专利名称：角膜结膜疾病治疗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有合欢香叶酯(gefarnate)作为活性成分的角膜结膜疾病治疗剂。
背景技术：
通常，机体通过消化道和呼吸器官等的粘膜表面的分界与外界直接接触并受到外界微生物和外源物质侵袭的危险。机体因此具有保护其粘膜的防御机制。换言之，虽然粘膜仅包被有单层粘膜上层，但上皮细胞总覆盖有由外分泌腺分泌的外分泌粘液而该外分泌液能够防止微生物和外源物质直接与上皮细胞接触。在眼部起到上述作用并可润湿眼球表面的是眼泪。
泪层由油性层、水层和粘液层三层组成并且角膜结膜上皮细胞紧邻于粘液层。构成粘液层的粘蛋白是一种由结膜杯形细胞分泌的糖蛋白。已发现粘蛋白层覆盖在疏水性角膜结膜上皮细胞表面并使上皮细胞变性为亲水性以利于泪中水层的保持和扩张，从而其对维持眼泪正常结构起重要作用。(眼科杂志，8,1037-1042(1991))因此，任何能够促进粘蛋白向泪液内分泌的物质都可被看作可有效地治疗表现为角膜结膜上皮异常的角膜结膜疾病，例如干眼(dry eye)病、角膜炎、结膜炎、角膜糜烂和角膜溃疡。
近期已就药物与粘蛋白生成和分泌间的关系进行了研究并已有关于溃疡治疗剂乙溴替丁能够促进大鼠胃粘蛋白生成和分泌的报导(基因药物学(Gen.Pharmac.),24,611-617(1993))，以及有关粘蛋白参与维生素U抗溃疡作用的推测(日本药理学和治疗学，22,4355-4361(1994))。
已公开的合欢香叶酯是一种具有高效抗溃疡作用并且可以有效治疗消化道溃疡例如胃溃疡和十二指肠溃疡的物质(日本特许公开28,230/1964)。合欢香叶酯的作用机制被认为是促使酸性粘多糖沉淀在损伤表面从而增加胃粘膜内的粘液量(例如己糖胺)以保护粘膜等，并且使内源性前列腺素增多(药物医学，4,45-48(1986))。
然而，至今未有关于眼科学领域的研究报导。
虽然已进行了许多关于包括干眼症在内的角膜结膜疾病治疗剂的研究，但发现具有促进眼组织内粘蛋白生成和分泌作用的新物质十分令人感兴趣。
本发明详述本发明着重研究应用于粘膜保护领域的溃疡治疗剂对眼组织内粘蛋白生成和分泌所产生的影响作用，并且观察到合欢香叶酯的促角膜结膜内粘蛋白生成和分泌活性且由此发现其是一种治疗角膜结膜疾病例如干眼症、角膜炎、结膜炎、角膜糜烂和角膜溃疡疾病的有效治疗剂。
虽然合欢香叶酯的促眼组织内粘蛋白生成和分泌作用的详细内容将在药理学试验段落中给出，但在采用存在于角膜上皮内的放射性同位素标记硫酸根离子的研究中已经发现合欢香叶酯能够引发含有粘蛋白的蛋白质(该蛋白在下文中将称为“含粘蛋白蛋白质”)的分泌。当将球结膜最外层回收并且通过压迹细胞学方法观察时会同时发现合欢香叶酯使球结膜内的含粘蛋白杯状细胞量增加。
合欢香叶酯剂型的实例包括眼用制剂，例如眼用溶液和眼用软膏和注射液，并且这些制剂的制备可以采用多种方法。在眼用溶液中，例如可根据需要采用等渗剂，例如氯化钠和浓甘油；缓冲剂，例如磷酸钠和乙酸钠；表面活性剂，例如聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯(下文中将称为“聚山梨酯80”)、硬脂酸-40-聚烃氧基酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油；稳定剂，例如柠檬酸钠和乙二胺四乙酸钠；防腐剂，例如苯扎氯铵和对羟基苯甲酸酯；等等。pH介于眼用制剂可接受范围内并且优选在4-8之间。
要根据病症、年龄、剂型等选择适当的剂量。对于眼用溶液，每天用浓度为0.01-5％(w/v)优选0.1-3％的溶液滴眼一至数次。对于注射液，以0.0001-5mg、优选0.001-1mg的剂量每天给药一至数次。
本发明最佳实施例下文中，制剂实施例和药理学试验的结果都仅用来更好理解本发明用而不作为本发明保护范围的限定。[制剂实施例]制备合欢香叶酯的眼用溶液和眼用软膏的代表性实施例如下所述1)眼用溶液配方1(制剂1)(10ml)合欢香叶酯 10mg氯化钠 90mg聚山梨酯80 50mg无菌纯水 适量配方2(制剂2)(10ml)合欢香叶酯 30mg氯化钠 90mg聚山梨酯80 50mg无菌纯水 适量配方3(制剂3)(10ml)合欢香叶酯 100mg氯化钠 90mg聚山梨酯80 50mg无菌纯水 适量配方4(制剂4)(10ml)合欢香叶酯 300mg氯化钠 90mg聚山梨酯80 50mg无菌纯水 适量2)眼用软膏配方5(制剂5)(100g)
合欢香叶酯 1g液体石蜡 10g白矿脂 84g纯化羊毛脂 5g[药理学试验]为测定合欢香叶酯的作用功效研究了该化合物对角膜上皮和球结膜内的粘蛋白生成和分泌的影响。1．角膜上皮内粘蛋白的生成和分泌已公开的试验方法是将放射性同位素([35S])标记的硫酸根离子掺入到组织内，分离出含粘蛋白蛋白质并以该类蛋白质的量为依据来评估粘蛋白含量(生物化学杂志，257,4709-4718(1982)；美国生理学杂志，244,C391-C398(1983))。
按照现有文献所述的方法研究合欢香叶酯对角膜上皮的粘蛋白生成和分泌的影响作用，研究方法中采用下述大鼠的角膜并用dolichosmamerectin法(下文简写为DBA)分离出分泌的含粘蛋白蛋白质。(试验方法)从雄性Sprague-Dawley品系大鼠的角膜分离出直径为3mm的角膜片(每组5-6片)并在37℃下放置于有5％CO2存在的培养基(TC-199)内培养6小时。然后，向该培养基中加入[35S]标记硫酸钠并且进一步培养18小时以使[35S]硫酸根离子全部掺入角膜片内。除去培养基，组织用磷酸盐缓冲的生理盐水溶液洗涤。再向所得组织中分别加入含不同浓度的合欢香叶酯的培养基且继续培养30分钟。随后，在培养基中加入DBA固定的凝胶并在室温下振摇混合物。振摇后回收凝胶，用液体闪烁计数器测定包含凝胶键合[35S]硫酸根离子的含粘蛋白蛋白质的放射性活度。(结果)作为试验结果实施例，表1列出培养基内合欢香叶酯浓度分别为0.01和0.1mg/ml时的每单位角膜湿重的[35S]硫酸根离子放射性活度。同时，表中数据是以未经待测化合物处理的每单位角膜湿重的[35S]硫酸根离子放射性活度为100计的计算值。
表1

从表1可明显看出，加入合欢香叶酯后，含凝胶键合[35S]硫酸根离子的含粘蛋白蛋白质的放射性活度增强，由此推断出对含粘蛋白蛋白质分泌的促进作用。该作用强度依赖于合欢香叶酯的浓度。
上述结论清楚地表明合欢香叶酯具有优异的促角膜上皮内粘蛋白生成和分泌的活性。2．球结膜内粘蛋白的生成和分泌已公开的试验方法是通过多种染色方法进行压迹细胞学测定以验证结膜状况，所谓压迹细胞学是一种侵染力很低的生物体表面的活组织检查方法并且可以利用乙酸纤维素滤纸反复操作(眼科学，92,728-733(1985)；和眼科杂志，11,1163-1167(1994))。
现在，按照现有文献所述的方法对用过碘酸-希夫染色法(下文中简称为PAS)染色的杯状细胞数量进行压迹细胞学测定以研究合欢香叶酯对球结膜内粘蛋白生成和分泌的影响。(试验方法)用合欢香叶酯眼用溶液在一周中的每天内对雄性日本白兔双眼滴液6次。在最后一次滴液的第二天，将裁成3×3mm大小的乙酸纤维素滤纸放置在已常规麻醉兔子的鼻侧球结膜上并且轻轻按压数秒。该滤纸从结膜转移开并浸渍在37％甲醛∶乙酸∶70％乙醇=1∶1∶20的混合物中，然后用乙醇脱水。随后浸渍在0.5％过碘酸中并用希夫试剂染色。滤纸用乙醇脱水，再浸渍于二甲苯中，然后嵌置在载玻片上。在光学显微镜下观察用PAS染色的杯状细胞并对它们进行照相。(结果)作为试验结果例，表2列出了配方1(合欢香叶酯眼用溶液)(合欢香叶酯浓度0.1％(w/v))和配方3(同上)(合欢香叶酯浓度1％(w/v))施用组的每平方毫米上的杯状细胞数量。同时还给出未用眼用溶液处理的空白对照组的每平方毫米杯状细胞的数量。表2

从表2可明显看出，配方3的滴眼液提高了球结膜上杯状细胞的密度，由此可推断出其具有增加细胞数量的作用。
因此，可清楚地看出合欢香叶酯能够使球结膜内的含粘蛋白杯状细胞增多，并且显示出优异的促球结膜内粘蛋白生成和分泌的活性。
由上述药理学试验结果发现合欢香叶酯能够促进角膜和结膜内的粘蛋白生成和分泌，同时可作为治疗干眼症和其他角膜结膜疾病例如角膜炎、结膜炎、角膜糜烂和角膜溃疡的有效药物。
工业实用性本发明涉及含有合欢香叶酯作为活性成分的角膜结膜疾病治疗剂。本发明所述的角膜结膜疾病治疗剂可应用于干眼病、角膜炎、结膜炎、角膜糜烂、角膜溃疡等疾病。
权利要求
1．一种含有合欢香叶酯作为活性成分的角膜结膜疾病治疗剂。
2．根据权利要求1所述的角膜结膜疾病治疗剂，其中的角膜结膜疾病是干眼症、角膜炎、结膜炎、角膜糜烂、角膜溃疡。
3．根据权利要求1所述的角膜结膜疾病治疗剂，其中，角膜结膜疾病是干眼症。
4．根据权利要求1-3所述的任一角膜结膜疾病治疗剂，其中的剂型为眼用溶液。
5．根据权利要求4所述的角膜结膜疾病治疗剂，其中合欢香叶酯浓度为0.1-3％重量/体积。
全文摘要
一种促进眼组织内粘蛋白生成和分泌的新物质。含有合欢香叶酯作为活性成分的角膜结膜疾病治疗剂,用于治疗干眼症、角膜炎、结膜炎、角膜糜烂、角膜溃疡等。优选的剂型是眼用溶液。合欢香叶酯浓度为0.1—3%重量/体积。
文档编号A61K31/231GK1209743SQ9719181
公开日1999年3月3日 申请日期1997年1月17日 优先权日1996年1月22日
发明者中田胜彦, 中村雅胤, 滨野孝 申请人:参天制药株式会社