专利名称：免疫球蛋白a分泌促进剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及可望具有对细菌和病毒等感染预防效果和过敏预防效果的IgA分泌促进剂，特别是可望具有在上呼吸道的IgA分泌促进效果的组合物。
背景技术：
在口腔、呼吸道、消化道等生物体内部与外界相连的表面上构筑有为了防止病毒和细菌等从外界侵入生物体内的被称为粘膜免疫的强有力的防御体系。在粘膜表面，从唾液腺和粘液腺等源源不断地分泌粘液，在对病毒和细菌的侵入进行物理防御的同时，通过粘液中存在的抗体、抗菌肽、酶等的作用，防御生物体受到外敌入侵。在所述防御体系中承担中心作用的是免疫球蛋白A (IgA)抗体，具有除去病毒和细菌等以及防止它们在粘膜表面粘附等的作用(非专利文献I)。 关于IgA抗体和感染症的关系，报道了在动物实验中使对于中耳炎的病因菌的特异性IgA抗体增加以及病因菌的感染被抑制的研究结果(非专利文献2)。此外，报道了如果将某种感冒的病因病毒的特异性IgA抗体经由鼻腔给药，病毒的感染被抑制的研究结果(非专利文献3)。此外，认为IgA抗体除了具有预防生物体受到细菌和病毒等的感染的作用之外，还能阻止诸如引起过敏反应的外来抗原从粘膜侵入生物体内(非专利文献4)。从以上的背景可知，如果能够促进IgA抗体的分泌，对于细菌和病毒等的感染症预防和过敏的预防是有效的。迄今为止已公开的具有IgA抗体的分泌促进作用的有各种乳酸菌和担子菌(专利文献I 4)、多糖类和低聚糖类(专利文献5 9、非专利文献5)，多数与肠内的IgA抗体产生有关，而与口腔、鼻腔和呼吸道等呼吸系统的器官的IgA分泌促进作用和感染抑制作用有关的仅是少数(专利文献2、专利文献10)。现有技术文献专利文献专利文献I :日本专利第2968374号公报专利文献2 :日本专利第3818319号公报专利文献3 :日本专利特开平11-92389号公报专利文献4:日本专利特开2005-97133号公报专利文献5 :日本专利第4162147号公报专利文献6:日本专利特开2001-64181号公报专利文献7:日本专利特开2003-201239号公报专利文献8:日本专利特开2006-70217号公报专利文献9:日本专利特开2006-213671号公报专利文献10:日本专利特开2009-161447号公报专利文献11:日本专利特开2002-370993号公报
非专利文献非专利文献IBrandtzaeg P. > International Journal of MedicalMicrobiology (《医学微生物学国际期刊》)、2003年、293卷、I号、3 15页、Role ofsecretory antibodies in the defence against infections (分泌抗体在防御感染中的作用).非专利文献2HotomiM.等、Vaccine (《疫苗》)、1998年、16卷、20号、1950 1956 页、Specific mucosal immunity and enhanced nasopharyngeal clearance ofnontypeable Haemophilus influenzae after intranasal immunization with outermembrane protein P6and cholera toxin (非典型流感嗜血杆菌在鼻内用外膜蛋白P6和霍乱毒素免疫后的特殊粘膜免疫和增强的鼻咽清洁)·非专利文献3Heikkinen T.等、Pediatric Infectious Disease Journal (《儿科感染病医学期刊》)、1998 年、17 卷、5 号、367 372 页、Intranasally administered immunoglobulin for the prevention of rhinitis in children (用于预防儿童鼻炎的鼻腔内给药免疫球蛋白).非专利文献4池泽善郎、低7·> X —食品0開発(《低能量食品的开发》)、V 一工 A (CMC)出版、41-49 页非专利文献5Scholtens P. A.等、Journal of Nutrition(《营养学杂志》)、2008年、138 卷、6 号、1141 1147 页、Fecal secretory immunoglobulin A is increased inhealthy infants who receive a formula with short—chain galacto-oligosaccharidesand long-chain fructo_oligosaccharides(粪便分泌免疫球蛋白A在服用短链半乳糖-低聚糖和长链果糖低聚糖处方的健康婴儿中被促进)·

发明内容
鉴于上述课题，本发明的目的在于提供不仅在肠内而且在口腔和呼吸道内也具有IgA分泌促进作用的医药组合物。发明人深入研究，结果发现，虞美人(t f Y '>)提取物具有IgA分泌促进作用，并由此完成了本发明。本发明的含有虞美人提取物的IgA分泌促进剂不仅具有肠内的IgA分泌促进效果，在口腔和呼吸道内也具有IgA分泌促进作用，因此，通过摄取所述IgA分泌促进剂，可以抑制病毒和细菌的感染，此外也能预防过敏的发生。
具体实施例方式本发明中具有IgA分泌促进作用的虞美人(学名Papaver rhoeas L.)是S粟科植物，别名为虞美人草。据称具有镇静、催眠、止痛作用等，用于止咳药和镇静剂。与含有草药的免疫赋活剂有关的专利(专利文献11)中，草药的例子仅记载了罂粟，但是缺乏发明的具体性，也没有关于IgA的记载。此外，本发明中使用的虞美人提取物可以使用水或水与亲水性有机溶剂的混合物提取虞美人的花、叶、茎，优选虞美人的花。提取方法和溶剂的种类没有特别限定。作为溶剂，除了水之外，可以使用乙醇、甲醇、丙醇、甘油、丙二醇等醇类，醚、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、己烷等有机溶剂，或它们的混合溶齐U。但出于安全性方面的考虑，理想的是使用乙醇或其混合溶液提取。作为获得提取物的提取条件，可以在高温、室温、低温的任一种温度下提取，优选在40 90°C提取O. 5 5小时左右。提取物可以以溶液的状态直接使用，也可以进一步过滤、蒸馏除去提取溶剂后，通过减压干燥或冷冻干燥制成粉末状，或浓缩后使用。此外，也可以使用通过有机溶剂分配、柱色谱法等将这些提取物分离纯化而得的制品。进而，也可以加入除臭、脱色等纯化处理。虞美人提取物的含量没有特别限定，优选相对于饮食物或制剂，换算成干燥重量含有O. 01重量％以上，更优选O. I 90重量％。虞美人提取物的摄取方法也没有特别限定，可以是口服摄取、通过舌下给药摄取、 通过鼻腔给药摄取、皮下或血管内等局部直接给药等所有公知的方法。含有本发明的虞美人提取物的医药组合物可以作为药品、医药部外品(准药物，介于药品和化妆品之间的一类)或饮食品等使用。为药品时，以口服制剂的形式给药。作为口服制剂的剂型，可例举片剂、胶囊剂、散齐U、糖浆剂、饮剂等。为医药部外品时，以片剂、胶囊剂、饮剂等剂型使用。为饮食品时，除了饮料等饮品和糖果、脆饼、饼干等食品以外，可例举烟草和口香糖等嗜好品、饲料和饲料类、漱口剂和牙膏等化妆品类等。这些只不过是例举，本发明可以用于任何物品。为药品或医药部外品时，可以含有药理学上可接受的一种或两种以上的载体，还可以根据需要含有其它用于治疗的有效成分。除此之外，还可以含有赋形剂、粘合剂、崩解齐 、润滑剂、分散剂、表面活性剂、增塑剂、混悬剂、乳化剂、稀释剂、缓冲剂、抗氧化剂、细菌抑制剂等。此外，饮食品也可以含有食品制造上可接受的基材、载体、赋形剂、添加剂、增量剂、着色剂、香料等。虞美人提取物以外的成分也不受上文的限定，本发明可以任意含有公知的任何成分。含有本发明的虞美人提取物的药品、医药部外品或饮食品等可以通过各技术领域内公知的任意方法制造。其制造过程中可以通过公知的任何方法添加虞美人提取物。本发明的含有虞美人提取物的医药组合物不仅可以对人使用，也可以对人以外的动物(以下简称为非人动物)使用。作为非人动物，可例举哺乳类、爬行类、两栖类、鱼类等人以外的动物。实施例以下利用实施例对本发明进行说明，但这些实施例不对本发明的范围造成任何限定。[实施例I]热水提取物的制备粉碎IOOg虞美人花后，加入相对于试样重量的10倍量的水，在70°C下提取2小时。过滤不溶物后，冷冻干燥提取液，得到热水提取物37. 5g。[实施例2]使用来自派尔集合淋巴结(^工 >板；Peyer’ s patch)的淋巴球细胞的IgA抗体产生促进作用的体外评价摘取小鼠(BALB/c系、雌、6周龄)的小肠,米集派尔集合淋巴结,浸溃于含有2%牛胎儿血清(FCS)的RPMI1620培养基。用剪刀剪断派尔集合淋巴结，用七> ^卜 >一于一(BD生物科技公司(BD Biosciences)制、孔径70 μ m)回收淋巴球细胞。离心分离回收的细胞悬浊液，吸去上清液后，加入完全培养基，将淋巴球细胞悬浊液的细胞浓度调整为4 X IO6细胞/毫升。完全培养基使用含有KFoFCSJOyM 2-巯基乙醇、ImM丙酮酸钠、100U/ml青霉素、100 μ g/ml链霉素的RPMI1620培养基。在96孔盘的各孔内各加入溶解了淋巴球细胞悬浊液和试样的培养基(试样调整为最终浓度IOOppnOO. 05ml，在37°C、5% CO2的条件下培养I周。回收培养液离心分离后，通过夹心ELISA法测定上清液中的总IgA抗体量。以不添加试样培养的对照的总IgA抗体量为1，以相对值算出添加试样培养时的总IgA抗体量。通过夹心ELISA法测定总IgA抗体量采用上述夹心ELISA法进行的测定按照如下顺序进行。
将Ιμ/ml的抗鼠源免疫球蛋白抗体溶液加入96孔ELISA板，各ΙΟΟμ 1，4°C下使其反应I晚，使抗体吸附在板上。从板上除去溶液，加入含有1%牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液(PBS)各180μ 1，在室温下培养I小时，阻断目的外蛋白质的非特异性吸附。用含有O. 05%吐温20的PBS (PBST)清洗各孔，然后加入试样溶液，在室温下培养2小时。用PBST清洗各孔，在各孔内加入过氧化酶结合抗鼠源IgA抗体各25ng，在室温下培养I小时，然后加入过氧化酶基质使其反应2分钟。加入0. 5N盐酸使反应停止,测定450nm处的吸光度。使用鼠源IgA抗体作为标准物质制作校准曲线，测定IgA抗体量。结果如表I所示，以IOOppm的浓度添加虞美人(花)热水提取物时培养基中IgA抗体量是什么都不添加时的2. 6倍。[表 I]
权利要求
1.一种IgA分泌促进剂，其特征在于，含有虞美人提取物。
2.一种医药组合物，其特征在于，含有换算成干燥重量为0. 01% 90%的权利要求I所述的IgA分泌促进剂。
3.如权利要求2所述的医药组合物，其特征在于，口服摄取。
4.如权利要求2所述的医药组合物，其特征在于，通过舌下给药摄取。
5.如权利要求2所述的医药组合物，其特征在于，通过鼻腔给药摄取。
6.一种食品，其特征在于，含有权利要求I所述的IgA分泌促进剂。
7.—种医药组合物，其特征在于，含有权利要求I所述的IgA分泌促进剂。
全文摘要
迄今已知的IgA抗体的分泌促进剂中大多数与肠内IgA抗体产生有关，而与口腔、鼻腔和呼吸道等呼吸系统的器官中的IgA分泌促进作用和感染抑制作用有关的仅有极少数。因此，本发明的目的是提供不仅在肠内而且在口腔和呼吸道等呼吸系统器官中也具有IgA分泌促进作用的医药组合物。含有虞美人(ヒナゲシ)提取物的IgA分泌促进剂不仅具有肠内的IgA分泌促进效果，在口腔和呼吸道内也具有IgA分泌促进作用，因此，通过摄取所述IgA分泌促进剂，可以抑制病毒和细菌的感染，此外也能预防过敏的发生。
文档编号A61P11/00GK102781457SQ20118001201
公开日2012年11月14日 申请日期2011年3月3日 优先权日2010年3月4日
发明者吉田圭司郎, 国泽纯, 志村进, 清野宏, 石塚智和 申请人:罗蒂株式会社