专利名称：乌司他丁作为制备抗hiv-1病毒药物的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及乌司他丁作为制备抗Hiv-I病毒药物的应用。
背景技术：
AIDS自1970年以来就以惊人的速度在全球蔓延，近年来在防治艾滋病方面取得巨大的进展，但仍缺乏根治HIV感染的有效药物。现阶段的治疗目标是最大限度和持久的降低病毒载量；获得免疫功能重建和维持免疫功能；提高生活质量；降低HIV相关的发病率和死亡率。治疗方法包括一般性治疗、抗病毒治疗、恢复和改善免疫功能的治疗和机会性感染及恶性肿瘤的治疗。其中抗病毒是治疗的关键。随着HIV蛋白酶抑制剂的出现，就出现了高效抗反转录病毒联合疗法(highly active anti-retroviral therapy, HAART)的应用，大大提高了抗HIV的疗效，显著改善了 AIDS患者的生活质量和预后，使AIDS的治疗前进了一大步。当前主要的抗病毒药物已获批准进入市场的有16种，主要分三大类核苷类反转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)和蛋白酶抑制剂(PI)。其中蛋白酶抑制剂(protease inhibitor, PI) :HIV_1蛋白酶是一个对称的二聚体，在该酶的催化下，HIV有两种蛋白前体裂解为成熟蛋白，所以此酶对病毒的复制非常重要。蛋白酶抑制剂能通过抑制蛋白酶即阻断HIV复制和成熟过程中所必需的蛋白质合成，从而抑制HIV的复制。此类制剂包括
A.沙奎那韦(saquinavir):高效高选择性的HIV蛋白酶抑制剂。本品作用于HIV繁殖的后期，与HIV蛋白酶的激活点结合，使之失去结合和水解断裂多肽的功能。本品抑制HIV蛋白酶与其它抗HIV病毒药如叠氮胸苷，抑制HIV逆转录酶的作用靶酶系不同，无交叉耐药病毒产生。600mg，2次/d或3次/d。副作用可有恶心、呕吐、腹泻等消化道症状，亦可见头痛，转氨酶升高等。B.茚地那韦(indinavir) : (HIV蛋白酶抑制剂，和其他抗逆转录病毒药物联合使用。800mg，3次/d。副作用有恶心、呕吐、头痛、乏力、眩晕、皮疹等，并可致非结合胆红素升闻、血小板减少、肾结石、血糖升闻及脂肪重新分布等。C.奈非那韦(nelfinavir) :750mg,3次/d。副作用有腹湾、高血糖等。D.利托那韦(ritonavir) =HIV-I和HIV-2天冬氨酸蛋白酶的口服有效抑制剂，阻断该酶促使产生形态学上成熟HIV颗粒所需的聚蛋白，使HIV颗粒因而保持在未成熟的状态，从而减慢HIV在细胞中的蔓延，以防止新一轮感染的发生和延迟疾病的发展。本品对齐多夫定敏感的和齐多夫定与沙喹那韦耐药的HIV株一般均有效。300 600mg，2次/d。副作用有恶心、呕吐、腹泻、乏力、感觉异常、肝功能不良、甘油三酯升高、尿酸增加、血糖升高
坐寸o上述三类药物多数都有不良反应，单用很难有效抑制病毒的复制，且易产生耐药。因此，强调联合用药。联合用药的方案很多，目前多以一种蛋白酶抑制剂加两种NRTI制剂，或两种蛋白酶抑制剂加一两种NRTI制剂，常见的联合方案有沙奎那韦ZDV 3TC ;或奈非那韦D4T ddi ;或茚地那韦ZDV ddi ;或利托那韦ZDV ddc ;或沙奎那韦利托那韦D4T 3TC。使用这些联合方案治疗，能同时抑制HIV复制过程的多个环节，可高效抑制HIV复制，最大限度降低耐药性，提高患者生活质量和存活率，显著降低母婴垂直传播的危险性等。关于抗病毒治疗的时机HAART联合方案应用所取得的疗效，重新唤起人们战胜获得性免疫缺陷综合征的信心。一度使许多医师认为越早治疗，效果越好。但是随着应用时间的延长，人们发现尽管联合治疗能够抑制血液中的病毒载量到测不到的水平，但是要清除淋巴细胞、巨噬细胞和神经组织内藏匿的病毒并不容易，可能要治疗几十年甚至终身服药。然而，服药期间，除了消化道反应和骨髓抑制等常见副作用以外，这些药物引起的其他严重的毒副作用，患者的依从性、顺应性比较差，加以HIV的抗药性越来越大，抗药性毒株的传播越来越严重等等，迫使医师慎重考虑治疗时机。目前主张①已发展至AIDS者，无论⑶4及病毒载量的值高低如何，都应进行治疗！②无症状者的，CD4〈200X106/L，虽然病毒载量测不出也应治疗；@CD4细胞 >200X 106/L，但〈350X 106/L，病毒载量不高，患者无症状，此时的治疗仍有争论；④无症状者的⑶4>350X 106/L，病毒载量>55000拷贝数，目前大多主张治疗；⑤无症状者的⑶4>350X 106/L，病毒载量〈55000拷贝数，现大多主张继续监控⑶4量；⑥间断治疗。

发明内容
发明目的本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种既可以在感染HIV后的窗口期防止AIDS的发病，又可以对已患AIDS的患者有治疗作用，防止复发，而且没有明显的毒副作用的抗HIV-I病毒的药物。技术方案本发明所述的乌司他丁作为制备抗HIV-I病毒药物的应用，乌司他丁的浓度为200 400ii g/ml o优选地，所述乌司他丁的浓度为400 ii g/ml，在该浓度下，可以对HIV-I病毒达到100%抑制率。优选地，所述乌司他丁的浓度为200 ii g/ml，在该浓度下，可以对HIV-I病毒达到99%抑制率，同时，对细胞的毒性作用更小，经济成本更低。所述药物中还包括可药用辅料。所述药物可以为冻干粉针剂，所述可药用辅料为甘露醇、乳糖、水解明胶、氯化钠或葡糖糖中的任意一种或几种。所述药物也可以为注射液，所述可药用辅料为注射用水、甘露醇、氯化钠或葡萄糖中的任意一种或几种。有益效果1、本发明药物可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已经发生的不同阶段，与已上市的药物相比毒副作用小；2、本发明药物，在乌司他丁的浓度为400 ii g/ml时，可以对HIV-I病毒达到100%抑制率，而且在细胞毒试验中，没有明显的细胞毒性作用；3、多年来，在使用本发明药物活性成分乌司他丁治疗急性胰腺炎的临床观察中未发现明显的毒副作用，因此是相对安全的。
具体实施例方式下面对本发明技术方案进行详细说明，但是本发明的保护范围不局限于所述实施例。 实施例本发明乌司他丁作为制备抗HIV-I病毒药物的应用，乌司他丁的浓度为200 400 u g/ml，浓度为400 u g/ml时可达到100%的抑制率。利用乌司他丁制备的抗HIV-I病毒药物，可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已经发生的不同阶段。窗口期给药量为乌司他丁 10万U，用5%葡萄糖注射液500ml溶解1-2次/日，静脉点滴。当进入AIDS病时期则与各种逆转录酶抑制剂联合应用。药物通常以静脉途径给药，主要剂型为冻干针剂或注射液剂。药物为冻干粉针剂时，可药用辅料为甘露醇、乳糖、水解明胶、氯化钠或葡糖糖中的任意一种或几种，在使用时可以溶解于灭水菌或各种其它注射用灭菌介质中。药物为注射液时，可药用辅料为注射用水、甘露醇、氯化钠或葡萄糖中的任意一种或几种。下面提供本发明抗艾滋病病毒的药效学研究试验
I、材料与药物
I. I药物乌司他丁用水充分溶解后，用透析袋透析后，用1640培育基稀释成不同浓度(乌司他丁药品由大连北方生物制品厂生产);
I.2试剂P24试剂盒购自美国Organon Teknika公司，MTT (Thiazoll blue)购自Sigma公司；
1.3细胞MT4细胞系采培养获得，培养基为RPMI-1640加10%胎牛血清，1%谷氨酰
胺，1%青链霉素；
1.4病毒HIV-I病毒德国株，中国预防医学科学院病毒所保存传代。2、实验方法
2.I对HIV-I急性感染的抑制试验
将HIV-I融化后稀释至I万TCID 50/ml,取Iml稀释后的病毒液加入离心后并弃上清的500万MT4细胞(1800转/分钟离心5分钟)，置37°C温箱中作用2小时。取出后离心，弃上清，用1640洗一次，用20%胎牛血清的培养基至50万细胞/ml，将配好的感染细胞和对应的不同浓度的乌司他丁加入培养板。置37°C，5% CO2孵箱中。48小时后换液，继续孵育48小时。取基上清用美国Organon Teknika公司P24抗原试验盒测定P24抗原。根据计算出各孔中病毒浓度，计算药物对病毒复制的抑制率。2.2 MTT细胞毒试验
将MT4细胞用含20%胎牛血清的培养基配至50万/ml，加100 ill配好的细胞和100 ill的乌司他丁入96孔培养板，37°C，5% CO2孵箱中培养6天，取出后每孔吸除150 上清，力口入新配的MTT (0. 25%)25iil，37°C下作用4小时，向每孔中加入100 ylDMSO充分溶解所形成的结晶，用BIO-RAD公司550型酶标仪读数(570nm)，计算细胞存活率。基计算方法为细胞抑制率=(细胞对照孔OD值一加药细胞孔OD值)+细胞对照孔OD值X 100%。3、结果
3.1抗HIV-I实验结果
权利要求
1.乌司他丁作为制备抗HIV-I病毒药物的应用，乌司他丁的浓度为200 400u g/ml。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于所述乌司他丁的浓度为400y g/ml。
3.根据权利要求I所述的应用，其特征在于所述乌司他丁的浓度为200y g/ml。
4.根据权利要求I所述的应用，其特征在于所述药物中还包括可药用辅料。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述药物为冻干粉针剂，所述可药用辅料为甘露醇、乳糖、水解明胶、氯化钠或葡糖糖中的任意一种或几种。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述药物为注射液，所述可药用辅料为注射用水、甘露醇、氯化钠或葡萄糖中的任意一种或几种。
全文摘要
本发明公开了一种乌司他丁作为制备抗HIV-1病毒药物的应用，乌司他丁的浓度为200～400μg/ml。本发明药物可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已经发生的不同阶段；本发明药物，在乌司他丁的浓度为400μg/ml时，可以对HIV-1病毒达到100%抑制率，而且在细胞毒试验中，没有明显的细胞毒性作用。
文档编号A61P31/18GK102614502SQ201210123158
公开日2012年8月1日 申请日期2012年4月25日 优先权日2012年4月25日
发明者徐宗昆 申请人:徐宗昆