专利名称：紫地榆有效部位的制备及其防治结肠炎的药物用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体而言，本发明涉及一种紫地榆有效部位及其制备方法和药物用途。该有效部位由云 南民间白族/彝族常用草药隔山消经现代提取エ艺制备而成，具有明显的抗溃疡性结肠炎功效，可以用于制备防治溃疡性结肠炎的保健品或药物。
背景技术：
溃瘍性结肠炎(ulcerative colitis, UC)是ー种病因尚未确定的、主要累及直肠、结肠黏膜层及黏膜下层的慢性非特异性肠道炎症性疾病，临床上以腹泻、腹痛、黏液脓血便和里急后重等为主要症状，以结肠黏膜慢性炎症和溃疡形成为主要病理特点。一般认为UC的发病与自身免疫、感染、遗传、精神及环境因素等有夫。目前国内外尚未找到特异性治疗药物和方法，临床上治疗常用的几类药物(氨基水杨酸类、皮质类固醇激素、免疫抑制剂等)都只是缓解其临床症状，且存在停药后易复发和长期使用不良反应多等缺点。由于该病治愈难度大、易复发，并与结肠癌的发病存在一定的关系，被世界卫生组织列为现代难治病之一。由于该病自然病程的复杂特殊及对患者生活质量的严重影响，UC的治疗现已成为消化系统疾病中的难点，日益受到关注。而有迹象表明，我国UC的发生率正逐年增高。因此，寻找其它疗效显著且副作用小的药物以替代目前的常规药物己成为全世界研究的热点和主要方向。由于溃疡性结肠炎与自身免疫有关，因此在治疗该疾病时常规方法为选用糖皮质激素(例如，强的松、地塞米松、甲基强的松龙)或免疫抑制剂。而长期服用激素类制剂和免疫抑制剂的副作用都很大，使这些本来就受疾病折磨的患者犹如雪上加霜。尤其是大剂量激素的冲击疗法及激素长期的維持治疗，激素的毒副作用也随之明显凸现，比如会出现类肾上腺皮质功能亢进现象向心性肥胖、面色潮红、甚至动则汗出或入夜盗汗、痤疮等，且病人容易继发感染或加重感染，机体的生长发育延缓等等。而免疫抑制剂又会出现骨髄抑制，可能发生粒细胞减少；肝功能损害，使谷丙转氨酶(SGPT或ALT)增高；性机能损害，尤其是男性，少数可发生不育；脱发；出血性膀肌炎，血尿增多；抵抗力降低；恶心、呕吐、食欲不振等胃肠道反应。服用激素或免疫抑制最大的缺点是停药后都容易复发。由于西药治疗溃疡性结肠炎有很多的缺点，如上述治疗的不彻底、易复发、对机体的伤害较大等；而中草药在疾病，尤其是慢性难治性顽疾的治疗上有着独特的疗效。因此，中草药治疗溃疡性结肠炎越来越被患者所接受。由于溃疡性结肠炎经常有腹泻、粘液便和脓血便、里急后重、腹痛、发热等症状，中医认为是湿热郁结，余邪不尽、热毒结聚等症状，故在中药的辩证方药上使用清热、燥湿、活血及解毒的中草药。然而，常用的治疗溃疡性结肠炎中药都是数种中草药组成的复方，不仅药物质量控制不易，服用上也不方便。因此，以单味中草药为基础，富集其有效组分或有效部位，将其开发成为安全、有效、可控的现代中药/天然药物是当前药物研发的研究热点。紫地榆(Geranium strictipes R. Knuth )为物牛儿苗科老鹳草属植物,是中国的特有植物，分布在中国大陆的云南、四川等地。紫地榆生长于海拔2，700米至3，000米的地区，常生于山坡草地、林下及灌丛，目前尚未由人工引种栽培。在云南主要分布于中甸、丽江、大理、昆明等地；其根为白族、彝族民间常用草药隔山消，味苦、微涩、酸，性微寒，功能主治为清热利湿，活血止血(滇南本草)。白族和彝族民间多用于治疗厌食、痢疾、慢性胃炎、脘腹疼痛，月经不调，鼻衄；也可外用，治跌打损伤。国内外文献表明目前对紫地榆的研究主要集中在对其化学成以及隔山消(紫地榆的根)水提物抑龋作用方面的探索，而对该药的有关药理、毒理、临床应用、药材标准等方面的研究报道都非常少。已报道的紫地榆主要化学成分包括鞣质类和酚酸类，其中五倍子酸甲酯具有抗HIV的活性。除本专利发明人前期对其粗提物的抗菌作用进行了初歩研究，尚未见其它关于紫地榆和/或其有效部位用于防治溃疡性结肠炎的报道。隔山消( 紫地榆的干燥根)是云南民间白族、彝族常用中草药，虽然当地居民也将其应用于治疗慢性胃炎等消化道疾病。但是，还未有特别应用于治疗溃疡性结肠炎的报道。此外，由于隔山消味苦，需长期服药的慢性难治性疾病如溃疡性结肠炎患者，一般很难按吋、按量长期服用常规煎煮的药物。并且隔山消中含有大量鞣质，因此，其在治疗慢性疾患的同时可能对胃黏膜造成新的刺激与伤害。为了去芜存菁，即保留紫地榆药材中防治溃疡性结肠炎的有效部位、去除易产生毒副作用的成分，使患者不需服用大量药物即可达到防治效果，我们对紫地榆的有效部位提取エ艺进行了大量研究，并以こ酸所致大鼠溃疡性结肠炎为药效试验模型，验证紫地榆有效部位用于治疗溃疡性结肠炎的功效。据此完成本发明。

发明内容
本发明的目的是提供一种适合于エ业化生产的紫地榆有效部位，具体而言，该有效部位由下列方法制备得到a)用50%_90%こ醇溶剂回流提取经粉碎的紫地榆3次，每次提取1-10小时，温度50-800C ;合并提取液，减压浓缩得こ醇浸膏；b)将步骤a得到的こ醇浸膏溶于蒸馏水中超声使其充分溶解，经大孔吸附树脂材料柱层析，水洗，然后用60%的こ醇-水洗脱，其中大孔吸附树脂的型号为AB-8 ；c)将步骤b得到的洗脱液减压浓缩至无醇味，冷冻干燥得产品。其中，减压浓缩时的温度不超过100°C ;步骤a中的提取时间优选2-6小吋。本发明中的紫地榆是指物牛儿苗科老鹳草属植物紫地榆Geranium strictipesR. Knuth的任一部位或全草,优选其干燥根。本发明的另一目的是提供了由大孔树脂制备得到的紫地榆有效部位在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。本发明的再一目的是提供ー种具有防治溃疡性结肠炎功能的药物，该药物含有治疗有效量的紫地榆有效部位提取物、药用辅料和可药用载体。以紫地榆有效部位为原料的药物制剂可以是注射剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、ロ服液、气雾剂、透皮贴剂、栓剂、滴丸剂、夕卜用搽剂、软膏剂等剂型药物。本发明的相关试验中选用了 AB-8大孔吸附树脂为分离工具，有效地富集了紫地榆有效部位；并采用10%こ酸复制大鼠溃疡性结肠炎模型(UC大鼠)，观察UC大鼠体重变化、大便隐血情况；检测UC大鼠肠道结肠黏膜组织损伤情况以及病理组织学变化；測定UC大鼠结肠组织中丙ニ醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、NO自由基含量、髓过氧化物酶(MPO)活性和谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)含量；摘取UC大鼠脾脏、胸腺和结肠，计算脾脏指数、胸腺指数、结肠湿重指数等。エ艺研究及药效学实验结果说明使用大孔吸附树脂对紫地榆醇提物进行精制在生产エ艺上及其在制备防治UC的制药用途的应用上有着相当的优势，并且以往未见相关的报道，从而构成本发明。本发明有益之处在于首次发现由AB-8大孔树脂制备的紫地榆有效部位具有防治溃疡性结肠炎方面的成药潜力，为开发防治该疾病创新性非激素药物或免疫抑制剂提供了新的物质基础。具有潜在巨大的社会效益和经济效益。本发明再一特点为紫地榆有效部位的制备采用了除去干扰成分效果好、操作简便、样品损耗小、成本低、污染小、安全可靠的大孔吸附树脂为提取分离材料，利于节能减排条件下的大規模生产。产业化前景十 分明确。
具体实施例方式为了更好地理解本发明的实质，下面通过实施例进ー步说明本发明。实施例给出了紫地榆有效部位的制备及其对大鼠こ酸所致溃疡性结肠炎的治疗效果，说明其在制备防治溃疡性结肠炎中的用途。必须说明，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例I :紫地榆有效部位(样品I)的制备I. I仪器与试剂FD-1C-80冷冻干燥机为北京博医康实验仪器有限公司产品，超净工作台采用苏州净化设备有限公司SW-CJ-2FD型双人单面净化工作台，隔水式恒温培养箱为上海一恒科技有限公司产品，灭菌锅用上海博讯实业有限公司医疗设备厂YXQ-LS-50SII型立式压カ蒸汽灭菌器，旋转蒸发仪(R-210)为瑞士步祺产品，台式高速冷冻离心机(TL-16R型)为上海离心机机械研究所产品，紫外分光光度计(722型)购自上海第三分析仪器厂。紫外光谱用Shimadzu UV-240紫外分光光度计測定，薄层制备层析(PTLC)用Merck公司的铝箔硅胶板，薄板(TLC)检测用254nm和365nm的紫外灯；显色剂用碘蒸气、10%硫酸-こ醇以及磷钥酸溶液。こ酸、こ醇、甲醇等试剂均为分析纯，天津化学试剂有限公司生产。I. 2 药材隔山消，购自大理集盛大药房。经大理学院药学与化学学院马晓匡教授鉴定为物牛儿苗科老鹳草属植物紫地榆Geranium strictipes R. Knuth的干燥根。I. 3紫地榆こ醇浸膏的制备取隔山消药材(紫地榆的干燥根)5公斤，粉碎后加60%こ醇10000毫升浸泡，加温至60°C提取，提取3次，毎次本别为2小吋、4小吋、4小吋。合并提取液，减压浓缩得紫地榆こ醇浸膏(粗提物I) I. 64公斤，即I克浸膏相当于3. 06克生药。I. 4紫地榆有效部位提取物的制备将I. 3项下制备得到的粗提物I (500克)溶于3750毫升蒸馏水中超声使其充分溶解，用750克大孔吸附树脂AB-8吸附拌样，上柱，先用水洗脱至无色。续用60%こ醇-水溶液洗脱至无色，取洗脱液500毫升减压浓缩至干，真空干燥，即得紫地榆有效部位(样品I)。
实施例2 :紫地榆有效部位(样品II)的制备2. I仪器与试剂同实施例I。2. 2药材同实施例I。2. 3紫地榆こ醇浸膏的制备取隔山消药材(紫地榆的干燥根)5公斤，加60%こ醇10000毫升浸泡，加温至60°C提取，提取3次，毎次本别为4小吋、6小吋、8小吋。合并提取液，减压浓缩得紫地榆こ醇浸膏(粗提物II) I. 63公斤，即I克浸膏 相当于3. 06克生药。2. 4紫地榆有效部位提取物的制备将2. 3项下制备得到的粗提物II (500克)溶于3750毫升蒸馏水中超声使其充分溶解，用750克大孔吸附树脂AB-8吸附拌样，上柱，先用水洗脱至无色。续用60%こ醇-水溶液洗脱至无色，取洗脱液500毫升减压浓缩至干，真空干燥，即得紫地榆有效部位(样品
II)。实施例3 :紫地榆有效部位对こ酸所致溃疡性结肠炎大鼠隐血的影响3. I实验材料3. I. I动物SD雄性大鼠，体重为220 240克，合格证号SCXK (滇)2005-0008，昆明医学院实验动物中心提供。大鼠饲料及垫料由大理学院动物实验中心提供。3. I. 2受试药物粗提物I，即实施例I制备得到的紫地榆こ醇浸膏；样品I，即实施例I制备得到的紫地榆有效部位。实验以柳氮磺胺吡啶(SASP，上海信谊嘉华药业有限公司生产，批号100527)为阳性对照品，用时用刀片刮去黄色糖衣，呈现黄褐色，研碎后过100目筛，用O. 5%CMC-Na配制成剂量为300毫克/公斤的混悬液备用。3. I. 3 试剂冰こ酸(天津市风船化学试剂科技有限公司，批号080308，分析纯)；以下试剂盒由南京建成生物工程研究所提供隐血(OB)试剂盒，批号20101126 ；考马斯亮蓝蛋白试剂盒，批号20100925 ;丙ニ醛(MDA)试剂盒，批号20101124 ;S0D试剂盒(測总)，批号=20101125 ;一氧化氮测试盒(硝酸还原酶法)，批号:20101117 ;髓过氧化物酶(MPO)测试盒，批号20101109 ;谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)测试盒，批号20101116。3. I. 4主要仪器同实施例I。3. 2试验方法3. 2. Iこ酸性溃疡性结肠炎(UC)大鼠造模大鼠在实验室常规饲养一周。实验前禁食不禁水24小吋，记录体重。造模前先用5%肥皂水灌肠，清洁肠道。30分钟后用こ醚麻酔，经肛门插入直径3毫米的聚こ烯纤维导管8 10公分，取仰卧位，注入10%こ酸溶液I. 5毫升、保留15秒，立即用3 5毫升生理盐水(NS)冲洗两次。造模24小时后大鼠即出现腹泻，为黄色稀便、半稀便甚至血便，体重下降，精神萎靡，自主活动減少。其粪便性状及一般情况的改变，符合实验性UC的改变，表明造模成功。3. 2. 2分组及给药造模24小时后，大鼠随机分为9组，即样品1(50毫克/公斤、100毫克/公斤、200毫克/公斤)、粗提物I (低、中、高剂量组)、阳性对照SASP组、模型组、正常对照组，每组10只。其中，正常组大鼠用生理盐水按3. 2. I造模方法处理。造模后24小时开始灌胃给药，I次/天，连续7天。正常组和模型组以等容量的生理盐水灌胃；粗提物I用O. 5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配制成低、中、高剂量(163. 4毫克/公斤、326. 8毫克/公斤、653. 6毫克/公斤，相当于O. 5、I. 0、2克生药/公斤)。3. 2. 3大便隐血实验采用邻联甲苯胺法，用隐血(OB)试剂盒检测，用棉签挑取少量大鼠大便于白瓷板上，先滴加邻联甲苯胺，再滴加过氧化氢，根据显色时间和显色程度进行隐血等级评分。隐血等级评分标准如下 __典便表现_
0阴性(_) (3分钟后不显蓝绿色)
1隠血(+ ) (30 60秒中内、1i蓝色)
2隐血(++)(立_显蓝绿色)
3隐血(+++)(立即显深蓝色)
_4_肉眼血便_3. 2. 4数据统计与分析统计软件为SPSS16. O,结果用均数土标准差表示，各组总体比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验，涉及的计量资料采用秩和检验，P
<O. 05为有统计学差异。3. 3实验结果こ酸性UC大鼠造模后，对各组造模24小时和给药7天后的隐血情况进行评价与统计学分析，紫地榆有效部位对UC大鼠隐血的影响的实验结果见表1-2。造模24小时后各组大鼠大便隐血情况没有统计学差异，隐血大部分呈阳性(++)或强阳性(+++)。经药物治疗后，隐血程度逐渐减轻。给药7天后，各组间隐血情况比较差异有统计学意义(P〈0. 001)。除正常组外，各组造模后24小时和给药7d后的隐血情况之前后比较P < O. 05，有统计学差异，其中粗提物组和样品I之高、中、低剂量组给药前后都有非常显著的差异(P〈0. 01 )。表I.紫地榆有效部位对こ酸所致UC大鼠隐血的影响(造模后24小吋)
权利要求
1.一种紫地榆有效部位提取物，其特征由下列方法制备得到 a)用50%-90%こ醇溶剂回流提取经粉碎的紫地榆3次，每次提取1-10小吋，温度50-800C ;合并提取液，减压浓缩得こ醇浸膏； b)将步骤a得到的こ醇浸膏溶于蒸馏水中超声使其充分溶解，经大孔吸附树脂材料柱层析，水洗，然后用60%的こ醇-水洗脱，其中大孔吸附树脂的型号为AB-8 ； c)将步骤b得到的洗脱液减压浓缩至无醇味，冷冻干燥得产品。
2.根据权利要求I的紫地榆有效部位提取物，其特征为紫地榆是指栊牛儿苗科老鹳草属植物紫地榆Geranium strictipes R. Knuth的干燥根；减压浓缩时的温度不超过IOO0C ;步骤a中的提取时间为2-6小时。
3.根据权利要求1-2之一的紫地榆有效部位提取物用于制备防治溃疡性结肠炎的药物用途。
4.ー种具有防治溃疡性结肠炎功能的药物，其为治疗有效量的根据权利要求1-2之一的紫地榆有效部位提取物、药用辅料和可药用载体。
5.根据权利要求4的药物，其药物剂型是片剂、颗粒剂、胶囊、ロ服液、注射剂、滴丸、气雾剂、透皮贴剂、栓剂、外用搽剂或软膏剂。
全文摘要
本发明涉及紫地榆有效部位的制备及其防治结肠炎的药物用途。本发明的紫地榆有效部位提取物由彝药隔山消经大孔吸附树脂精制而成。隔山消为牻牛儿苗科老鹳草属植物紫地榆Geranium strictipes R.Knuth的干燥根。本发明采用大鼠乙酸所致溃疡性结肠炎模型，观察紫地榆有效部位对模型大鼠的一般临床症状、病理形态学和氧化损伤的相关生化指标的影响。实验结果显示，紫地榆有效部位对乙酸所致溃疡性结肠炎大鼠模型具有一定的治疗作用，可改善其临床症状。因此，紫地榆有效部位可以预期应用于制备防治溃疡性结肠炎的药物。
文档编号A61K36/185GK102688263SQ20121017912
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月2日 优先权日2012年6月2日
发明者张娴文, 施贵荣, 李凤贤, 李辉, 洪小凤, 耿玲, 赵昱 申请人:大理学院