专利名称：：25－亚甲基和24,25－环氧马可福胺和帕拉郝金胺的制作方法
技术领域：
：本发明涉及适用作抗寄生物剂的(取代的)25-亚甲基和24,25-环氧马可福胺(marcfortines)和帕拉郝金胺(paraherquamides)。马可福胺是已知化合物，见“化学学会化学通讯杂志”(JournaloftheChemicalSocietyChemicalCommunications),601-602(1980)关于马可福胺A以及“四面体通讯”(TetrahedronLetters),22,1977-1980(1981)关于马可福胺B和C。这些化合物是真菌娄地青霉(Penicilliumroqueforti)的代谢产物。马可福胺在结构上与也是已知化合物的帕拉郝金胺相关。帕拉郝金胺被公开于“四面体通讯”，22,135-136(1981)，以及“抗生素杂志”(JournalofAntibiotics),44,492-497(1991)中。美国专利4,866,060和4,923,867公开了马可福胺A、B和C及其某些衍生物在治疗和预防动物寄生虫病方面的应用。WO92/22555(1992年12月23日公开的)一般性地描述了一种马可福胺或帕拉郝金胺衍生物(即在位置14上用甲基或者甲基和羟基取代的部分的式(Ⅲ))，但是未描述如何制备这种14-甲基-14-羟基马可福胺化合物。“抗生素杂志”，43,1380-1386(1990)公开了具有如下结构的帕拉郝金胺A马可福胺A具有如下结构马可福胺B具有如下结构马可福胺C具有如下结构马可福胺D具有如下结构WO91/09961(1991年7月11日公开的)公开了马可福胺和帕拉郝金胺的各种衍生物，及其12a-N-氧化物，以及尤其从青霉属菌种(PenicilliumSp.)IMI332995生产VM29919(帕拉郝金胺)和VM55596(帕拉郝金胺的12a-N-氧化物)的生产方法。美国专利4,873,247公开了帕拉郝金胺的衍生物和生产帕拉郝金胺的菌株查尔斯青霉(Penicilliumcharlessi)MF5123(ATCC20841)。美国专利4,978,656(以及EP390532-A、EP-301742-A)公开了各种合成的帕拉郝金胺衍生物以及从查尔斯青霉MF5123(ATCC20841)生产帕拉郝金胺的方法。国际公开WO92/22555(1992年12月23日公开的)一般性地公开了14α-羟基马可福胺化合物以及应用14-羟基-14-甲基马可福胺化合物生产抗寄生虫药物的方法。但是，未描述制备14α-羟基马可福胺或14α-羟基-14β-甲基马可福胺化合物的任何方法。国际公开WO94/29319公开了各种14-取代的马可福胺及其衍生物。15-烷基-14-羟基化合物(Ⅲ)(其中n1是0)是已知化合物，见国际公开WO94/29319。本发明公开了式(Ⅶ)的25-亚甲基化合物，其中关于(Ⅰ)马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-H，且R14β是-H，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅱ)帕拉郝金胺A(a)n是0，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-CH3，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅲ)14-羟基-14-烷基马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是C1-C4烷基，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅳ)14-羟基-15-甲基马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-H，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是C1-C4烷基，且R15β是-H及其药物上可接受的盐。还公开了式(Ⅷ)的24,25-环氧化合物，其中关于(Ⅰ)马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-H，且R14β是-H，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅱ)帕拉郝金胺A(a)n是0，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-CH3，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅲ)14-羟基-14-烷基马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是C1-C4烷基，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅳ)14-羟基-15-甲基马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-H，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是C1-C4烷基，且R15β是-H及其药物上可接受的盐。公开了N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A及其药物上可接受的盐。本发明涉及25-亚甲基(Ⅶ)和24，25-环氧(Ⅷ)马可福胺和帕拉郝金胺。这些化合物是从已知化合物通过两种不同反应制备的。25-亚甲基马可福胺和帕拉郝金胺(Ⅶ)是从已知的相应环烯(Ⅰ)制备的。当(a)n是1,(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-H，且R14β是-H以及(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H时，则起始环烯(Ⅰ)是马可福胺A；当(a)n是0，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-CH3以及(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且15β是-H时，则起始环烯(Ⅰ)是帕拉郝金胺A；当(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-CH3以及(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H时，则起始环烯(Ⅰ)是14-羟基-14-甲基马可福胺A；当(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-H以及(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-CH3，且R15β是-H时，则起始环烯(Ⅰ)是14-羟基-15-甲基马可福胺A。马可福胺A和帕拉郝金胺A都是人们熟知的化合物。化合物14-羟基-14-烷基马可福胺A和14-羟基-15-烷基马可福胺A是通过表A和B和制备例1-31中给出的方法制备的。“表”和“制备例”例举甲基作为烷基取代基，但本领域技术人员知道可按类似方式制备乙基、丙基和丁基(如果存在的话还包括其异构体)。25-亚甲基化合物(Ⅶ)是这样从相应的环烯(Ⅰ)制备的首先应用试剂(如甲酸)把含该烯的七元环醚裂解生产二醇(Ⅱ)。再用烷基化剂使该二醇(Ⅱ)烷基化而生成相应的烯(Ⅲ)。烯(Ⅲ)在特定的位置必须具有双键以制备所需的产物，即当环化和氧化后，该产物将在C-25上具有一个羟基。这种试剂包括式X1-CH2-CH=C(CH3)2的化合物，其中X1是离去基团，如-Br或-Cl；优选X1是-Br，更优选该试剂是4-溴-2-甲基-2-丁烯。在碘化钾和弱碱如碳酸氢盐或碳酸盐(优选是碳酸钾)存在下，在水-有机溶剂混合物(优选是丙酮/水)中进行该反应。然后应用过酸(优选用间-氯过苯甲酸)将该烯(Ⅲ)氧化成相应的环氧酚(Ⅳ)，接着用亚硫酸氢钠处理。再应用氯化锡(Ⅳ)将该环氧酚(Ⅳ)环化成相应的环醇(Ⅴ)。然后在Swern条件(草酰氯，DMSO，接着用TEA处理)下将该环醇(Ⅴ)氧化成相应的酮(Ⅵ)。再通过Wittig反应应用甲基三苯基溴化鏻和强碱(如正丁基锂)将该酮(Ⅵ)转变成所需的25-亚甲基化合物(Ⅶ)。了解到该25-亚甲基化合物(Ⅶ)是24,25-二氢化合物。24,25-环氧化合物(Ⅷ)是这样制备的用过酸在过酸氧化至环氧化物的常规条件下氧化相应的环烯(Ⅰ)，接着用亚硫酸氢钠水溶液处理。优选该过酸是间-氯过苯甲酸。N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A也被称为(1′α,5′αβ,7′β,8＇αβ,9′+β)-(-)-2,2′,3,3′,8a′,9′-六氢-1′-羟基-1′,4,4,8′,8′-五甲基-螺[4H,8H,-[1,4]二氧(dioxepino)[2,3-g]吲哚-8,7′(8′H)-[5H,6H-5a,9a](亚氨基亚甲基)[1H]环戊[f]中氮茚]-9-酮]。N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A可通过两种不同方法制备，见实施例14和15。25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A都是胺，所以当它们与足够强度的酸反应时形成酸加合盐。药物上可接受的盐包括无机酸和有机酸的盐。药物上可接受的盐比相应的游离胺更优选，因为它们产生的化合物水溶性更大，更易结晶。优选的药物上可接受的盐包括下列酸的盐，即甲磺酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、富马酸、马来酸、CH3-(CH2)n-COOH(其中n是0～4),HOOC-(CH2)n-COOH(其中n同上述定义)。意外地发现本发明的25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A是抗内寄生物和外寄生物，尤其是抗蠕虫和节肢动物的有效抗寄生物剂，所述寄生物引起人、动物和植物的多种寄生物病。寄生物病可通过内寄生物或外寄生物而引起。内寄生物是这种寄生物，即它们生存在宿主体内，或者在器官(如胃、肺、心脏、肠等)内或者只是在皮下。外寄生物是生存在宿主外表面但仍从宿主吸收营养物质的寄生物。内寄生物病一般称为蠕虫病，是由于被称为蠕虫的寄生虫感染宿主而引起的。蠕虫病是盛行的严重的世界性经济问题，它是由于驯化动物(如猪、绵羊、马、牛、山羊、狗、猫和家禽)的感染造成的。这些感染有很多是由被称为线虫的虫引起的，该线虫引起世界上多种动物的疾病。这类疾病通常很严重，可导致受感染动物死亡。感染前面提到的动物的最常见线虫属是血矛线虫属(Haemonchus)、毛圆线虫属(Trichostrongylus)、胃线虫属(Ostertagia)、细颈线虫属(Nematodirus)、古柏线虫属(Cooperia)、蛔虫(Ascaris)、仰口线虫属(Bunostomum)、结节线虫属(Oesophagostomum)、夏氏线虫属(Chabertia)、鞭虫属(Trichuris)、圆线虫(Strongylus)、毛线虫(Trichonema)、网尾线虫属(Dictyocaulus)、毛细线虫属(Capillaria)、异刺线虫属(Heterakis)、弓蛔虫属(Toxocara)、鸡蛔虫属(Ascaridia)、尖尾线虫属(Oxyuris)、钩口线虫属(Ancylostoma)、钩虫属(Uncinaria)、弓蛔线虫属(Toxascaris)、和副蛔虫属(Parascaris)。很多寄生物是物种专一性的(只感染一种宿主)，而大多数也在动物内有优选的感染部位。于是血矛线虫属和胃线虫属主要感染胃，而细颈线虫属和古柏线虫属则通常侵袭肠。其它寄生物有些喜欢寄生在心、眼、肺、血管等中，而另一些则是皮下寄生物。蠕虫病可导致虚弱、减重、贫血、肠损伤、营养不良和对其它器官的损伤。如果不医治这些疾病就会导致动物死亡。外寄生节肢动物(如蜱(ticks)、螨(mites)、虱(lice)、厩螫蝇(stableflies)、角蝇(hornflies)、丽蝇(blowflies)、蚤(fleas)等)的感染也是严重的问题。这些寄生物的感染导致失血、皮肤损伤，且能干扰正常的饮食习惯而导致减重。这些感染也可导致传播严重疾病(如脑炎、无形体病、猪痘等)，这类疾病会是致命性的。动物可能同时受数种寄生物感染，因为一种寄生物会使动物变虚弱，于是使它更易受第二种寄生物感染。所以具有广谱活性的化合物在这类疾病的治疗中特别有益。该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A意外地具有抗这些寄生物的高活性，此外，还具有抗下列寄生物的活性，即狗中的恶丝虫属(Dirofilaria)，啮齿动物中的Nematospiroides和管状线虫属(Syphacia)，牛中的叮咬昆虫和迁徙双翅目幼虫(如皮下蝇属的种(Hypodermasp.))，以及马中的胃蝇属(Gastrophilus)。该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A还适合抗引起人寄生物病的内寄生物和外寄生物。这类感染人的内寄生物实例包括下列属的胃肠寄生物钩口线虫属、板口线虫属(Necator)、蛔虫、类圆线虫属(Strongyloides)、毛线虫属(Trichinella)、毛细线虫属、鞭虫属、蛲虫属(Enterobius)等。感染人的其它内寄生物见于血液或其它器官中。这类寄生物的实例有丝虫吴策线虫属(Wucheria)、布鲁格氏丝虫属(Brugia)、盘尾丝虫属(Onchocerca)等，以及肠蠕虫圆线虫(Strongylides)和毛线虫属的肠外期。寄生于人的外寄生物包括节肢动物，如蜱、蚤、螨、虱等，而且对于驯化动物来说，这些寄生物的感染能导致传播严重疾病和甚至致命的疾病。该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A都有效地抗这些内寄生物和外寄生物，此外还有效地抗烦扰人的叮咬昆虫和其它双翅目害虫。该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A在被口服或非肠道施用时的剂量率为0.05～20mg/Kg动物体重。该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A还适用于抗家庭害虫，如蠊属(Blatellasp.)(蟑螂)、衣蛾属(Tineolasp.)(衣蛾)、毛蠹属(Attagenussp.)(皮蠹)、家蝇(Muscadomestica)和抗红外来火蚁(Solenopsisinvicta)(里氏火蚁)。该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A还适用于抗农业害虫，例如蚜虫(无网长管蚜属(Acyrthiosiphonsp.))、蝗虫和棉象虫，以及抗侵袭储藏谷物的虫害，例如拟谷盗属(Triboliumsp.)，也抗生活在植物组织中未成熟阶段的昆虫。该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A还适用作控制可能是农业上重要的土壤线虫的杀线虫剂。用作动物中的抗寄生物剂时，该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A可通过经口或通过注射体内施用，或者作为液体灌药或者作为洗发剂而局部施用。至于口服，该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A可呈胶囊、片剂或灌服大丸的形式施用，或者可与动物饲料混合施用。该胶囊、片剂和灌服大丸包括活性成分，结合适当载体，如淀粉、滑石、硬脂酸镁或磷酸二钙。这些单位剂量形式是这样制备的，即通过将活性成分与合适的细粉状惰性组分(包括稀释剂、填料、崩解剂、悬浮剂和／或粘合剂)紧密混合，于是得均匀混合溶液或悬浮液。惰性组分是这样的物质，即不与该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A反应，且对受治疗的动物无毒。合适的惰性组分包括淀粉、乳糖、滑石、硬脂酸镁、植物胶和油等。这些制剂可含很宽可变量的活性组分和非活性组分，这取决于多种因素，例如待治疗动物的大小和类别，感染的类别和严重性。活性组分也可作为饲料添加剂施用，只需简单地将该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A与饲料混合或者将该化合物施到饲料表面。也可将活性组分与惰性载体混合，再将所得组合物与饲料混合或直接喂给动物。合适的惰性载体包括玉米粉、柑桔渣、发酵渣、大豆渣、干谷物等。将活性组分与这些惰性载体通过碾碎、搅拌、磨粉或滚转而紧密地混合，使得最终组合物含0.001～5.0wt％活性组分。25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A也可被非肠道施用，即通过注射由溶于惰性液体载体的活性组分构成的制剂。可通过肌内、管腔内、气管内或皮下注射。注射性制剂由活性组分与合适的惰性液体载体混合而成。可接受的液体载体包括植物油，如花生油、棉子油、麻油等，以及有机溶剂，如溶胶缩酮、甘油缩甲醛等。还可应用含水的非肠道制剂。植物油是优选的液体载体。该制剂是通过将活性组分溶于或悬浮于液体载体制备的，使最终组合物含0.005～20wt％活性组分。可局部施用该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24，25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A，即通过应用呈水溶液或悬浮液的、含该25-亚甲基化合物(Ⅵ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A的灌服液或洗发剂。这些制剂通常含悬浮剂如皂土，且一般还包含消泡剂。含0.005～20wt％活性组分的制剂是可接受的。优选的制剂含0.5～5wt％25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A。该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A主要适用作抗寄生物剂用于治疗和/或预防驯化动物(如牛、绵羊、马、狗、猫、山羊、猪和家禽)的蠕虫病。它们还适用于预防和治疗这些动物被外寄生物(如蜱、螨、虱、蚤等)的寄生物感染。它们还可有效治疗人的寄生物感染。在治疗这样的感染时，该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A可单独用或相互组合用或与其它不相关的抗寄生物剂组合用。达最佳效果所需的该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A的剂量依赖于数个因素，例如动物的类别和大小，感染的类别和严重性，施用的方法和应用的具体25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A。以单次剂量或间隔数天数次剂量的方式在0.005～50mg/kg动物体重的剂量下口服该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A通常给出良好结果。该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A之一的单次剂量通常给出良好的控制效果，但可以给出重复剂量以抗再感染或者抗异常持久的寄生物。给动物施用该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A的方法是兽医领域中技术人员已知的。该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A还可用于抗侵袭田间的或储藏的作物的农业害虫。在这类应用中，将该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A用作喷雾液、粉剂、乳剂等用于生长中的植物或收获了的作物。以该方式施用25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A的方法是农业领域中技术人员已知的。施用的准确剂量和次数取决于应用的具体25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A，受治疗的具体病况，受治疗病况的严重性，具体患者的年龄、体重、综合身体状况，可对个体采取的其它药疗法是本领域技术人员熟知的，并且可通过测定血液量或患者血液中该25-亚甲基化合物(Ⅶ)、24,25-环氧化合物(Ⅷ)和N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A的浓度和/患者对受治疗具体病况的响应而更准确地测定。下列定义和解释是针对包括说明书和权利要求的整个文本应用的术语。Ⅰ．对式子的规定和对变量的定义表示说明书和权利要求书中各化合物或分子片段的化学式除了表达规定的结构特征外还可包括可变的取代基。这些可变的取代基通过字母或带数字下标的字母区别，例如“Z1”或“Ri”，其中“i”是整数。这些可变取代基可以是单价或二价的，即它们表示通过一个或两个化学键与式连接的基团。例如，基团Z1如果与式CH3-C(=Z1-)H连接就表示二价可变基。基团Ri和Ri如果与式CH3-CH2-C(Ri)(Ri)-H连接就表示一价可变取代基。如果化学式以线型画出，如上述式子，含于括号内的可变取代基直接连接在包括于括号内的可变取代基紧邻左边的原子上。当两个或多个连续的可变取代基包括于括号内时，连续可变取代基中每一个都与未包括于括号内的紧邻左边前一个原子连接。所以，在上式中，Ri和Ri都与前一个碳原子连接。还有，对于有确定的碳原子编号体系的任何分子来说，例如甾族化合物，这些碳原子被标明为Ci，其中“i”是相应于碳原子号的整数。例如C6表示6号位置或甾族化学领域中技术人员习惯规定的甾核中的碳原子号。同样，术语“R6”表示C6位置上的可变取代基(单价或二价)。以线型画出的化学式或其部分表示线型链中的原子。符号“-”通常表示链中两原子间的键。所以CH3-O-CH2-CH(Ri)-CH3表示2-取代的-1-甲氧基丙烷化合物。以同样方式，符号“=”表示双键，例如CH2=C(Ri)-O-CH3，而符号“≡”则表示叁键，如HC≡C-CH(Ri)-CH2-CH3。羰基以如下两种方式之任一种表示-CO-或-C(=O)-，前一种因简单而被优选。环状化合物或分子片段的化学式可以线型表示。这样，化合物4-氯-2-甲基吡啶可以线型N*=C(CH3)-CH=CCl-CH=C*H表示，按惯例标有星号(*)的原子相互结合而形成环。同样，环状分子片段4-(乙基)-1-哌嗪基可以-N*-(CH2)2-N(C2H5)-CH2-C*H2表示。本文任意化合物的刚性环状结构规定了该刚性环状化合物的各碳原子连接的取代基关于环平面的取向。至于有两个取代基连在属于环状系统部分的一个碳原子上的饱和化合物，-C(X1)(X2)-两个取代基相对于环可呈直立或平伏位置，且可在直立/平伏之间变换。不过，两个取代基相对于环和相互间的位置保持固定。虽然任一取代基有时可能位于环平面中(平伏)而不是在平面的上方或下方(直立)，但一个取代基总是在另一个上方。在描绘这种化合物的化学结构式中，位于另一取代基(X2)“下方”的一个取代基(X1)被定义为α构型，由虚线、短划线或点划线连在碳原子上，即由符号“---”或“…”表示。连接在另一取代基(X1)“上方”的相应取代基(X2)被定义为β构型，由连在该碳原子上的实线表示。当可变取代基是二价时，价键可以一起或独立地或者都有地定义该可变基。例如，连在一个碳原子上的可变基Ri如-C(=Ri)-可能是二价的，并可定义为氧代或酮基(于是形成羰基(-CO-))，或定义为两个独立连接的一价可变取代基α-Ri-j和β-Ri-k。当二价可变基Ri被定义为包括两个一价可变取代基时，用于定义该二价可变基的常规形式是“α-Ri-j:β-Ri-k”或其某种变体。在这种情况下，α-Ri-j和β-Ri-k都连在该碳原子上形成-C(α-Ri-j)(β-Ri-k)-。例如，当二价可变基R6,-C(=R6)-被定义为包括两个一价可变取代基时，该两个一价可变取代基是α-R6-1:β-R6-2,…α-R6-9:β-R6-10等，给出-C(α-R6-1)(β-R6-2)-,…-C(α-R6-9)(β-R6-10)-等。同样，至于二价可变基R11,-C(=R11)-，两个一价可变取代基是α-R11-1:β-R11-2。至于不存在独立的α和β取向的环形取代基(例如由于环上存在碳碳双键)，以及至于连接在不属于环部分的碳原子上的取代基，仍应用上述规定，但省去α和β定义。正如二价可变基可定义为两个独立的一价可变取代基一样，两个独立的一价可变取代基也可定义为一起形成二价可变基。例如，在式-C1(Ri)H-C2(Ri)H-(随意分别规定C1和C2是第一个和第二个碳原子)中，Ri和Rj可被规定为一起形成(1)C1和C2之间的第二个键或者(2)一个二价基如氧杂(-O-)，于是该式描述环氧化物。当Ri和Rj一起形成更复杂的整体如基团-X-Y-时，则该整体的取向应使上式中的C1连在X上，而C2连在Y上。于是，按规定“…Ri和Rj一起形成-CH2-CH2-O-CO-…”表示内酯，其中羰基连在C2上。但是，当定义“…Rj和Ri一起形成-CO-O-CH2-CH2-”时，则习惯上表示内酯，其中羰基连在C1上。可变取代基的碳原子含量以如下两种方法之一表示。第一种方法应用可变基全称的词头，例如“C1-C4”，其中“1”和“4”是表示可变基中最少和最多碳原子数的整数。用间隔将词头与可变基分开。例如，“C1-C4烷基”表示1～4个碳原子的烷基，(除非给出与之相反的表示法，否则还包括其异构形式)。每当给出该单一词头，该词头表示定义的可变基全部碳原子含量。于是“C2-C4烷氧基羰基”描述了基团CH3-(CH2)n-O-CO-，其中n是0、1或2。第二种方法是，只单独指出各定义部分的碳原子含量，即用括号将“Ci-Cj”这一定义括起来并将它紧接(无间隔)在所下的定义部分前面。按该任选的惯例，“(C1-C3)烷氧基羰基”与“C2-C4烷氧基羰基”意义相同，因为“C1-C3”只指烷氧基的碳原子含量。类似地，虽然“C2-C6烷氧基烷基”和“(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基”都定义含2～6个碳原子的烷氧基烷基，但这两个定义不同，因为前一个定义可使烷氧基或烷基部分单独含4或5个碳原子，但后一个定义将这两个基团的每一个都限制在3个碳原子。当权利要求中含相当复杂的(环状)取代基时，则在命名/定义该具体取代基的词语之后将用括号给出注释，该注释相应于还将示出该具体取代基的化学结构式的图中之一的相同名称/定义。Ⅱ-定义所有温度都以摄氏度表示。THF指四氢呋喃。DMSO指二甲亚砜。LDA指二异丙基氨化锂。TEA指三乙胺。DMF指二甲基甲酰胺。盐水指饱和氯化钠水溶液。色谱(柱色谱和急骤色谱)指以(载体、洗脱剂)表达的化合物的纯化/分离。应懂得将适当级分汇集并浓缩可得所需化合物。NMR指核(质子)磁共振谱，以四甲基硅烷的低场ppm(δ)报道化学位移。-φ指苯基(C6H5)。MS指质谱，以m/e、m/z或质量/电荷单位表达。[M+H]+指母体加氢原子的正离子。EI指电子轰击。CI指化学电离。FAB指快速原子轰击。HRMS指高分辨率质谱。醚指乙醚。“药物上可接受的”指从药理学/毒理学角度考虑病人可接受的性能和/或物质，还指制药药剂师从物理/化学角度考虑关于组合物、制剂、稳定性、患者可接受性和生物可用度是可接受的。当应用溶剂对时，应用的溶剂比是体积/体积比(v/v)。当应用固体在溶剂中的溶解度时，固体与溶剂的比是重量/体积(wt/v)。“-”表示连接基有2种可能的取向(1)与甾族环连接时的α或β，以及(2)与双键碳原子连接时的顺式或反式。UC####指Upjohn培养号abcd。实施例不用进一步详细阐述，相信本领域技术人员能应用前述说明最大程度地实施本发明。如下详细的实施例描述了如何制备本发明的各种化合物和/或实施本发明的各种方法，应将这些实施例看成只是阐述性的，不管怎样不是以任何方式对前述公开说明的限制。本领域技术人员即刻将认识到关于反应物以及关于反应条件和技术的适当变更形式。制备例116-碘-17-氰基马可福胺A非对映体混合物(式5)将固体碘化氰(11-7g,76-5mmol)加入马可福胺A(10-5g,22mmol)于氰仿(150mL)中的溶液，在回流下加热该反应混合物直至全部马可福胺A被耗用(约5hr)。冷却所得混合物至20～25℃，用二氯甲烷(100mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，再用亚硫酸钠溶液洗涤。分离有机相，在硫酸镁上干燥后浓缩至干。用色谱法(硅胶；乙酸乙酯/己烷，3/2)处理所得粗固体物而得标题化合物。制备例216,17-脱氢-17-氰基马可福胺A(式6)将16-碘-17-氰基马可福胺A(制备例1,9.5g,15mmol)溶于甲醇(150mL)，添加氢氧化钾水溶液(45％,3mL)。在20～25℃下搅拌该反应混合物达2hr。添加水，过滤收集形成的沉淀，用水洗涤，在减压下干燥过夜得标题化合物。制备例317-酮基马可福胺A(式7)将二氧化硒(2.9g,26mmol)加入16,17-脱氢-17-氰基马可福胺A(制备例2,6.0g,10mmol)于95％乙醇(100mL)的溶液中，在20～25℃下搅拌该反应混合物达2hr。添加饱和碳酸氢钠(100mL)使反应骤停。用二氯甲烷(2×200mL)提取所得混合物。合并提取液，干燥(硫酸镁)，浓缩得粗产物。用色谱法(硅胶；乙酸乙酯)纯化该材料得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H]关于C28H33N3O5+H的计算值=492.2498，实测值=492.2478。备择地，且更优选地，可应用对-甲苯磺酸合成标题化合物。这样，将对-甲苯磺酸一水合物(1g)加入16,17-脱氢-17-氰基马可福胺A(10g)于95％甲醇(50mL)的溶液中，在20～25℃下将该反应混合物搅拌1hr。往该混合物中加入三乙胺(2mL)，再蒸发溶剂。将残余物与碳酸钠水溶液(10％,100ml)研磨，过滤出固体，干燥得固态标题化合物(90％产率)。制备例415,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式8)从正丁基锂于己烷中的溶液(1.6M,9.9mL,15.4mmol)和二异丙胺(2.2mL,15.7mmol)制备二异丙基氨化锂的溶液。用无水四氢呋喃(THF,20mL)稀释，再冷却至-78℃。滴加17-酮基马可福胺A(制备例3,2.0g,4.1mmol)于无水THF(20mL)中的溶液，在1hr期间使反应混合物暖至-40℃。再将该混合物冷却至-78℃，再用苯基氯化硒(19mg,5.2mmol)的THF(10mL)溶液滴加处理。5分钟后用饱和碳酸氢钠溶液使反应骤停，用二氯甲烷提取，干燥(硫酸镁)，浓缩得固体物，未进一步纯化将它直接应用。将该物质溶于THF(150mL)，在0℃下用过氧化氢(30％,1.5mL)处理。移去冷却浴，在20～25℃下搅拌该反应混合物达30分钟。添加氢氧化钠(1N,100mL)使反应骤停。用二氯甲烷(2×200mL)提取该混合物。合并提取液，干燥(硫酸镁)后浓缩得粗产物。用色谱法(硅胶；乙酸乙酯)纯化得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H]关于C28H31N3O5+H的计算值=490.2342，实测值=490.2345。制备例514α-羟基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式9a)，应用氧杂氮丙啶(Oxaziridine)化学在-78℃下将二(三甲基甲硅烷基)氨化钾于甲苯中的溶液(0.5M,1mL,0.5mmol)滴加到15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(制备例4,66mg,0.14mmol)的THF(2mL)溶液中。在1hr期间使所得混合物暖至-40℃。将该反应混合物冷却至-78℃，搅拌15分钟，然后通过滴加2-苯基磺酰-3-苯基氧杂氮丙啶(42mg,0.16mmol)的THF(2mL)溶液进行处理。将该混合物搅拌5分钟，然后添加碳酸氢钠使反应骤停。用二氯甲烷(2×25mL)提取该混合物。合并提取物，干燥(硫酸镁)后浓缩得粗物质。通过制备性薄层色谱法(硅胶；乙酸乙酯)纯化得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z[M+H])关于C28H31N3O6+H的计算值=506.2291，实测值=506.2280。还得14,15-脱氢-16-羟基-17-酮基马可福胺A(14mg,20％)。制备例614α-羟基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式9a),15,16-脱氢-14,17-二酮基马可福胺A(式11)和14,15-脱氢-16,17-二酮基马可福胺A(式24)，应用二氧化硒将15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(制备例4,1.29g,2.6mmol)溶于对-二噁烷(30mL)，用二氧化硒(390mg)处理。将该混合物回流1hr，在减压下蒸除溶剂。将残余物与二氯甲烷(30mL)研磨，再过滤。浓缩滤液，用色谱法(硅胶；甲醇/乙酸乙酯，1/20)处理残余物而得14α-羟基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(430mg,32％)固体物。还从色谱处理得15,16-脱氢-14,17-二酮基马可福胺A(式11,212mg,16％)和14,15-脱氢-16,17-二酮基马可福胺A(式24,106mg,8％)。制备例715,16-脱氢-14,17-二酮基马可福胺A(制备例11)将14α-羟基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(制备例6,60mg，式9a)溶于二氯甲烷(10mL)，用二氧化锰(60mg)处理。在20～25℃下将该混合物搅拌1hr后浓缩。用制备性薄层色谱法(硅胶；二氯甲烷/乙酸乙酯，50/50)纯化残余物得标题化合物。制备例814α-羟基马可福胺A(式10)将14α-羟基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(制备例6,20mg,0.040mmol)溶于THF(5mL)，在0°下用氢化铝锂(1M,0.11mL,0.11mmol)的THF溶液处理。在0°下搅拌该混合物达0.5hr，然后添加碳酸氢钠的溶液(10％)。用二氯甲烷(2×10mL)提取该混合物。合并提取液，干燥(硫酸镁)，在减压下除去溶剂。制备性薄层色谱(硅胶；甲醇/乙酸乙酯，10/90)处理得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C28H35N305+H的计算值=494.2655，实测值=494.2653。制备例914α-羟基-17-酮基马可福胺A(式12a)将14α-羟基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式9a，制备例6,50mg,0.1mmol)溶于THF(5mL)，在-78℃下用三乙基硼氢化锂的THF溶液(1M,0.7mL)处理。在-78℃下将该混合物搅拌0.5hr。添加甲醇(1mL)骤停反应，浓缩该混合物。用色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷，1/20)处理生成的固体得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C28H33N3O6+H的计算值=508.2447，实测值=508.2437。制备例10从15,16-脱氢-14,17-二酮基马可福胺A(式11)制备14α-羟基-17-酮基马可福胺A(式12a)和14β-羟基-17-酮基马可福胺A将15,16-脱氢-14,17-二酮基马可福胺A(式11，制备例6,470mg,0.93mmol)溶于THF，在20～25℃下用硼氢化锂的THF溶液(1M,2mL)处理。将该混合物搅拌2hr，然后添加碳酸氢钠溶液(10％)。用二氯甲烷(2×20mL)提取该混合物。合并提取物，干燥(硫酸镁)，蒸除溶剂。残余物含易于通过色谱法(硅胶；甲醇/乙酸乙酯，1/20)分离的两种差向异构体混合物，即14α-羟基-17-酮基马可福胺A(90mg,19％)和14β-羟基-17-酮基马可福胺A(94mg,20％)。制备例11从14α-羟基-17-酮基马可福胺A(式12a)制备14α-羟基马可福胺A(式10)将14α-羟基-17-酮基马可福胺A(式12a，制备例10,413mg,0.81mmol)溶于THF(20mL)，在0℃下用甲硼烷THF复合物的THF溶液(1M,2.43mL)处理。将该混合物搅拌2.25hr。将混合物搅拌0.5hr后添加甲醇(3mL)。蒸除溶剂后，用色谱法(硅胶；甲醇/乙酸乙酯，1/16)处理残余物得标题化合物。制备例1214,17-二酮基马可福胺A(式13)在-78℃下用二甲亚砜(45μl)处理草酰氯(40μl)的无水二氯甲烷(5mL)溶液。在-78℃下搅拌该混合物达1hr。滴加14α-羟基-17-酮基马可福胺A(制备例11,27mg)的二氯甲烷(2mL)溶液。在-78℃下搅拌该反应混合物20分钟。将三乙胺(0.3mL)加入该反应混合物，然后在20分钟内使反应混合物暖至20～25℃。将该混合物在碳酸钠(10％,10mL)和二氯甲烷(10mL)之间分配。分离有机层，干燥(硫酸镁)，浓缩。用色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷，1/20)处理残余物得标题化合物。HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C28H31N3O6+H的计算值=506.2291，实测值=506.2280。制备例1314α-羟基-14β-甲基-17-酮基马可福胺A(式14a)在-78℃下用甲基溴化镁的醚溶液(3M,0-16mL,0.48mmol)处理-78℃下的14,17-二酮基马可福胺A(制备例12,16mg,0.032mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液。在-78℃下搅拌形成的混合物达0.5hr。添加碳酸钠(10％，数滴)使反应骤停。用二氯甲烷(10mL)稀释该混合物，干燥(硫酸镁)后浓缩。用色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷，1/20)处理残余物而得14α-羟基-14β-甲基-17-酮基马可福胺A(8mg,50％,Rf=0.25),HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C29H35N3O6+H的计算值=522.2604，实测值=522.2620。从该层还得14β-羟基-14α-甲基-17-酮基马可福胺A(1.2mg,7％,Rf=0.4),HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C29H35N3O6+H的计算值=522.2604，实测值=522.2630。当应用THF代替二氯甲烷作为反应溶剂时，使这样得到的产物6∶1比率增大到50∶1以上，产率增大到80％。制备例1414α-羟基-14β-甲基马可福胺A(式15)在0°下用氢化铝锂的THF溶液(1M,0.03mL,0.03mmol)处理14α-羟基-14β-甲基-17-酮基马可福胺A(制备例13,5mg,0.01mmol)于THF(5mL)中的溶液。在0°下搅拌该混合物达0.5hr，然后添加碳酸氢钠溶液(10％)。用二氯甲烷(2×5mL)提取该混合物。合并提取物，干燥(硫酸镁)后蒸除溶剂。制备性TLC(硅胶；甲醇/二氯甲烷，1/20)处理后得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C29H37N3O5+H的计算值=508.2811，实测值=508.2816。制备例1514-酮基马可福胺A(式16)在-78℃下用DMSO(170μl)处理草酰氯(150μl)于无水二氯甲烷(20mL)中的溶液。在-78℃下搅拌该混合物达1hr。滴加14α-羟基马可福胺A(制备例11,110mg)于二氯甲烷(5mL)中的溶液。在-78℃下将该反应混合物搅拌20分钟。在反应混合物中加入TEA(1mL)，在20分钟期间使该反应混合物暖至20～25℃。在碳酸钠(10％,20mL)和二氯甲烷(20mL)之间分配该混合物。分离有机层，干燥(硫酸镁)后浓缩。用色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷，1/25)处理残余物得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C28H33N3O5+H的计算值=492.2498，实测值=492.2510。制备例1614β-羟基马可福胺A(式17)在0°下用硼氢化钠(5mg)处理14-酮基马可福胺A(制备例15,10mg)于甲醇(2mL)中的溶液。在0°下搅拌该混合物达0.5hr，然后添加碳酸氢钠溶液(10％)。用二氯甲烷(2×10mL)提取该混合物。合并提取物，干燥(硫酸镁)后蒸除溶剂。用制备性TLC(硅胶，甲醇/乙酸乙酯，1/16)处理得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C28H35N3O5+H的计算值=494.2655，实测值=494.2653。制备例1714α-羟基马可福胺AN-氧化物(式18)在0°下用间-氯过苯甲酸(15mg)处理14α-羟基马可福胺A(制备例11,15mg)于二氯甲烷(3mL)中的溶液。在0°下搅拌该混合物0.5hr，然后用TEA(30μl)处理，浓缩。用制备性TLC(硅胶；甲醇/二氯甲烷，1/8)处理得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C28H35N3O6+H的计算值=510.2604，实测值=510.2615。制备例1814α-羟基-14β-乙基马可福胺A(式19)在-78℃下用乙基溴化镁的醚溶液(3M,0.15mL,0.45mmol)处理-78℃的14-酮基马可福胺A(制备例15,25mg,0.05mmo1)的THF(5mL)溶液。在-78℃下搅拌所得混合物达0.5hr。在20分钟期间使反应混合物暖至20～25℃。添加碳酸钠(10％，数滴)使反应骤停。用二氯甲烷(10mL)稀释该混合物，干燥(硫酸镁)后浓缩。用色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷，1/20)处理残余物得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C30H39N3O5+H的计算值=522.2968，实测值=522.2983。制备例19从14α-羟基-14β-甲基马可福胺A制备14β-甲基马可福胺A在-78℃下将二(三甲基甲硅烷基)氨化钾的甲苯溶液(0.5M,1mL,0.5mmol)滴加到14α-羟基-14β-甲基马可福胺A(式15，制备例14,66mg,0.14mmol)的THF(2mL)溶液中。在1hr期间使形成的混合物暖至-40℃。将该反应混合物冷却至-78℃，搅拌15分钟，然后通过滴加氯代硫羰甲酸苯酯(0.094mL,0.7mmol)的THF(2mL)溶液进行处理。10分钟后移去干冰浴。进一步反应3hr后添加碳酸氢钠使反应骤停。用二氯甲烷(2×25mL)提取该混合物。合并提取液，干燥(硫酸镁)后浓缩得粗物质。用制备性TLC(硅胶，乙酸乙酯)纯化而得14α-O-苯氧基硫羰基-14β-甲基马可福胺A。向14α-O-苯氧基硫羰基-14β-甲基马可福胺A(64mg,0.1mmol)于甲苯(5mL)的溶液中加入AIBN(2,2′-氮杂二异丁腈，3.3mg)，接着添加三丁基氢化锡(54μl,0.2mmol)。将该混合物回流3hr。蒸除溶剂后，通过制备性TLC(硅胶；乙酸乙酯)纯化残余物得14β-甲基马可福胺A。制备例2017-酮基马可福胺A(式7)的另一合成法在回流下、一小时期间，往马可福胺A(65g,0.136mol)和碳酸氢钠(137g,1.63mol)于四氢呋喃(THF,2L)和水(1.25L)的溶液中滴加碘(206g,0.81mol)于THF(1.25L)中的溶液。(也可在20～25℃下将该混合物搅拌16小时)。任其缓慢冷却至20～25℃(2.5hr)后，用饱和硫代硫酸钠溶液(1.5L)使反应骤停，再用乙酸乙酯(2×1L)提取。合并有机层，用饱和硫代硫酸钠(1L)溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤，蒸发，然后在真空干燥箱(65℃)中干燥一夜，得62g粗制17-酮基马可福胺A(式7)，NRM(300MHz,CDCl3)7.68,6.80,6.70,6.32,4.90,3.75,3.23,3.09,2.80,2.65,2.49-2.21,2.08,1.98-1.45,1.46,1.44,1.09和0.90δ。也可应用一氯化碘(ICl)代替碘。制备例2116-二硫苯基-17-酮基马可福胺A(式20)在-78℃下通过套管将粗制17-酮基马可福胺A(制备例20,5g,10.2mmol)于THF(150mL)中加入LDA溶液，该LDA溶液是通过在0°下的THF(100mL)中将正丁基锂(1.6M,24.8mL,0.04mmol)滴加到二异丙胺(5.7mL,0.041mol)中而制备的。在1hr中让反应混合物缓慢地暖至-50℃。然后用二硫二苯(4.4g,0.02mol)处理形成的混合物。立刻用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)使反应骤停，再用二氯甲烷(300mL)提取。干燥(硫酸镁)有机相，浓缩(8g)，用色谱法(硅胶，120g；乙酸乙酯/己烷，60/40)处理得标题化合物，MS(FAB)=708(M++H)；NMR(300MHz,CDCl3)7.74,7.71,7.64,7.45-730,6.81,6.72,6.32,4.91,3.70,3.16,3.01,2.75,2.53,2.35,2.15-1.50,1.47,1.45,1.06和0.82δ。制备例2216-苯硫基-16-苯亚磺酰基(sulfoxyphenyl)-17-酮基马可福胺A(式21)在-78℃下氮气气氛中，往16-二硫苯基-17-酮基马可福胺A(制备例21,10g,14mmol)于二氯甲烷(250mL)的溶液中滴加间-氯过苯甲酸(64％,4.2g,15.5mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液达15分钟。立刻用饱和硫代硫酸钠(200mL)使反应骤停，用饱和碳酸氢钠(200mL)稀释，再用二氯甲烷(200mL)提取。干燥(硫酸镁)，接着在减压下浓缩得标题化合物，NMR(300MHz,CDCl3)8.0-7.29,6.80,6.70,6.31,4.90,3.68,3.41,3.14,3.07,2.82,2.80-2.65,2.16,2.05-1.1,1.47,1.43,0.96和0.83δ。制备例2316-苯硫基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式22)将粗的16-苯硫基-16-苯亚磺酰基-17-酮基马可福胺A(式21，制备例22,11g)在甲苯(250mL)中回流45分钟，冷却至20～25℃，用饱和碳酸氢钠(300mL)稀释，再用乙酸乙酯(300mL)提取。将有机层干燥(硫酸镁)，浓缩得标题化合物，MS(FAB)=598(M++H)；HRMS(M/Z,M++H)C34H35N3O5S+H1，计算值=598.2376，观测值=598.2387；NMR(300MHz,CDCl3)8.18,7.55-7.45,7.29-7.45,6.83,6.70,6.34,5.92,4.91,3.87,3.30,3.21,3.08,2.80,2.35,2.10,2.03,1.78,1.46,1.44,1.11和0.88δ。制备例2416-苯亚磺酰基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式23)在-78℃下，往粗的16-苯硫基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式22，制备例23,10.6g)于二氯甲烷(300mL)的溶液中滴加间-氯过苯甲酸(64％,2.8g)的二氯甲烷(125mL)溶液。用饱和硫代硫酸钠(300mL)和饱和碳酸氢钠(300mL)使反应骤停，然后提取入二氯甲烷(300mL)。将有机层干燥(硫酸镁)，过滤后浓缩得标题化合物，NMR(300MHz,CDCl3)7.75-7.3,6.81,6.75-6.6,6.31,4.90,3.78-3.58,3.22,2.98,2.88-2.45,2.12-1.55,1.46,1.44,1.12和0.88δ。制备例2514α-羟基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式9a)往粗的16-苯亚磺酰基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式23，制备例24,13g)的甲醇水溶液(10/1,300mL)中加入二乙胺(15mL)。回流0.5hr后使反应混合物冷却至20～25°，用水(450mL)稀释，提取入二氯甲烷(500mL)。干燥(硫酸镁)，接着浓缩，用色谱法(硅胶，130g；丙酮/二氯甲烷30/70)处理得标题化合物。制备例2614α-羟基-14β-乙烯基马可福胺A(式30)在-78°下用乙烯基溴化镁的THF溶液(1M,4.0mL,4mmol)处理-78°的14-酮基马可福胺A(式16，制备例15,200mg,0.4mmol)于THF(5mL)中的溶液。在-78°下搅拌形成的混合物达2hr，再暖至20～25°。在20～25°下搅拌2hr。添加碳酸钠(10％,3mL)使反应骤停。用二氯甲烷(30mL)稀释该混合物，用饱和氯化铵溶液洗涤，干燥(硫酸镁)后浓缩。用色谱法(硅胶；己烷/丙酮，6/4)处理残余物而得标题化合物，NMR(300MHz,CDCl3)7.86,6.78&6.67,6.32,6.58,5.43,5.18,4.89,3.7,3.11,2.95,2.8-1.5,1.44,1.08和0.82δ；MS(FAB,M/Z,[M+H])=520。制备例2714α-羟基-14β-甲基马可福胺AN-氧化物(式32)在0°下，用间-氯过苯甲酸(20mg)处理14α-羟基马可福胺A(制备例11,30mg)于二氯甲烷(3mL)中的溶液。搅拌该混合物0.5hr，然后在碳酸氢钠水溶液(5％,10mL)和二氯甲烷(20mL)之间分配。分层后，用二氯甲烷(10mL)提取水层。合并后的有机提取液用硫酸镁干燥，过滤，在0°和减压下蒸发，用三乙胺(30μl)处理，浓缩得标题化合物，NMR(300MHz,CD3OD)6.91&6.70,6.36,4.91,4.08&3.76,3.5-3.1,3.12,2.8-1.6,1.46&1.44,1.50和0.93(s,3H)δ。制备例2814α-羟基-15α-甲基马可福胺A(式35)将14α-羟基-15α-甲基-17-酮基马可福胺A(制备例32,90mg,0.18mmol)溶于THF(10mL)，在0°下用甲硼烷甲硫醚复合物(12M,0.18mL)处理。在0°下搅拌该混合物达2hr，然后添加甲醇(0.4mL)，又搅拌1hr。蒸去溶剂后，用色谱法(硅胶；丙酮/二氯甲烷，30/70)处理残余物得标题化合物，NMR(300MHz,CDCl3)8.39,6.79&6.70,6.36,4.91,3.81,3.67,3.03,3.11,2.68&1.86,2.7-1.2,1.44,1.02,1.11和0.85δ；HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C29H37N3O5+H的计算值=508.2811,实测值=508.2840。制备例2914,17-二酮基-15α-甲基马可福胺A(式36)在-78℃下用DMSO(45μl)处理草酰氯(40μl)于无水二氯甲烷(5mL)中的溶液。在-78℃下搅拌该混合物达1hr。滴加14α-羟基-15α-甲基-17-酮基马可福胺A(制备例33,27mg)于二氯甲烷(2mL)中的溶液。在-78°下搅拌该反应混合物20分钟。向该反应混合物中添加TEA(0.3mL)，在20分钟内让该反应混合物暖至20～25°。将该混合物在碳酸钠(10％,10mL)和二氯甲烷(10mL)之间分配。将有机层干燥(硫酸镁)后浓缩。用色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷，1/20)处理残余物得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C28H31N3O6+H的计算值=506.2291,实测值=506.2280。制备例3014α-羟基-14β-甲基-15α-甲基-17-酮基马可福胺A(式37)在-78°下，用甲基溴化镁的醚溶液(3M,0.2mL,0.6mmol)处理-78°的14,17-二酮基-15α-甲基马可福胺A(制备例29,25mg,0.05mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液。在-78°下搅拌形成的混合物达0.5hr。添加碳酸钠(10％，数滴)使反应骤停。用二氯甲烷(10mL)稀释该混合物，干燥(硫酸镁)后浓缩。用色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷，4/96)处理残余物而得标题化合物，NMR(300MHz,CDCl3)8.13,6.78,6.70,6.33,4.91,3.75,3.16,3.05,2.78,2.68-2.57,2.42-2.0,1.64,1.45,1.44,1.11,1.04和0.92δ。制备例3114α-羟基-14β-甲基-15α-甲基马可福胺A(式38)将14α-羟基-14β-甲基-15αα-甲基-17-酮基马可福胺A(制备例30,15mg,0.028mmol)溶于THF(10mL)，接着在0°下用甲硼烷甲硫醚复合物(10M,0.02mL)处理。在0°下搅拌该混合物达2hr，然后添加甲醇(0.4mL)，又搅拌1hr。蒸去溶剂后，用色谱法(硅胶；丙酮/二氯甲烷，30/70)处理残余物得标题化合物，NMR(300MHz,CDCl3)7.82,6.79,6.67,6.33,4.90,3.65,3.09,2.98,2.69,2.60-2.22,2.06,1.87,1.85-1.75,1.44,1.43,1.10,0.94和0.86δ。制备例3214α-羟基-15α-甲基-17-酮基马可福胺A(式34)在20～25°下，用甲基溴化镁溶液(3M,1.0mL,5当量)处理14α-羟基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式9a,300mg)于THF(12mL)中的混合物。将形成的混合物回流1.5hr，然后冷却至20～25°。添加饱和氯化铵(3mL)使反应骤停。用二氯甲烷(30mL)稀释该混合物，用饱和氯化铵溶液洗涤，在硫酸镁上干燥后浓缩。将该浓缩物用色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷，1/20)处理得标题化合物，NMR(300MHz,CDCl3)7.90,6.80&6.70,6.32,4.89,4.36,3.74,3.20,3.06,2.78&2.10,2.5-1.8,1.46&1.44,1.13,1.12和0.88δ。也可应用二甲基铜锂试剂制备标题化合物。往0°下的碘化铜(0.4g,0.002mol)/THF中滴加甲基锂(1.4M,9mL,0.013mol)。将形成的混合物搅拌15分钟，然后在0°下滴加14α-羟基-15,16-脱氢-17-酮基马可福胺A(式9a,0.Sg,0.001mol)于THF(12mL)中的溶液进行处理。将该混合物搅拌15分钟后，用饱和氯化铵(25mL)骤停反应，再提取入乙酸乙酯(30mL)。在硫酸镁上干燥有机提取物，过滤后浓缩得粗物质，用色谱装置(4mm板；甲醇/二氯甲烷，4/96)纯化得标题化合物。制备例3314,17-二酮基-15α-甲基马可福胺A(式36)在-78°下用DMSO(45μl)处理草酰氯(40μl)于无水二氯甲烷(5mL)中的混合物。在-78°下搅拌该混合物达1hr。滴加14α-羟基-15α-甲基-17-酮基马可福胺A(制备例33,27mg)于二氯甲烷(2mL)中的溶液。在-78℃下将该反应混合物搅拌20分钟。向反应混合物中添加三乙胺(0.3mL),在20分钟内使该反应混合物暖至20～25°。在碳酸钠(10％,10mL)和二氯甲烷(10mL)之间分配该混合物。进行相分离，将有机层在硫酸镁上干燥后浓缩。用色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷，1/20)处理该浓缩物而得标题化合物，HRMS(FAB,M/Z,[M+H]关于C28H31N3O6+H的计算值=506.2291，实测值=506.2280。实施例124,25,26,27,28-五去甲马可福胺A(Ⅱ)将马可福胺A(I,8.5g,0.018mol)溶于甲酸(95％的纯度,100mL)。在20～25°下将该混合物搅拌16hr。除去挥发性组分，将残余物重溶于甲醇(100mL)。浓缩该混合物，通过色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷，10/90)纯化残余物得标题化合物，选择的NMR(300MHz,CDCl3+CD3OD)0.80,1.09,1.4～2.0,2.2～2.8,3.10,3.87,6.52和6.61δ；MS(FAB,M/Z,[MtH+])=412。实施例27-O-异戊烯基(Prenyl)-24,25,26,27,28-五去甲马可福胺A(Ⅲ)往已在丙酮(40mL)中搅拌了5分钟的4-溴-2-甲基-2-丁烯(1.0ml,8.7mmol)和碘化钾(1.44g,8.7mmol)中加入碳酸钾(1.6g,11.7mmol)，接着滴加24,25,26,27,28-五去甲马可福胺A(Ⅱ，实施例1,1.2g,0.0029mol)于丙酮/水(10mL/6mL)中的混合液。将该反应混合物搅拌0.25hr，用饱和亚硫酸钠溶液(100mL)使反应骤停，再提取入乙酸乙酯(100mL)。在硫酸镁上干燥有机层，过滤后减压浓缩而得标题化合物，NMR(400MHz,CDCl3)7.90,6.79,6.57,5.50,4.49,3.70,3.10,2.99,2.66,1.83,2.55-2.5,2.39,2.29,2.14,1.95-1.30,1.76,1.61,1.10和0.81δ。实施例37-O-(2′,3′-环氧-3′-甲基)丁基-24,25,26,27,28-五去甲马可福胺A(Ⅳ)在20～25°下往7-异戊烯基-24,25,26,27,28-五去甲马可福胺A(Ⅲ，实施例3,1.4g,2.9mmol)于二氯甲烷(30mL)的溶液中一次性加入3-氯过苯甲酸(2.4g,8.3mmol)。搅拌0.5hr后，添加亚硫酸氢钠(6g，于50mL水中)，继续搅拌0.5hr。用碳酸氢钠(饱和，100mL)使反应骤停，提取入乙酸乙酯(100mL)。分离有机提取物，在硫酸镁上干燥，过滤后浓缩得非对映体混合物形式的标题化合物，未进一步纯化而应用该化合物，NMR(400MHz,CDCl3)8.52,8.44,6.82,6.59,4.56-4.47,3.92-3.84,3.69,3.26-3.14,3.11,3.01,2.70-2.55,3.39,2.30,2.15,1.98-1.50,1.41,1.40-1.20,1.10,0.82和0.81δ。实施例425-羟基-24,25-二氢马可福胺A(Ⅴ)在20～25°下的氮气气氛中，往7-O-(2′,3′-环氧-3＇-甲基)-丁基-24,25,26,27,28-五去甲马可福胺A(Ⅳ,1.2g,2.4mmol)于THF(30mL)的混合液中滴加氯化锡(Ⅳ)(0.2mL)。搅拌0.25hr后，用氟化钾(10％水溶液，50mL)使反应骤停，提取入乙酸乙酯(100mL)。分离有机提取物，在硫酸镁上干燥，过滤后浓缩得非对映体混合物形式的标题化合物，未进一步纯化而应用该化合物。选择的NMR(400MHz,CDCl3)8.17,7.87,6.80-6.45,4.40,4.25,4.05-3.90和3.15δ。实施例524,25-二氢-25-氧代马可福胺A(Ⅵ)在-78°下，往草酰氯(0.045mL)的二氯甲烷(5mL)溶液中缓慢滴加DMSO(0.06mL)的二氯甲烷(1mL)溶液。在-78°下搅拌0.25hr后，滴加25-羟基-24,25-二氢马可福胺A(Ⅴ，实施例4,60mg,0.12mmol)于二氯甲烷(1mL)中的溶液。将该反应混合物搅拌0.25hr，然后用TEA(0.25mL)使反应骤停，再在20～25°下搅拌0.25hr。在碳酸氢钠(饱和，25mL)和乙酸乙酯(25mL)之间分配该反应混合物。分离有机提取物，在硫酸镁上干燥，过滤，浓缩后用色谱法(硅胶；甲醇/二氯甲烷(5/95))处理得标题化合物，NMR(400MHz,CDCl3)7.45,6.77,6.64,4.89,3.70,3.11,3.02,2.70,1.85,2.65,2.40,2.31,2.15,1.95-1.85,1.80-1.0,1.53,1.51,1.13和0.85δ；HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C28H35N3O5+H的计算值=494.2655,实测值=494.2662。实施例624,25-二氢-25-亚甲基马可福胺A(Ⅶ)在20～25°下，往甲基三苯基溴化鏻(70mg,0.2mmol)的醚(5mL)溶液中滴加正丁基锂(1.6M于己烷中，0.13mL,0.2mmol)。在氮气气氛和20～25°下将所得混合物搅拌5分钟，然后滴加24,25-二氢-25-氧代马可福胺A(Ⅵ，实施例5,25mg,0.05mmol)的THF(5mL)溶液进行处理。将该反应混合物搅拌0.25hr，用水(25mL)使反应骤停，提取入乙酸乙酯(25mL)。分离有机提取物，在硫酸镁上干燥，过滤，浓缩后用色谱法(硅胶；丙酮/已烷，40/60)处理得标题化合物，NMR(400MHz,CDCl3)7.67,6.72,6.47,5.24,5.08,4.90,4.77,3.60,2.30,3.04,2.96,2.60&1.78,2.58-2.52,2.23,2.08,1.88-1.20,1.44&1.42和1.10&0.80δ；HRMS(FAB,M/Z,[M+H])关于C29H37N304+H的计算值=492.2862，实测值=492.2858。实施例724,25-环氧马可福胺A(Ⅷ)将马可福胺A(I,0.25g,0.5mmol)和间-氯过苯甲酸(纯度60％,0.4g,1.4mmol)于二氯甲烷(25mL)中的混合物搅拌16hr。用亚硫酸氢钠(1.1g于15mL水中)处理该反应混合物，搅拌0.5hr，用碳酸氢钠(饱和，100mL)使反应骤停，提取入二氯甲烷(25mL)。在硫酸镁上干燥有机提取物，过滤，浓缩后用色谱法(硅胶；丙酮/二氯甲烷，40/60)得作为不可拆分的非对映体混合物的标题化合物，选择的NMR(400MHz,CDCl3)8.01&7.86,6.80&6.58,5.36-5.30&3.00-2.97,3.70,3.12,2.69&1.85和2.40δ。实施例824,25-二氢-25-亚甲基帕拉郝金胺A(Ⅶ)按实施例1～6的一般操作并作非关键性变动，但起始用PPPA，得标题化合物。实施例914α-羟基-14β-甲基-24,25-二氢-25-亚甲基马可福胺A(Ⅶ)按实施例1～6的一般操作并作非关键性变动，但起始用14α-羟基-14β-甲基马可福胺A，得标题化合物。实施例1014α-羟基-15α-甲基-24,25-二氢-25-亚甲基马可福胺A(Ⅶ)按实施例1～6的一般操作并作非关键性变化，但起始用14α-羟基-15α-甲基马可福胺A，得标题化合物。实施例1124,25-环氧帕拉郝金胺A(Ⅷ)按实施例7的一般操作并作非关键性变化，但起始用帕拉郝金胺A，得标题化合物。实施例1214α-羟基-14β-甲基-24,25-环氧马可福胺A(Ⅷ)按实施例7的一般操作并作非关键性变化，但起始用14α-羟基-14β-甲基马可福胺A，得标题化合物。实施例1314α-羟基-15α-甲基-24,25-环氧马可福胺A(Ⅷ)按实施例7的一般操作并作非关键性变动，但起始用14α-羟基-15α-甲基马可福胺A，得标题化合物。实施例14N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A(方法1)按国际公开WO92/00300提出的方法，将N-(18a)-脱甲基帕拉郝金胺A(50mg,0.1mmol)溶于乙二醇二甲醚(甘醇二甲醚，5mL)和水(0.5mL)。然后用硼氢化锂(0.15g,6.9mmol)处理该混合物，加热至回流达5hr。用盐水(25mL)使反应混合物骤冷，提取入乙酸乙酯。分离有机相，在硫酸镁上干燥，过滤后浓缩。用硅胶色谱法纯化浓缩物而得N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A。实施例15N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A(方法2)可这样制备N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A，即起始用帕拉郝金胺A，通过WO97/03988中提出的方法将它转变成2-脱氧帕拉郝金胺A。将2-脱氧帕拉郝金胺A(10mg)的DMF(0.4mL)溶液加到在500mL广口烧瓶中强烈生长的刺孢小克银汉霉雅致亚种(Cunninghamellaechinulatasubsp.elegans)(UUC7602)或刺孢小克银汉霉(C.echinulata)(UC7330)培养物(100mL)中。在28°下进行培养，根据培养物而定，连续振荡1～3天，得N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A。通过用二氯甲烷彻底提取，离心，在减压下除去溶剂而实现分离。通过TLC和HPLC分析残余物质。用各种色谱技术进行纯化，通过NMR和MS完成对结构的确定。表A表A(续)表A(续)表B权利要求1．式(Ⅶ)的25-亚甲基化合物其中(Ⅰ)马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-H，且R14β是-H，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅱ)帕拉郝金胺A(a)n是0，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-CH3，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅲ)14-羟基-14-烷基马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是C1-C4烷基，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅳ)14-羟基-15-烷基马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-H，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是C1-C4烷基，且R15β是-H及其药物上可接受的盐。2．权利要求1的式(Ⅶ)的亚甲基化合物，其中该药物上可接受的盐是选自下列酸的盐，即甲磺酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、富马酸、马来酸，CH3-(CH2)n-COOH，其中n是0～4,HOOC-(CH2)n-COOH，其中n同上述定义。3．权利要求1的式(Ⅶ)的亚甲基化合物，其中n1是0。4．权利要求3的式(Ⅶ)的亚甲基化合物，它是24,25-二氢-25-亚甲基帕拉郝金胺A。5．权利要求1的式(Ⅶ)的亚甲基化合物，其中n1是1。6．权利要求5的式(Ⅶ)的亚甲基化合物，它选自下组物质24,25-二氢-25-亚甲基马可福胺A，14α-羟基-14β-甲基-24,25-二氢-25-亚甲基马可福胺A和14α-羟基-15α-甲基-24,25-二氢-25-亚甲基马可福胺A。7．权利要求6的式(Ⅶ)的亚甲基化合物，它是24,25-二氢-25-亚甲基马可福胺A。8．式(Ⅷ)的24,25-环氧化合物其中(Ⅰ)马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-H，且R14β是-H，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅱ)帕拉郝金胺A(a)n是0，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-CH3，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅲ)14-羟基-14-烷基马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是C1-C4烷基，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是-H，且R15β是-H；(Ⅳ)14-羟基-15-烷基马可福胺A(a)n是1，(b)R14是R14α:R14β，其中R14α是-OH，且R14β是-H，(c)R15是R15α:R15β，其中R15α是C1-C4烷基，且R15β是-H及其药物上可接受的盐。9．权利要求8的式(Ⅷ)的24,25-环氧化合物，其中该药物上可接受的盐是选自下列酸的盐，即甲磺酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、富马酸、马来酸、CH3-(CH2)n-COOH，其中n是0～4,HOOC-(CH2)n-COOH，其中n同上述定义。10．权利要求8的式(Ⅷ)的24,25-环氧化合物，其中n1是0。11．权利要求10的式(Ⅷ)的24,25-环氧化合物，它是24,25-环氧帕拉郝金胺A。12．权利要求8的式(Ⅷ)的24,25-环氧化合物，其中n1是1。13．权利要求12的式(Ⅷ)的24,25-环氧化合物，它选自下组物质24,25-环氧马可福胺A，14α-羟基-14β-甲基-24,25-环氧马可福胺A和14α-羟基-15α-甲基-24,25-环氧马可福胺A。14．权利要求13的式(Ⅶ)的24,25-环氧化合物，它是24,25-环氧马可福胺A。15．N-(18a)-脱甲基-2-脱氧帕拉郝金胺A及其药物上可接受的盐。全文摘要本发明涉及马可福胺和帕拉郝金胺,其中该7元氧化环已被改性而生成25－亚甲基化合物(Ⅶ)和24,25－环氧化合物(Ⅷ),它们都适用作抗内寄生物和外寄生物、尤其抗蠕虫和节肢动物的抗寄生物剂。文档编号A61P33/00GK1230188SQ97197774公开日1999年9月29日申请日期1997年9月5日优先权日1996年9月9日发明者B·H·李,M·F·科洛斯尔申请人:法玛西雅厄普约翰美国公司