增殖过 程中，经人参皂苷Μι2作用，使癌细胞停止在一定的增殖期，并促使其逆转为正常细胞。含 有人参皂苷Mil、Mi2和他3的H组皂苷，为“人参次苷H”，体外实验研究发现人参次苷H对 多种人源肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用。现有技术分离人参次苷H的效果不佳，本发明人在对人参次苷H提取物进行研究 过程中，采用新的分离技术，试验出一组新的人参次苷H提取物及其制备方法，这些人参次 苷H提取物具有疗效高，纯度高，吸收好，质量稳定，同时制备方法分离效果佳，含量高，工 艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。

发明内容
本发明提供一种人参次苷H提取物，提取物中含人参皂苷Iih1含量范围为 2% -20%，人参皂苷他2含量范围为20% -40%;人参总次苷含量以人参皂苷他2计不少于 60%,人参皂苷Iih1和人参皂苷Mi2总和不少于40%。本发明的人参次苷H提取物，制备方法如下步骤1、含有人参皂苷类成分的药材用水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用 水洗脱，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至干，得总皂苷；步骤2、步骤1得到的总皂苷溶于碱溶液中反应，冷却后收集沉淀物；步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅胶中，进行硅胶柱层析，用乙醇和乙酸乙酯混合 液进行洗脱，收集富含人参皂苷Mil和他2的流份，浓缩即得；其中，步骤1中所述大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，所述乙醇范 围为 30-95% ；步骤2中所述的碱溶液选自氢氧化钠，氢氧化钾，碳酸氢钠或碳酸氢钾形成的溶 液，步骤3所述乙醇和乙酸乙酯混合液为含有5-15%乙醇的乙酸乙酯。优选的制备方法如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成 分的药材经水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用85%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂苷；步骤2、总皂苷溶于5倍量的水中，加入等倍量的饱和氢氧化钠溶液，加热回流6h， 放冷，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的硅胶中，进行硅胶柱层 析，用乙醇和乙酸乙酯体系进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷Mil和人 参皂苷他2的流份，浓缩至干，即得人参次苷H组合物。更优选的制备方法如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成 分的药材用水提取2-3次，每次1-2小时，每次加水8-12倍量，提取液通过大孔吸附树脂 柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用85 %乙醇洗脱，收集85 %乙醇洗脱液，浓缩至 干得总皂苷；步骤2、总皂苷溶于5倍量的水中，加入等倍量的饱和氢氧化钠溶液，加热回流他， 放冷，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的硅胶中，进行硅胶柱层 析，用乙醇和乙酸乙酯体系进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷Mil和人 参皂苷他2的流份，浓缩至干，即得人参次苷H组合物。本发明的人参次苷H提取物的检测方法，步骤如下(1)人参次苷H提取物中人参总次苷含量以人参皂苷1 计不得少于60%对照品溶液的制备精密称取经40°C减压干燥M小时的人参皂苷Mi2对照品适 量，加甲醇制成每Iml含0. 15mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备精密称取人参次苷H组合物10mg，用50ml正丁醇饱和的水超 声5分钟后转移至分液漏斗，加入2g氯化钠溶解后，用水饱和的正丁醇-乙酸乙酯=1 4 萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯层溶液，浓缩至干，残渣用甲醇溶解，定量转移至 50ml量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即得；测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置15ml具塞试管中，水 浴蒸干，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸=1 4混合溶液anl，摇勻，密塞， 置60°C水浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸10ml，摇 勻，以试剂作空白，照中国药典2005年版一部附录VA分光光度法，在550nm的波长处测定 吸收度，计算，即得，本品按干燥品计算，含人参总次苷以人参皂苷Iih2计，不得少于60. 0% ；(2)人参次苷H中人参皂苷Iih1和人参皂苷Mi2含量之和不得少于40% ；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动 相A，以0. 2%磷酸溶液为流动相B，按下列梯度进行洗脱；检测波长为203nm，理论板数按人 参皂苷Mi2峰计算应不低于7000。
权利要求
1.一种人参次苷H提取物，其特征在于，提取物中含人参皂苷Iih1含量范围为 5% -25%，人参皂苷他2含量范围为20% -40%;人参总次苷含量以人参皂苷他2计不少于 60%,人参皂苷Iih1和人参皂苷Mi2总和不少于40%。
2.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，制备方法如下步骤1、含有人参皂苷类成分的药材用水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗 脱，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至干，得总皂苷；步骤2、步骤1得到的总皂苷溶于碱溶液中反应，冷却后收集沉淀物； 步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅胶中，进行硅胶柱层析，用乙醇和乙酸乙酯混合液进 行洗脱，收集富含人参皂苷Mil和他2的流份，浓缩即得；其中，步骤1中所述大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，所述乙醇范围为 30-95% ；步骤2中所述的碱溶液选自氢氧化钠，氢氧化钾，碳酸氢钠或碳酸氢钾形成的溶液， 步骤3所述乙醇和乙酸乙酯混合液为含有5-15%乙醇的乙酸乙酯。
3.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，制备方法如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成分的 药材经水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用85% 乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂苷；步骤2、总皂苷溶于5倍量的水中，加入等倍量的饱和氢氧化钠溶液，加热回流6h，放 冷，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的硅胶中，进行硅胶柱层析，用 乙醇和乙酸乙酯混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷和人参皂 苷他2的流份，浓缩至干，即得人参次苷H组合物。
4.权利要求1的人参次苷H提取物，其特征在于，制备方法如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成分的 药材用水提取2-3次，每次1-2小时，每次加水8-12倍量，提取液通过大孔吸附树脂柱，先 用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用85%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，浓缩至干得总 皂苷；步骤2、总皂苷溶于5倍量的水中，加入等倍量的饱和氢氧化钠溶液，加热回流6h， 放冷，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的硅胶中，进行硅胶柱层析，用 乙醇和乙酸乙酯混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷和人参皂 苷他2的流份，浓缩至干，即得人参次苷H组合物。
5.权利要求1的人参次苷H提取物的检测方法，其特征在于，步骤如下(1)人参次苷H组合物中人参总次苷含量以人参皂苷Mi2计不得少于60%对照品溶液 的制备精密称取经40°C减压干燥M小时的人参皂苷Mi2对照品适量，加甲醇制成每Iml含 0. 15mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备精密称取人参次苷H组合物10mg，用50ml正丁醇饱和的水超声 5分钟后转移至分液漏斗，加入2g氯化钠溶解后，用水饱和的正丁醇-乙酸乙酯=1 4 萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯层溶液，浓缩至干，残渣用甲醇溶解，定量转移至 50ml量瓶中，稀释至刻度，摇勻，即得；测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置15ml具塞试管中，水浴蒸 干，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸=1 4混合溶液anl，摇勻，密塞，置60°C 水浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸IOml，摇勻，以试剂 作空白，照中国药典2005年版一部附录V A分光光度法，在550nm的波长处测定吸收度，计 算，即得，本品按干燥品计算，含人参总次苷以人参皂苷Mi2计，不得少于60. 0% ； (2)人参次苷H组合物中人参皂苷Iih1和人参皂苷Mi2含量之和不得少于40% ； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动相 A，以0. 2%磷酸溶液为流动相B，按下列梯度进行洗脱；检测波长为203nm，理论板数按人参 皂苷Rh2峰计算应不低于7000。时间(分)流动相A (%)流动相B (%)0 1035 5065 5010 4050 9050 1040 50901050 5590 3510 6555 603565对照品溶液的制备精密称取40°C减压干燥的人参皂苷1 ^! 适量，加甲醇溶解并 制成每Iml分别含0. lmg、0. 5mg的混合溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取人参次 苷H组合物25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即 得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱，测定，即得；本品按干燥品计算，含人参皂苷Mi1和人参皂苷Mi2，总和不得少于40 %。
6.含权利要求1的人参次苷H提取物的药物组合物。
7.权利要求1的人参次苷H提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
8.权利要求1的人参次苷H提取物的制备方法，其特征在于，步骤如下步骤1、含有人参皂苷类成分的药材用水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗 脱，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至干，得总皂苷；步骤2、步骤1得到的总皂苷溶于碱溶液中反应，冷却后收集沉淀物；步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅胶中，进行硅胶柱层析，用乙醇和乙酸乙酯混合液进 行洗脱，收集富含人参皂苷Mil和他2的流份，浓缩即得；其中，步骤1中所述大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，所述乙醇范围为 30-95% ；步骤2中所述的碱溶液选自氢氧化钠，氢氧化钾，碳酸氢钠或碳酸氢钾形成的溶液，步骤3所述乙醇和乙酸乙酯混合液为含有5-15%乙醇的乙酸乙酯。
9.权利要求8的制备方法，其特征在于，步骤如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成分的 药材用水提取2-3次，每次1-2小时，每次加水8-12倍量，提取液通过大孔吸附树脂柱，先 用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用85%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，浓缩至干得总3皂苷；步骤2、总皂苷溶于5倍量的水中，加入等倍量的饱和氢氧化钠溶液，加热回流6h，放 冷，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的硅胶中，进行硅胶柱层析，用 乙醇和乙酸乙酯混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷和人参皂 苷他2的流份，浓缩至干，即得人参次苷H组合物。
全文摘要
本发明涉及一种中药提取物及其制备，特别涉及人参次苷H提取物及其制备。本发明的提取物中含人参皂苷Rh1含量范围为5％-25％，人参皂苷Rh2含量范围为20％-40％；人参总次苷含量以人参皂苷Rh2计不少于60％，人参皂苷Rh1和人参皂苷Rh2总和不少于40％。
文档编号A61K36/258GK102058645SQ20091022846
公开日2011年5月18日 申请日期2009年11月17日 优先权日2009年11月17日
发明者周水平, 宋兆辉, 张兰兰, 朱永宏, 林万里, 蔡楠, 黄芝娟 申请人:天津天士力制药股份有限公司