专利名称：23-羟基白桦酸在制备治疗或预防艾滋病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及23-羟基白桦酸在制备治疗或预防艾滋病药物中的用途。
背景技术：
已有文献报道，白桦酸可选择性地杀灭人黑色素瘤细胞[Nature Medicine, 1995; 1 (10) : 1645-1651];白桦酸及某些衍生物的抗癌活性已经 通过用皮下植入小鼠肉瘤180细胞的裸鼠(JP 87， 301， 580)、其体外抑制 P338淋巴细胞白血病细胞的生长[PlantaMedica， 1988; 511-513]，特别 是通过抑制鸟氨酸脱羧酶发生作用(W0 95/04526)等得以证明。中国专利
(申请号为99813476.0)公开了新的白桦酸衍生物(对C-2， C-3， C_17， C-20 和/或C-29位进行结构修饰)对肿瘤细胞的抑制作用及其在治疗临床癌症中 的应用。Lee等(WO 95/04526)公开了白桦酸和二氢白桦酸酰基衍生物具有 明显的抗HIV活性。在对C厂0H、 d7-C00H和C2。-外亚甲基进行了结构修饰后， 发现白桦酸和二氢白桦酸衍生物对急性感染H9淋巴细胞具有抗HIV活性，其 EC5。值分别小于1.7Xl(T5uM。
23-羟基白桦酸为来源于中药白头翁(Pulsatilla chinensis)中的五 环三萜类化合物，是中药白头翁的特征性成分，文献[化学学报，1983; 41
(8): 739-745]中已经公开了该化合物的结构，其结构式为
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分子式为(:3晶804，类白色粉状物，分子量472，易溶于氯仿、乙酸乙酯、 乙醇等有机溶剂。
本研究小组以前曾报道了23-羟基白桦酸体外和体内抗黑色素瘤作用 [中国肿瘤临床与康复，2000; 7(1): 5-7]，并对人白血病细胞K-562和HL-60、 鳞癌HeLa细胞[Planta Medica， 2002:68:183-186; Life Science, 2002 ; 72:1-9]及对人胃癌细胞SGC-7901、人卵巢癌细胞Vo[东南大学学报(医学 报)，2001; 20 (3): 141-144]具有明显的抑制作用。但尚未见报道对其它 肿瘤细胞及爱滋病病毒的抑制活性。

发明内容
本发明的目的在于提供23-羟基白桦酸的新用途，即23-羟基白桦酸在
制备治疗或预防艾滋病药物中的应用。
所述治疗或预防艾滋病的药物是以23-羟基白桦酸作为活性成分的药物
组合物。
本发明23-羟基白桦酸可作为活性成分与药学上可接受的赋型剂一起用 于制备药物组合物，该药物组合物可以采用本领域的常规方法制备成各种剂 型，如胶囊、丸剂、片剂、口服液、颗粒剂、酊剂等口服给药的剂型和注射 液等口服以外给药剂型，如针剂等。根据剂型的不同，该药物组合物使用的 赋型剂也不同，常用赋型剂包括稀释剂、湿润剂、润滑剂、填充剂、防腐剂 等。其中稀释剂为乳糖、淀粉、糊精、微晶纤维素、微粉硅胶等，湿润剂为 水和50 85%不同浓度的乙醇。含有本发明23-羟基白桦酸的药物组合物的 优选剂型是口服剂，最好为胶囊。给药剂量为20 400mg/人/次，每天1 3 次。
本发明涉及的23-羟基白桦酸是这样得到的将白头翁根粗粉用15 95
%的乙醇渗漉或回流提取，过滤，滤液回收至无醇味，然后再加水稀释，过 滤，滤液加入盐酸或硫酸调至pH1 3，加热回流10分钟 2小时，得沉淀物， 放冷，抽滤或过滤，水洗固体物至中型，低温烘干，得粗品。粗品用乙酸乙
酯等有机溶剂进行索氏提取，回收提取液至适量，放置，得类白色粉状的23-
羟基白桦酸。
为了验证本发明的有益效果，发明人作了一系列实验 动物急性毒性试验
(1) 口服给药
健康雄性小鼠，体重18 25克，用23-羟基白桦酸水溶液(混悬)灌胃 5.0g/kg，连续一周，未见小鼠死亡。
(2) 注射给药
健康雄性小鼠，体重18 25克，用23-羟基白桦酸水溶液进行腹腔注射， 连续一周，观察动物死亡情况。23-羟基白桦酸的LD50值为2. 13±0.65g/kg。 2、 23-羟基白桦酸对HIV病毒的抑制作用
将H9T淋巴细胞株在含有10X小牛血清的培养基中，在5%0)2、 37。C的 条件下连续培养。试验样品溶解于二甲亚砜中，配制成200、40、8和1. 6 Pg/ml 的不同浓度。取部分H9T淋巴细胞用爱滋病毒(HIV-1)进行感染，达到104 感染单位/ml.另取等量的H9T淋巴细胞加入等量的培养基，测定细胞毒活性 (IC5。)。然后置于37'C和5^C0冲培养4小时，取出，分别洗涤3次，分别加 入24孔的平板上，加入不同浓度的试验液，阴性对照组加入等量的培养液， 以AZT作阳性对照。然后把平板置于37匸和5%(]02中培养4天。收集去除细胞 后的上清夜作P24抗原检测，通过测定HIV的壳蛋白的数量直接测定HIV的存 在，计算ECs。值。经上述方法测定，23-羟基白桦酸的IC5。值为152^g/ml， EC5。 值为2.24 Pg/ml，治疗指数TL (IC5。/EC5。)为67. 8。
从以上结果，可以得出本发明的优点在于
(1) 、本发明对已知化合物23-羟基白桦酸发掘了新的医疗用途，开拓 了一个新的应用领域。
(2) 、本发明的23-羟基白桦酸安全无毒，药理作用强，预示着良好的
药用前景。
(3)、本发明的物质原料中药白头翁资源丰富、价廉，制备工艺简单。 下面将描述本发明的实施例，但本发明的内容完全部局限于此。
具体实施例方式
实施例l:称取白头翁根干燥粗粉1.0kg，用3000ml的15X乙醇渗漉，合 并乙醇渗漉液，减压回收至无醇味，过滤，滤液用盐酸调至pH2，加热30分 钟，得沉淀物，放冷，过滤，水洗，干燥，得粗品。粗品用乙酸乙酯索氏回 流，回流液浓縮至适量，放置，抽滤，得23-羟基白桦酸38.2g。
实施例2:称取白头翁根干燥粗粉1.0kg，用3000ml的60X乙醇渗漉，合 并乙醇渗漉液，减压回收至无醇味，过滤，滤液用盐酸调至pH2，加热30分 钟，得沉淀物，放冷，过滤，水洗，干燥，得粗品。粗品用乙酸乙酯索氏回 流，回流液浓縮至适量，放置，抽滤，得23-羟基白桦酸51.0g。
实施例3:称取白头翁根干燥粗粉1.0kg，用3000ml的95X乙醇渗漉，合 并提取液，减压回收至无醇味，过滤，滤液用盐酸调至pH2，加热30分钟， 得沉淀物，放冷，过滤，水洗，干燥，得粗品。粗品用乙酸乙酯索氏回流， 回流液浓縮至适量，放置，抽滤，得23-羟基白桦酸45.6g。
实施例4:取本发明的23-羟基白桦酸20mg和微粉硅胶280mg，充分混合
均匀，过筛，加入适量的硬脂酸镁，混匀，用干法造粒机制粒，过筛，筛取 40-80目之间的颗粒，装入胶囊，每粒装0.3g。
实施例5:按照实施例4所述方法制备胶囊，不同的是使用400mg本发明 的23-羟基白桦酸、100mg微粉硅胶和适量的硬脂酸镁，每粒胶囊装0.5g。
实施例6:按本技术领域技术人员公知的方法制备23-羟基白桦酸的片 剂，其中所述片剂按实际需要制成含20-200mg的23-羟基白桦酸。取本发明 的23-羟基白桦酸150g、微粉硅胶420g、无水乳糖380g、氧化硅30g，混合30 分钟后，再筛入200g硬脂酸镁，继续混匀，最后用12/32英寸标准凹冲压成 片。
权利要求
1、23-羟基白桦酸在制备治疗或预防艾滋病药物中的应用。
2、 根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述治疗或预防艾滋病的药物是以23-羟基白桦酸作为活性成分的药物组合物。
3、 根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述23-羟基白桦酸作 为活性成分与药学上可接受的赋型剂一起用于制备所述药物组合物，该药物 组合物采用本领域的常规方法制备成口服给药的剂型或口服以外给药剂型。
4、 根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述赋型剂包括稀释剂、湿润剂、润滑剂、填充剂及防腐剂。
5、 根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述稀释剂为乳糖、淀粉、糊精、微晶纤维素或微粉硅胶，湿润剂为水或体积浓度为50 85%的 乙醇。
6、 根据权利要求3所述的应用，其特征在于该药物组合物制成胶囊 或片剂。
全文摘要
本发明公开了23-羟基白桦酸的新用途，即23-羟基白桦酸在制备治疗或预防艾滋病药物中的应用。所述治疗或预防艾滋病的药物是以23-羟基白桦酸作为活性成分的药物组合物。23-羟基白桦酸安全无毒，药理作用强，预示着良好的药用前景，原料中药白头翁资源丰富、价廉，制备工艺简单。
文档编号A61K9/20GK101103987SQ200710130740
公开日2008年1月16日 申请日期2003年9月2日 优先权日2003年9月2日
发明者叶文才, 范春林, 赵守训 申请人:叶文才