专利名称：厚壳贻贝脂溶性提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有抗炎症性肠病活性的厚壳贻贝脂溶性提取物及其制备方法，以及它在制备抗炎症性肠病药物或保健食品中的应用。

背景技术：
贻贝属软体动物门贻贝科，是我国传统的养殖贝类，具有生长快、繁殖力强、抗病能力和适应性强，易于人工养殖等特点。目前我国人工养殖的贝类主要有紫贻贝、翡翠贻贝和厚壳贻贝等。我国贻贝养殖产量极大，年产量达到56.83万吨，浙江省作为海洋大省贻贝资源尤其丰富，年产量达到4万吨。然而，贻贝在我国被认为是一种低值海产品，虽有极丰富的资源，但经济价值低，没有被充分利用，在我国贻贝主要是新鲜或粗加工后供民间食用，以活鲜品销售为主，销售范围狭窄，深加工率较低。
贻贝作为海洋生物中的重要一族，具有重要的药用价值，中国古代《本草拾遗》就记载贻贝“主虚赢劳损，因产瘦瘠，血气结积，腹冷，肠鸣，下痢腰痛，带下”。近现代医学研究也表明贻贝具有抗炎、抗癌、抗心血管疾病等作用。国外流行病学、动物和人体试验研究结果显示，新西兰翡翠贻贝脂溶性提取物具有显著的抗炎作用，对慢性关节炎，如风湿性关节炎、骨关节炎等具有很好的疗效。动物试验研究表明，新西兰翡翠贻贝的脂溶性提取物-Lyprinol具有显著的抗关节炎作用，其抗炎效果比治疗类风湿性关节炎的消炎痛强，比其它抗炎油(n-3多不饱和油)和抗关节炎油(夜来香油)对预防佐剂诱导的多发性关节炎肿胀强200倍以上。临床试验研究表明，新西兰翡翠贻贝脂溶性提取物对风湿性关节炎、骨关节炎以及骨质疏松引起的关节痛和关节肿胀都有很好的缓解和治疗作用。我国对贻贝的抗炎活性也有相关报道，袁高峰等对厚壳贻贝的抗炎活性进行了研究，结果显示经冷冻干燥和氯仿∶甲醇(2∶1，V∶V)溶液提取得到的厚壳贻贝脂溶性提取物具有与新西兰翡翠贻贝相似的抗多发性关节炎活性。
贻贝中的抗炎活性成分主要是不饱和脂肪酸，而不饱和脂肪酸特别是多不饱和脂肪酸很容易被氧化，因此在贻贝脂溶性提取物的制备过程中，如何最大限度的避免不饱和脂肪酸的氧化就成为最主要的技术关键。然而，目前对贻贝脂溶性物质的提取并没有充分考虑到这一点。


发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种厚壳贻贝脂溶性提取物及其制备方法，该厚壳贻贝脂溶性提取物具有抗炎症性肠病的作用，可以应用于制备各种类型的抗炎症性肠病药物或保健食品。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法，包括以下步骤 1)、厚壳贻贝预处理将厚壳贻贝清洗、去壳、留肉；然后在厚壳贻贝肉中加入酒石酸作为稳定剂，充分搅拌混匀，接着进行搅碎处理，得厚壳贻贝碎肉； 2)、冷冻干燥先将厚壳贻贝碎肉进行冷冻干燥；然后将所得的冻干厚壳贻贝肉在粉碎机中粉碎，得到厚壳贻贝肉冻干粉； 3)、超临界CO2萃取将厚壳贻贝肉冻干粉进行超临界CO2萃取，得到厚壳贻贝脂溶性提取物。
作为本发明的厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法的改进步骤1)的厚壳贻贝预处理在0～15℃的温度下进行；酒石酸与厚壳贻贝肉的重量比为1％～7％。
作为本发明的厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法的进一步改进步骤2)冷冻干燥的工艺条件为将厚壳贻贝碎肉平铺至厚度为3～15mm，冻结时间4～6h，冻结温度-20～-30℃，冷阱温度-40～-70℃；真空度10～50pa，冻干最终温度20～30℃，干燥时间15～24h。
作为本发明的厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法的进一步改进步骤3)的超临界CO2萃取为分离釜I的压力为7～8MPa，温度为60℃；分离釜II的压力为4～6MPa，温度为35℃；萃取釜压力为15～35MPa，温度为35～55℃；CO2流量为萃取釜容量的10～20倍/h；萃取时间为1～3h，每隔15～45min收集脂溶性提取物。
本发明还同时提供了按照上述方法制备的厚壳贻贝脂溶性提取物，其为含有多种不饱和脂肪酸的抗炎活性物质。
本发明还同时提供了厚壳贻贝脂溶性提取物在制备抗炎症性肠病药物或保健食品中的应用。
在本发明中，步骤1)所得的产物应该立刻进行步骤2)、或者快速冷冻于-20℃冷库中备用。
在本发明中，步骤1)的厚壳贻贝预处理优选温度为0～10℃；步骤2)冷冻干燥的优选工艺条件为物料厚度5-10mm，冻结时间5小时，冻结终点温度-25℃，冷阱温度-50～-60℃，真空度25～50pa，冻干最终温度25℃，干燥时间19h；步骤3)超临界CO2萃取的优选工艺条件为分离釜I的压力为7～8MPa，温度为60℃；分离釜II的压力为4～6MPa，温度为35℃；萃取釜压力为30MPa，温度为45℃；CO2流量为萃取釜容量的15倍/h；萃取时间为2h，每隔30min收集脂溶性提取物。
本发明的发明人对厚壳贻贝脂溶性提取物的制备进行了研究，从而开发了一种更具优势的制备方法。此外，尽管国内外对贻贝抗炎活性的研究都有相关报道，但仅仅是局限于其对抗关节炎活性方面的研究，而对其它抗炎活性方面的研究还没有报道。发明人对厚壳贻贝脂溶性提取物进行了抗炎症性肠病活性研究，发现用本发明的制备方法所得的厚壳贻贝脂溶性提取物具有很强的抗炎症性肠病活性。
厚壳贻贝肉经本发明的冷冻干燥和超临界CO2萃取所得的脂溶性提取物具有较强的抗炎症性肠病(IBD)活性。本发明所制备的脂溶性提取物是一种琥珀色透明的油状物，经气相色谱检测分析，其主要含有多种不饱和脂肪酸，其中多不饱和脂肪酸含量为40～50％，单不饱和脂肪酸的含量为15～20％。本发明提供的制备方法与传统的制备方法(文献上已报道的制备方法，如背景技术中所述)相比，具有无法比拟的优势，其所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物的多不饱和脂肪酸含量显著高于传统的制备方法。以春季厚壳贻贝为例，具体见表1。
表1本发明的制备方法与传统制备方法所得春季厚壳贻贝脂溶性提取物的多不饱和脂肪酸含量比较表 注MUFA＝单不饱和脂肪酸，PUFA＝多不饱和脂肪酸 表中所有数据的表达形式均为平均值±标准偏差(mean±SD)，同列数据后面的字母完全不同表示具有显著性差异(p＜0.05)，字母不完全相同或完全相同表示没有显著性差异(p＞0.05)。
本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物通过动物实验研究，发现其能减轻炎症性肠病症状，对炎症性肠病有一定的预防和治疗作用。本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物可以单独或者与其他活性成分结合使用，并制成预防和治疗炎症性肠病的保健食品或药品。本发明所制备的脂溶性提取物在制备保健食品或药品时，可以选择性的使用一些常用的赋形剂，并采用常规的制剂制备方法将其制成各种制剂，优选胶囊或滴丸。本发明所制备的脂溶性提取物采用口服的方式，作为药物时，建议服用量为成人每天100～600mg；作为保健食品时，建议服用量为成人每天100～200mg。
本发明与现有技术相比具有以下优点 (1)、本发明的整个制备过程能最大限度地避免不饱和脂肪酸的氧化，其所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物中不饱和脂肪酸的含量更高； (2)本发明的制备过程属于纯物理的过程，因此不会产生溶剂残留问题，安全性大大提高； (3)本发明的制备工艺简单，投资少，且适合于工业化生产； (4)本发明制备的厚壳贻贝脂溶性提取物具有更强的抗炎症性肠病活性。

具体实施例方式 结合实施例，对本发明作更加详细的描述。以下实施例，可选用春季厚壳贻贝。
实施例1、一种厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法，依次进行以下步骤 1)、厚壳贻贝预处理 收集100kg新鲜的厚壳贻贝，迅速将其清洗、去壳，得到35kg新鲜的厚壳贻贝肉；在上述厚壳贻贝肉中加入酒石酸作为稳定剂(添加量为每100g厚壳贻贝肉中加入4g酒石酸)，然后放入搅拌机中充分搅拌混匀；混匀后再放入绞肉机中搅碎，得到厚壳贻贝碎肉。
上述整个预处理过程均在0～10℃的温度下进行。
2)、冷冻干燥 可选用浙江三雄机械制造有限公司生产的FDG系列大型真空冷冻干燥设备，将上述全部的厚壳贻贝碎肉进行冷冻干燥，干燥工艺条件为将厚壳贻贝碎肉平铺至厚度5～10mm，冻结时间5h，冻结终点温度-25℃，冷阱温度-50～-60℃，真空度25～50pa，冻干最终温度25℃，干燥时间19h。经过冷冻干燥后共得到6kg冻干厚壳贻贝肉。将冻干厚壳贻贝肉放入粉碎机中粉碎并过筛(50目)，得到5.9kg厚壳贻贝冻干粉。
3)、超临界CO2萃取 选用萃取釜容积为20L的超临界CO2萃取设备(例如可选用江苏南通华安超临界萃取设备有限公司生产的HA121型超临界CO2萃取设备) 将厚壳贻贝冻干粉放入上述萃取釜容积为20L的超临界CO2萃取设备中进行超临界萃取，萃取工艺条件为分离釜I的压力为7～8MPa，温度为60℃；分离釜II的压力为4～6MPa，温度为35℃；萃取釜压力为30MPa，温度为45℃；CO2流量为300L/h；萃取时间为2h。
萃取过程中，每隔30min收集脂溶性提取物；萃取完毕后，共得到377g厚壳贻贝脂溶性提取物。
采用上述工艺制备的厚壳贻贝脂溶性提取物的得率为0.377％，经气相色谱检测分析，其主要含有多种不饱和脂肪酸，其中单不饱和脂肪酸的含量为18.89％，多不饱和脂肪酸含量为48.18％。
实施例2、一种厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法，依次进行以下步骤 1)、厚壳贻贝预处理 按照每100g厚壳贻贝肉中加入1g酒石酸的配比关系加入酒石酸作为稳定剂；其余同实施例1的步骤1)。
2)、冷冻干燥 将上述全部的厚壳贻贝碎肉进行冷冻干燥，干燥工艺条件为将厚壳贻贝碎肉平铺至厚度3～5mm，冻结时间4h，冻结终点温度-20℃，冷阱温度-40～-50℃，真空度30～50pa，冻干最终温度20℃，干燥时间15h。经过冷冻干燥后共得到5.6kg冻干厚壳贻贝肉。将冻干贻贝肉放入粉碎机中粉碎并过筛(50目)，得到5.55kg厚壳贻贝冻干粉。
3)、超临界CO2萃取 将厚壳贻贝冻干粉放入萃取釜容积为20L的超临界CO2萃取设备中进行超临界萃取，萃取工艺条件为分离釜I的压力为7～8MPa，温度为60℃；分离釜II的压力为4～6MPa，温度为35℃；萃取釜压力为15MPa，温度为35℃；CO2流量为200L/h；萃取时间为3h。
萃取过程中，每隔45min收集脂溶性提取物；萃取完毕后，共得到285g厚壳贻贝脂溶性提取物。
采用上述工艺制备的厚壳贻贝脂溶性提取物的得率为0.285％，经气相色谱检测分析，其主要含有多种不饱和脂肪酸，其中单不饱和脂肪酸的含量为16.63％，多不饱和脂肪酸含量为45.57％。
实施例3、一种厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法，依次进行以下步骤 1)、厚壳贻贝预处理 按照每100g厚壳贻贝肉中加入7g酒石酸的配比关系加入酒石酸作为稳定剂；其余同实施例1的步骤1)。
2)、冷冻干燥 将上述全部的厚壳贻贝碎肉进行冷冻干燥，干燥工艺条件为将厚壳贻贝碎肉平铺至厚度10～15mm，冻结时间6h，冻结终点温度-30℃，冷阱温度-60～-70℃，真空度10～30pa，冻干最终温度30℃，干燥时间24h。经过冷冻干燥后共得到7kg冻干厚壳贻贝肉。将冻干贻贝肉放入粉碎机中粉碎并过筛，得到6.6kg厚壳贻贝冻干粉。
3)、超临界CO2萃取 将厚壳贻贝冻干粉放入萃取釜容积为20L的超临界CO2萃取设备中进行超临界萃取，萃取工艺条件为分离釜I的压力为7.5MPa，温度为60℃；分离釜II的压力为5MPa，温度为35℃；萃取釜压力为35MPa，温度为55℃；CO2流量为400L/h；萃取时间为1h。
萃取过程中，每隔15min收集脂溶性提取物；萃取完毕后，共得到310g厚壳贻贝脂溶性提取物。
采用上述工艺制备的厚壳贻贝脂溶性提取物的得率为0.31％，经气相色谱检测分析，其主要含有多种不饱和脂肪酸，其中单不饱和脂肪酸的含量为18.65％，多不饱和脂肪酸含量为47.72％。
实施例4、厚壳贻贝软胶囊的制备 软胶囊囊皮液的制备软胶囊囊皮液的材料为明胶，甘油和水，它们的重量比例为10∶4∶9.8。具体制备过程为分别取100g明胶、40g甘油和98g水，在明胶中加入适量水使其吸水膨胀，另将甘油及余下的水置煮胶锅中加热至70℃，混合均匀，然后加入膨胀的明胶，搅拌、熔融、保温，真空抽气以除去气泡，并过滤，得软胶囊囊皮液。
软胶囊囊心液的制备取实施例1所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物500g，与1500g初榨橄榄油及2.5g维生素E充分搅拌混匀，得软胶囊囊心液。
软胶囊的制备将已制备好的软胶囊囊皮液和囊心液装入自动旋转轧囊机中，喷体温度控制在50-55℃，囊心液温度控制在25～30℃，压制出每粒含400mg药液的软胶囊，然后将软胶囊放在温度为35℃、相对湿度为30％的干燥箱中干燥6h左右，便得到厚壳贻贝软胶囊。此软胶囊每粒含100mg厚壳贻贝脂溶性提取物。
实验、厚壳贻贝脂溶性提取物抗小鼠炎症性肠病实验 1实验材料 本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物如实施例1所得； 传统方法制备的厚壳贻贝脂溶性提取物将新鲜的厚壳贻贝肉直接进行冷冻干燥并粉碎，然后以厚壳贻贝冻干粉为原料，采用溶剂提取法(氯仿∶甲醇＝2∶1，V∶V)过夜提取并浓缩，得到厚壳贻贝脂溶性提取物； 葡聚糖硫酸钠(DSS)美国Sigma公司； 大豆油益海嘉里投资有限公司。
2实验动物 6周龄C57BL/6雄性小鼠60只，由浙江大学动物中心提供。
3实验方法 3.1炎症性肠病小鼠模型的建立将分子量为5000的DSS溶于饮用水，配成2％的DSS溶液，让C57BL/6小鼠自由饮用7d，建立炎症性肠病小鼠模型。模型建立成功的标志为饮用2％的DSS溶液7d内，出现半稀便、腹泻、大便隐血(+)和肉眼血便中的任一症状。
3.2动物分组将60只6周龄C57BL/6雄性小鼠适应性饲养1周，然后随机分成6组，每组10只，其中一组为模型组，一组为大豆油对照组，一组为用传统方法制备的厚壳贻贝脂溶性提取物对照组，其余3组为本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物治疗组。
3.3给药方法自DSS溶液饮用前1周起至DSS溶液饮用结束止，连续14d，每天上午给小鼠灌胃一次，灌胃量为10mL/kg。其中，大豆油对照组小鼠用纯粹的大豆油进行灌胃；厚壳贻贝脂溶性提取物对照组小鼠用浓度为20mg/mL的传统方法制备的厚壳贻贝脂溶性提取物(以大豆油为溶剂)进行灌胃，相当于灌胃剂量为200mg/kg；厚壳贻贝脂溶性提取物治疗组分别用浓度为5mg/mL、10mg/mL和20mg/mL的本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物(以大豆油为溶剂)进行灌胃，相当于灌胃剂量为50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg；模型组在实验期间不进行灌胃处理。
3.4实验取材及标本制作 实验结束后，用引颈法处死所有小鼠。取出每只小鼠的整个结肠和直肠，称重，然后截取远端结肠(2cm)，沿肠系膜边缘纵行剖开，在解剖镜下观察结肠大体形态。每只小鼠于有炎症或溃疡处取组织标本(2mm×10mm)，10％甲醛溶液固定、常规石腊包埋、切片(4μm)，HE染色，显微镜下观察组织学改变。另取结肠的中间段(1.5cm)，迅速冷冻于液氮中用于髓过氧化物酶(MPO)测定。
3.5疾病观察与检测项目 3.5.1疾病活动指数(DAI)的评估 在给小鼠饮用DSS溶液以后，每日观察小鼠的体重、大便性状和隐血情况，按表2进行评分。将体重下降、大便性状和隐血情况的评分相加，得出每只小鼠的情况，以评估疾病活动情况。
表2、DAI评分标准 注正常大便成形大便；松散大便不黏附于肛门的糊状、半成形大便；稀便可黏附于肛门的稀水样便。
3.5.2结肠组织学损伤的评估 结肠组织学损伤通过观察结肠组织学病理的改变来进行评估，其评价方法按表3的评分标准进行。组织学损伤程度用炎症、病变深度、陷窝破坏评分与病变范围评分的和表示。
表3、结肠组织学损伤评分标准
3.5.3MPO活性检测 采用小鼠MPO检测试剂盒进行测定。
4数据处理与统计分析 所有实验数据均采用平均值±标准偏差(mean±SD)表示。所有数据的统计分析均在Microsoft Excel 2003和SPSS for Windows 16.0中进行。所有数据均进行单因素方差分析(One-wayANOVA)，并用Duncan比较各组数据间的差异，p＜0.05视为两组数据存在显著性差异。
5实验结果 5.1厚壳贻贝脂溶性提取物对炎症性肠病小鼠DAI的影响 不同组别炎症性肠病小鼠每日的DAI见表4。
表4、不同组别炎症性肠病小鼠每日DAI
注对照组1＝大豆油对照组； 对照组2＝灌胃剂量为200mg/kg的传统方法制备的厚壳贻贝脂溶性提取对照组； 治疗组1＝低剂量组，灌胃剂量为50mg/kg的本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物治疗组； 治疗组2＝中剂量组，灌胃剂量为100mg/kg的本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物治疗组； 治疗组3＝高剂量组，灌胃剂量为200mg/kg的本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物治疗组； 表中所有数据的表达形式均为平均值±标准偏差(mean±SD)，同列数据后面的字母完全不同表示具有显著性差异(p＜0.05)，字母不完全相同或完全相同表示没有显著性差异(p＞0.05)。
模型组小鼠在饮用DSS溶液2天内全部表现正常，到第3天，有2只小鼠出现体重下降和大便松散现象；到第4天和第5天，大部分小鼠均出现不同程度的体重下降和稀便现象，部分还出现大便隐血甚至肉眼血便；第6天以后，所有小鼠都出现较为严重的炎症性肠病症状，绝大部分小鼠的体重下降达到10％以上，并伴有明显的肉眼血便。从表4中可以看出，模型组小鼠的DAI从饮用DSS溶液第3天起，呈快速上升趋势，到第6天，DAI值上升到8.4，表明造模非常成功。
对照组1小鼠在饮用DSS溶液后，其炎症性肠病症状与模型组相似，每日的DAI(见表4)与模型组比较，没有显著性差异，表明大豆油对DAI没有影响。
对照组2小鼠在饮用DSS溶液后，其每日的DAI值(见表4)显著低于模型组和对照组1，表明传统方法所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物具有一定的抗炎症性肠病活性。
本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物治疗组小鼠在饮用DSS溶液3天内均没有出现炎症性肠病症状。其中治疗组1(低剂量组)部分小鼠在饮用DSS溶液第4天出现了不同程度的症状，并且在随后的3天内，症状逐渐加剧。从表4中得出，治疗组1小鼠在饮用DSS溶液第4天和第5天的DAI值显著低于模型组及对照组1，但是到第6、7天，其DAI值与模型组及对照组1没有显著性差异，表明低剂量的厚壳贻贝脂溶性提取物可以推迟炎症性肠病的发病时间，但对其治疗作用不明显；与对照组2相比，治疗组1的抗炎症性肠病效果较弱，其每日DAI都显著高于对照组2，表明本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物在低剂量(50mg/kg)的情况下，其抗炎症性肠病效果弱于剂量为200mg/kg的传统方法所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物。治疗组2(中剂量组)小鼠在饮用DSS溶液4天内都没有出现炎症性肠病症状，其DAI值均为0，到第5天，才发现有2只小鼠出现大便松散现象，在随后的2天内，疾病症状有所加剧，但不明显，其每日的DAI值都显著低于模型组和对照组，表明中剂量的厚壳贻贝脂溶性提取物对炎症性肠病有较强的治疗作用，能显著降低炎症性肠病小鼠的疾病活动指数；与对照组2相比，治疗组2的抗炎症性肠病效果相当，其每日DAI值与对照组2没有显著性差异，表明本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物在中剂量(100mg/kg)的情况下就具有与剂量为200mg/kg的传统方法所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物相同的抗炎症性肠病效果。治疗组3(高剂量组)小鼠在整个实验期间(除了最后1天)，几乎都没有出现炎症性肠病症状，其DAI值在饮用DSS溶液前6天都为0，第7天也只有0.9，表明高剂量的厚壳贻贝脂溶性提取物具有很强的抗炎症性肠病活性，对炎症性肠病有很好的预防和治疗效果；与对照组2相比，治疗组3的抗炎症性肠病效果更强，其每日DAI值显著低于对照组2，表明在相同剂量(200mg/kg)的情况下，本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物的抗炎症性肠病效果显著强于传统方法所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物。
5.2厚壳贻贝脂溶性提取物对炎症性肠病小鼠结肠组织学损伤的影响 不同组别炎症性肠病小鼠结肠组织学损伤评分见表5，从表中可以看出，模型组小鼠的结肠组织学损伤很严重，达到了11.4，对照组1小鼠(结肠组织学损伤评分为10.9)也较严重，并与模型组小鼠没有显著性差异。对照组2和所有治疗组小鼠虽有不同程度的结肠组织学损伤，但都低于模型组和对照组1，特别是对照组2、治疗组2和治疗组3，其结肠组织学损伤评分只有4.1、4.3和1.2，显著低于模型组和对照组1，表明传统方法制备的和本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物对炎症性肠病小鼠的结肠都有保护作用，但在相同剂量(200mg/kg)的情况下，本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物对炎症性肠病小鼠的结肠具有更强的保护作用。
表5、不同组别炎症性肠病小鼠结肠组织学损伤评分 注同表3。
5.3厚壳贻贝脂溶性提取物对炎症性肠病小鼠结肠和直肠的重量及结肠MPO活性的影响 不同组别炎症性肠病小鼠结肠和直肠的重量及结肠MPO活性见表5。由表5得，模型组和对照组小鼠的结肠及直肠重量没有显著性差异，但是治疗组小鼠的结肠及直肠重量显著低于模型组和对照组，且随着厚壳贻贝脂溶性提取物剂量的提高，治疗组小鼠的结肠和直肠重量都有下降趋势，表明本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物能减小炎症性肠病小鼠结肠和直肠的水肿、充血、炎性细胞浸润等病变；与传统方法所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物相比，其效果相当。从表中还可以看出，治疗组小鼠(除治疗组1)结肠MPO活性显著低于模型组和对照组，且其活性随着厚壳贻贝脂溶性提取物剂量的升高而降低，表明本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物具有降低炎症性肠病小鼠结肠MPO活性的效果。与传统方法所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物相比，其效果更强。
6结论 通过厚壳贻贝脂溶性提取物抗小鼠炎症性肠病实验，我们得出本发明所制备的厚壳贻贝脂溶性提取物具有较强的抗炎症性肠病活性，它能降低小鼠炎症性肠病的疾病活动指数，减少结肠的组织学损伤，阻止结肠和直肠的炎症性病变，同时还能抑制小鼠结肠的髓过氧化物酶活性；并且随着厚壳贻贝脂溶性提取物灌胃剂量的提高，其抗炎症性肠病活性不断增强。与传统方法制备的厚壳贻贝脂溶性提取物相比，其抗炎症性肠病活性更强。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
权利要求
1、一种厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法，其特征是包括以下步骤
1)、厚壳贻贝预处理将厚壳贻贝清洗、去壳、留肉；然后在厚壳贻贝肉中加入酒石酸作为稳定剂，充分搅拌混匀，接着进行搅碎处理，得厚壳贻贝碎肉；
2)、冷冻干燥先将厚壳贻贝碎肉进行冷冻干燥；然后将所得的冻干厚壳贻贝肉在粉碎机中粉碎，得到厚壳贻贝肉冻干粉；
3)、超临界CO2萃取将厚壳贻贝肉冻干粉进行超临界CO2萃取，得到厚壳贻贝脂溶性提取物。
2、根据权利要求1所述的厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法，其特征是整个步骤1)的厚壳贻贝预处理在0～15℃的温度下进行；酒石酸与厚壳贻贝肉的重量比为1％～7％。
3、根据权利要求2所述的厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法，其特征是所述步骤2)冷冻干燥的工艺条件为将厚壳贻贝碎肉平铺至厚度为3～15mm，冻结时间4～6h，冻结温度-20～-30℃，冷阱温度-40～-70℃；真空度10～50pa，冻干最终温度20～30℃，干燥时间15～24h。
4、根据权利要求3所述的厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法，其特征是所述步骤3)的超临界CO2萃取为分离釜I的压力为7～8MPa，温度为60℃；分离釜II的压力为4～6MPa，温度为35℃；萃取釜压力为15～35MPa，温度为35～55℃；CO2流量为萃取釜容量的10～20倍/h；萃取时间为1～3h，每隔15～45min收集脂溶性提取物。
5、如权利要求1～4中任意一种方法制备的厚壳贻贝脂溶性提取物，其特征是为含有多种不饱和脂肪酸的抗炎活性物质。
6、如权利要求5所述的厚壳贻贝脂溶性提取物在制备抗炎症性肠病药物或保健食品中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种厚壳贻贝脂溶性提取物的制备方法，包括以下步骤1)厚壳贻贝预处理；2)冷冻干燥先将厚壳贻贝碎肉进行冷冻干燥；然后将所得的冻干厚壳贻贝肉在粉碎机中粉碎；3)超临界CO2萃取将厚壳贻贝肉冻干粉进行超临界CO2萃取，得到厚壳贻贝脂溶性提取物。本发明还同时公开了按照上述方法制备而得的厚壳贻贝脂溶性提取物，为含有多种不饱和脂肪酸的抗炎活性物质；能用于制备抗炎症性肠病药物或保健食品。
文档编号A61P29/00GK101606951SQ20091010113
公开日2009年12月23日 申请日期2009年7月23日 优先权日2009年7月23日
发明者李归浦, 铎 李, 牟月军, 炯 励 申请人:浙江大学, 嵊泗县东海贻贝科技创新服务有限公司