专利名称：作为雌激素制剂的取代的6H－二苯并[c,h]色烯的制作方法
技术领域：
本发明涉及可用作雌激素制剂的取代的6H-二苯并[c，h]色烯(苯并吡喃)。
背景技术：
雌激素在哺乳动物组织的多效性已有文献报道，现在发现雌激素可以影响许多器官系统[Mendelsohn和Karas，New England Journal ofMedicine 3401801-1811(1999)，Epperson等，Psychosomatic Medicine 61676-697(1999)，Crandall，Journal of Womens Health & Gender BasedMedicine 81155-1166(1999)，Monk和Brodaty，Dementia & GeriatricCognitive Disorders 111-10(2000)，Hurn和Macrae，Journal of CerebralBlood Flow & Metabolism 20631-652(2000)，Calvin，Maturitas 34195-210(2000)，Finking等，Zeitschrift fur Kardiologie 89442-453(2000)，Brincat，Maturitas 35107-117(2000)，Al-Azzawi，Postgraduate MedicalJournal 77292-304(2001)]。雌激素对组织发挥作用的方式有数种，其中最具特征的是其与雌激素受体相互作用，导致基因转录的改变。雌激素受体是配体激活的转录因子，属于核激素受体超家族。该家族的其他成员包括孕酮、雄激素、糖皮质激素以及盐皮质激素受体。与配体结合后，这些受体二聚化并激活基因转录，激活基因转录的方式有直接结合于DNA上的特异序列(应答元件)或与其他转录因子相互作用(如AP1)，后者直接与DNA上的特异序列相结合[Moggs和Orphanides，EMBO Reports 2775-781(2001)，Hall等，Journal of Biological Chemistry27636869-36872(2001)，McDonnell，Principles Of Molecular Regulation.p351-361(2000)]。一类“共调节蛋白”也可以与配体-结合受体相互作用，进一步调节转录活性[McKenna等，Endocrine Reviews 20321-344(1999)]。已表明，雌激素受体能以配体依赖和非依赖的方式[Quaedackers等，Endocrinology 1421156-1166(2001)，Bhat等，Journal of SteroidBiochemistry & Molecular Biology 67233-240(1998)，Pelzer，等，Biochemical & Biophysical Research Communications 2861153-7(2001)]抑制NFκB-介导的转录。
雌激素受体也可以通过磷酸化激活。这种磷酸化通过生长因子如EGF的介导，在配体缺失的情况下，引起基因转录的改变[Moggs和Orphanides，EMBO Reports 2775-781(2001)，Hall等，Journal ofBiological Chemistry 27636869-36872(2001)]。
雌激素影响细胞的另一种不太特异的方式是通过所谓的膜受体。此种受体的存在是有争议的，但已报道雌激素能从细胞激发非常快速的非基因组应答。转导这些效应的分子本质还不清楚，但有证据表明其至少与雌激素受体的核形式相关[Levin，Journal of Applied Physiology911860-1867(2001)，Levin，Trends in Endocrinology & Metabolism 10374-377(1999)]。
到目前为止已发现两种雌激素受体。第一种雌激素受体在15年前被克隆，称为ERα[Green等，Nature 320134-9(1986)]。第二种受体发现较晚，称为ERβ[Kuiper等，Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America 935925-5930(1996)]。针对ERβ的前期工作主要集中在定义其对各种配体的亲合性，发现它与ERα有所不同。已绘出ERβ的啮齿类动物组织分布图，与ERα不太一致。一些组织如小鼠和大鼠的子宫ERα的表达占优势，而小鼠和大鼠的肺组织则ERβ的表达占优势[Couse等，Endocrinology 1384613-4621(1997)，Kuiper等，Endocrinology 138863-870(1997)]。即使在同一器官，ERα和ERβ的表达也会区室化。例如，在小鼠的卵巢，ERβ在颗粒细胞高表达，而ERα则局限于膜和间充质细胞[Sar和Welsch，Endocrinology140963-971(1999)，Fitzpatrick等，Endocrinology 1402581-2591(1999)]。然而，有证据表明受体可以共表达，ERα和ERβ可以形成异源二聚体[Cowley等，Journal of Biological Chemistry 27219858-19862(1997)]。
已描述有大量的化合物可以模拟或阻断17β-雌二醇。具有与效力最强的内源雌激素17β-雌二醇大概相同的生物学效应的化合物被称为“雌激素受体激动剂”。当与17β-雌二醇组合时，会阻断其效应的化合物称为“雌激素受体拮抗剂”。实际上，在雌激素受体激动剂与拮抗剂活性之间存在连续区，一些化合物在一些组织作为雌激素受体激动剂，在另一些组织作为雌激素受体拮抗剂。这些具有混合活性的化合物称为选择性雌激素受体调节剂(SERMS)，在治疗上非常有用(如EVISTA)[McDonnell，Journal of the Society for GynecologicInvestigation 7S10-S15(2000)，Goldstein等，Human Reproduction Update6212-224(2000)]。为什么同样的化合物具有细胞特异的效果，原因还不清楚，但可能是由于受体构象和/或共调节蛋白环境的不同。
知晓雌激素受体与配体结合时采取不同的构象已有一段时间，但最近才揭示这种改变的结果和微妙差异。通过与各种配体共结晶，将ERα和ERβ的三维结构溶解，明确表明在雄激素受体拮抗剂(空间上抑制受体-共调节蛋白的相互作用所需要的蛋白序列)存在下的螺旋12的重新定位[Pike等，Embo 184608-4618(1999)，Shiau，等，Cell 95927-937(1998)]。而且，已用噬菌体展示技术来识别不同配体存在下，与雌激素受体相互作用的多肽[Paige等，Proceedings ofthe National Academyof Sciences of the United States of America 963999-4004(1999)]。例如，已识别出一种多肽可以区别ERα与全雌激素受体激动剂17β-雌二醇和二乙基己烯雌酚的结合。另一种肽可以区别氯芷酚与ERα和ERβ的结合。这些数据表明每种配体将受体置于独特的无法预测的构象，可能具有不同的生物活性。
如上所述，雌激素影响多种生物过程。而且，在提及性别差异时(如疾病的发病率、对压力的反应等)，其解释很可能涉及性别之间的雌激素水平差异。
发明描述本发明提供有如下结构的式I的雌激素化合物或其医药上可接受的盐
式中R1和R2各自独立地选自氢、羟基、C1-6烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C1-6烷氧基、或卤素；其中，R1或R2的烷基或烯基片段可以任选地有羟基、-CN、卤素、三氟烷基、三氟烷氧基、-NO2、或苯基取代；先决条件是R1或R2中至少一个是羟基；R3、R4、R5、R6、和R7各自独立地是氢、C1-6烷基、卤素、C1-6烷氧基、-CN、C2-7烯基、C2-7炔基、-CHO、苯基、或者一个有1～4个选自O、N或S的杂原子的5员或6员杂环式环；其中，R4、R5、R6、或R7中的烷基或烯基片段可以任选地有羟基、-CN、卤素、三氟烷基、三氟烷氧基、-NO2、或苯基取代；其中，R4或R5的苯基片段可以任选地有选自下列的相同或不同取代基的一、二、或三取代C1-6烷基、C2-7烯基、卤素、羟基、C1-6烷氧基、-CN、-NO2、氨基、C1-6烷基氨基、每个烷基1-6个碳原子的二烷基氨基、硫、C1-6烷硫基、C1-6烷亚磺酰基、C1-6烷磺酰基、C2-7烷氧羰基、C2-7烷羰基、或苯甲酰基。
当本发明化合物含有碱性片段时，医药上可接受的盐可以从下列有机酸和无机酸生成例如，乙酸、丙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、苹果酸、邻苯二甲酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟脑磺酸、和类似已知可接受酸。当本发明化合物含有酸性片段时，也可以从有机碱和无机碱生成盐，例如碱金属盐(如钠盐、锂盐、或钾盐)、碱土金属盐、铵盐、含有1～6个碳原子的烷铵盐、每个烷基中含有1～6个碳原子的二烷铵盐、和每个烷基中含有1～6个碳原子的三烷铵盐。
烷基和烯基这些术语，作为一种基团或一种基的组成部分(例如烷氧基、烷硫基、烷羰基)，分别包括例如C1-6和C2-7的枝化片段和直链片段两种。实例包括甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、仲丁基、叔丁基、乙烯基、烯丙基、1-甲基乙烯基等。当烷基片段或烯基片段有取代时，它们可以典型地有一取代、二取代、三取代或全取代。卤素取代基的实例包括1-溴乙烯基、1-氟乙烯基、1，2-二氟乙烯基、2，2-二氟乙烯基、1，2，2-三氟乙烯基、1，2-二溴乙烷、1，2-二氟乙烷、1-氟-2-溴乙烷、CF2CF3、CF2CF2CF3等。卤素这一术语包括溴、氯、氟、和碘。
较好的5～6员杂环式环包括呋喃、噻吩、吡咯、异吡咯、吡唑、咪唑、三唑、二硫杂环戊二烯、氧硫杂环戊二烯、异噁唑、噁唑、噻唑、异噻唑、噁二唑、呋咱、噁三唑、二噁唑、噁噻唑、四唑、吡喃、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、噁嗪、噁噻嗪、或噁二嗪。更好的是，该杂环式环是呋喃或噻吩。
按照本发明使用的“提供”这一术语，就提供本发明所涵盖的化合物或物质而言，是指要么直接给药这样一种化合物或物质，要么给药一种能在体内形成有效量该化合物或物质的药物前体、衍生物、或类似物。
在一些实施方案中，R6和R7各自独立地是氢或卤素，例如R6是氢或氟。
R4和R5可以例如各自独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、C2-7烯基、-CN、呋喃基和噻吩基。在一些实施方案中，R4不是氢，例如，R4诸如选自氰基、氯、溴、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、乙烯基、噻吩-2-基和噻吩-3-基。
R5的实例是氢和卤素例如氯。
R2和R3的实例各自独立地是氢、卤素例如氯、或羟基。
R1的实例是氢、羟基和卤素例如氯。
在一些实施方案中，R1和R2中只有一个是羟基。
R3的实例是诸如4-位上的氢和卤素例如氯。
在本发明化合物中，较好的是R6和R7各自独立地是氢或卤素；且R4和R5各自独立地是氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、C2-7烯基、-CN、呋喃基、或噻吩基。更好的是，R1、R2、和R3各自独立地是氢、卤素、或羟基；甚至更好的是R4不是氢。
也提供的是本发明化合物的制备方法。因此，本发明提供一种式I化合物制备方法，该方法包含下列之一
a)使式II化合物脱烷基化 式中R是一个C1-6烷基且R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7同本文中定义，给出式I化合物；或b)使式III化合物脱酰基化 式中R′是一个酰基例如C2-7链烷酰基如乙酰基，R11是R1或一个酰氧基例如C2-7链烷酰基如乙酰基，R12是R2或一个酰氧基例如C2-7链烷酰基如乙酰基，且R3、R4、R5、R6、R7同本文中定义，给出对应的式I化合物；或c)使必要时有保护的式IV的12-溴化合物
式中R1、R2、R3、R5、R6和R7同本文中定义，与下式的适当反应性衍生物反应R4-L式中R4是C1-6烷基、C2-7烯基、或者有1～4个选自O、N或S的杂原子的5员或6员杂环式环，且式中L是一个适当离去基团，例如L是一种硼酸(例如丁基硼酸或2-噻吩硼酸)或丁基锡衍生物(例如烯丙基三丁基锡)；并脱除任何保护基团，给出对应的式(I)化合物；或d)将上述定义的、必要时有保护的、且式中R1、R2、R3、R4和R5中至少一个是氢的式I化合物 用一种卤化剂例如N-溴琥珀酰亚胺、N-氯琥珀酰亚胺卤化，必要时随后脱保护，给出一种式中R1、R2、R3和R4中至少一个是卤素的式I化合物；或e)将上述定义的、必要时有保护的、且式中R4是溴的式I化合物
用一种腈化剂例如氰化锌腈化(即导入CN)，必要时随后脱保护，给出一种式中R4是氰基的式I化合物；或f)使一种碱性的式I化合物转化成其医药上可接受的盐，或反之亦然。
本发明化合物制备中使用的试剂要么可以是商业上可得的，要么可以用文献上描述的标准程序制备。在本文中所述的任何反应中，反应性取代基基团或部位可以在所进行的反应之前加以保护并在其后脱除保护基。
在式中R1和R2中任意一个也是烷氧基的以上方法a)中，这个基团可以在相同反应中脱烷基化，给出一种式中R1和/或R2是羟基的对应式I化合物。
在以下方案1-10中描述了按照以上方法的本发明的若干代表性
方案2
方案3 方案4
方案5 方案6
方案7 方案8
方案10
可以很容易的用标准的药学实验来检测待测化合物的活性概况。以下简述一些代表性的实验方法，也包括本发明代表化合物的数据。可以用各种分析方法(除外放射配体结合分析)检测化合物的雌激素受体激动剂以及拮抗剂活性。通常，雌激素受体激动剂活性通过与参照雌激素(例如17β-雌二醇、17α-乙炔，17β雌二醇、雌酮、二乙基己烯雌酚等)对比来检测。雌激素受体拮抗剂活性检测的方式通常是，将待测化合物与参照雌激素一起处理的结果与参照雌激素单独处理的结果相对比。SERMs的标准药动学实验方法在US Patent 4,418,068以及5,998,402中有提供，此处引用作为参考。
ERα和ERβ的结合亲合力评价用常规的放射配体结合分析方法，对本发明的代表性实例与17β-雌二醇竞争ERα和ERβ的能力进行评价。该实验可以来检测对ERα和ERβ受体的相对结合亲和力。所用方法简述如下。
用于结合选择性特征分析的受体提取物的制备。以全长cDNA为模板，用含有适当限制性位点的引物进行PCR，得到配体结合域(此处为方便将其定义为DNA结合域下游的所有序列)，其中的引物使所扩增片段适于亚克隆，同时保持正确的表达读码框。这些模板包含人ERα的M250-V595[Green等，Nature 320134-9(1986)]以及人ERβ的M214-V530[Ogawa等，Biochemical&Biophysical Research Communicat ions243122-6(1998)]。将人ERβ克隆入pET15b，产生带有C-末端标签的Nco1-BamH1片段。人ERα的克隆方法与ERβ相同，只是在其N-末端加了His标签。所有构建体的序列均通过双链的完整测序进行验证。
BL21(DE3)细胞用于表达人蛋白。通常，将10ml的过夜培养物接种于1L含100μg/mL氨苄青霉素的LB培养基中。37℃培养过夜后，加入终浓度为1mM的IPTG，继续在25℃培养2小时。然后，通过离心收集细胞(1500×g)，沉淀用100mL 50mM Tris-CI(pH7.4)，150mMNaCI洗涤并重悬。细胞通过French压力12000psi两次而裂解。裂解物通过在4℃ 12,000×g离心30min而变澄清，然后贮存于-70℃。
提取物的特异[3H]-雌二醇结合评价。添加有1mM EDTA的Dulbecco’s磷酸缓冲盐(Gibco，1×终浓度)作为分析缓冲液。为优化分析中使用的受体量，将3H-17β雌二醇(New England Nuclear；终浓度＝2nM)±0.6μM二乙基己烯雌酚和100μL各种稀释度的E.Coli裂解物加入高结合遮盖微量滴定板(EG & G Wallac)。最终的分析体积是120μL并且DMSO的浓度≤1％。室温孵育5-18小时后，吸出未结合的物质，然后用大约300μL的分析缓冲液洗板3次。洗涤后，加入135μL的闪烁鸡尾酒((Optiphase Supermix，EG & G Wallac)，将板封闭，振动至少5分钟，使闪烁液与残留的洗液混合。最后，用液体闪烁计数仪分析结合的放射活性(EG & G Wallac Microbeta Plus)。
在确定能提供最大特异结合的每一受体制备物的稀释度后，通过用受体制备物的各种稀释液评价未标记的17β-雌二醇的IC50，进一步优化分析。每种受体制备物的最终的工作稀释度选定为其对未标记的17β-雌二醇的IC50是2-4nM。
配体结合竞争实验。待测化合物先溶解于DMSO，结合分析中DMSO的终浓度≤1％。每种待测化合物的8个稀释度作为3H-17β雌二醇的未标记的竞争剂。通常，同时检测对人ERα和ERβ的一组化合物稀释度。结果通过DPM对待测化合物浓度的图来表示。为了对剂量应答曲线进行拟合，将4个参数的逻辑模型对转化的加权数据进行拟合，IC50定义为使最大的3H-雌二醇结合降低50％的化合物浓度。
本发明代表性实例对ERα和ERβ的结合亲合力(通过IC50检测)如表(1)所示。

上述标准药动学实验获得的结果表明本发明的化合物能与雌激素受体的两种亚型结合。IC50s通常低于ERβ的IC50，表明这些化合物优选是ERβ选择性配体，但仍对ERα有活性。本发明的化合物基于，至少部分，其受体亲合性选择图谱，表现出一定范围的活性。由于本发明的化合物与ER-β结合的亲合力高于与ER-α的亲合力，所以可以用于治疗或抑制可以通过ER-β调节的疾病。另外，由于每种受体-配体复合物是独特的，所以其与各种共调节蛋白的相互作用也是独特的，本发明的化合物依赖于细胞环境，会表现出不同的预料不到的活性。例如，很有可能，在一些细胞类型，化合物作为雌激素受体激动剂而在另一些组织作为雌激素受体拮抗剂。具有此活性的化合物有时被称为SERMs(选择性雌激素受体调节剂)。然而，与许多雌激素不同，许多SERMs不引起子宫湿重的增加。这些化合物在子宫是抗雌激素的，能完全拮抗雌激素受体激动剂在子宫组织的营养效应。然而，这些化合物在骨组织、心血管和中枢神经系统作为雌激素受体激动剂。由于这些化合物的组织选择性，所以可以用于治疗或抑制哺乳动物疾病或综合征，这些疾病和综合征由雌激素缺乏(在一些组织如骨或心血管)或过量(在子宫或哺乳动物腺体)引起。而且，本发明的化合物还有在一种受体型表现为雌激素受体激动剂而在另一种受体型表现为雌激素受体拮抗剂的特性。例如，已表明化合物可以通过ERβ拮抗17β-雌二醇的作用，而通过ERα表现雌激素受体激动剂的作用[Sun等，Endocrinology 140800-804(1999)]。这样的ERSAA(雌激素受体选择性激动剂拮抗剂)活性在该系列化合物中表现出药代动力学不同的雌激素活性。
金属硫蛋白IImRNA的调节如Harris[Endocrinology 142645-652(2001)]所述，雌激素在Saos-2细胞通过ERβ而非ERα上调金属硫蛋白IImRNA。可以将从上述实验得到的结果与下述实验结果(ERE报告实验方法)相结合而产生本发明化合物的选择性图谱(还参见WO 00/37681)。
在MCF-7乳腺癌细胞用ERE-报告实验方法来评价待测化合物待测化合物的贮存液(通常0.1M)用DMSO制备，然后用DMSO稀释10-100倍，制备1或10mM的工作溶液。DMSO贮存液贮存于4℃(0.1M)或-20℃(＜0.1M)。MCF-7细胞用生长培养基[含10％(v/v)热灭活胎牛血清、1％(v/v)青-链霉素以及2mM glutaMax-1的D-MEM/F-12]传代，一周两次。将细胞置于通气的瓶中，在5％CO2/湿度为95％的孵箱中37℃培养。治疗前一天，细胞按照25,000细胞/孔置于有生长培养基的96孔板，37℃培养过夜。
细胞用50μl/孔1∶10稀释的腺病毒5-ERE-tk-荧光素酶在实验培养基[含10％(v/v)热灭活胎牛血清、1％(v/v)青-链霉素、2mMglutaMax-1以及1mM的丙酮酸钠的无酚红的D-MEM/F-12]中感染2hr。然后用150μl的实验培养基洗涤一次。最后，细胞用150μl/孔的载体(≤0.1％ v/v DMSO)或化合物处理，每次处理8孔的复孔，化合物稀释≥1,000倍，加入实验培养基在37℃培养24hr。
待测化合物单独或与0.1nM的17β-雌二醇组合(EC80；雌激素受体拮抗剂模式)的起始筛选在1μM的单剂量下进行。每个96孔板还包含一个载体对照组(0.1％ v/v DMSO)和一个雌激素受体激动剂对照组(0.1或1nM的17β-雌二醇)。剂量应答实验以雌激素受体激动剂和/或雌激素受体拮抗剂模式对活性化合物进行，对数值升高从10-14到10-5M。从这些剂量应答曲线可以分别得出EC50和IC50值。每个处理组的终孔包含5μl的3×10-5M ICI-182,780(终浓度10-6M)，作为雌激素受体拮抗剂对照。
处理后，细胞用25μl/孔的1×细胞培养裂解剂(PromegaCorporation)在摇床上振摇裂解15min。将细胞裂解物(20μl)转移至96孔发光计数板，用100μl/孔的荧光素酶底物(Promega Corporation)和MicroLumat LB 96 P发光计(EG & G Berthold)检测荧光素酶活性。加入底物之前，对每孔进行1秒的背景检测。加入底物，1秒延迟后，检测10秒的荧光素酶活性。将数据从发光计转移到Macintosh个人电脑，用JMP软件进行分析(SAS研究所)；该程序可以从每孔的荧光素酶检测中除去背景读数，计算出每次处理的平均和标准差。
荧光素酶数值取对数，并用Huber M-估计量使极端转化值的权数降低。用JMP软件来分析转化和加权的数据，进行单向ANOVA(Dunnett’s检验)。将化合物处理与雌激素受体激动剂模式的载体对照结果或雌激素受体拮抗剂模式的阳性雌激素受体激动剂对照结果(0.1nM的17β-雌二醇)进行对比。对于起始的单剂量实验，如果化合物处理结果与对照明显不同(p＜0.05)，则结果按17β-雌二醇对照的相对百分比来报告[即((化合物-载体对照)/(17β-雌二醇对照-载体对照))×100]。JMP软件还用于从非线性剂量应答曲线确定EC50和/或IC50值。
子宫营养活性的评价可以按照下述标准药动学实验方法来检测待测化合物的子宫营养活性。
方法1性不成熟(18天龄)的Sprague-Dawley大鼠获自Taconic，无限制的给予酪蛋白为基础的食物(Purina Mills 5K96C)和水。19，20和21日，通过皮下注射给予17α-乙炔基-17β-雌二醇(0.06μg/大鼠/天)、待测化合物或载体((50％DMSO/50％ Dulbecco′s PBS)。为分析雌激素受体拮抗剂，将化合物与17α-乙炔基-17β-雌二醇(0.06μg/大鼠/天)同服。每组6只大鼠，在CO2窒息和气胸后大约24小时安乐死。取出子宫，剥离附着的脂肪及表达内部液体后，称重。组织样品也可以速冻后，分析基因表达(如补体因子3mRNA)。
方法2性不成熟(18天龄)的129SvE小鼠获自Taconic，无限制的给予酪蛋白为基础的食物((Purina Mills 5K96C)和水。22，23，24和25日，通过皮下注射给予化合物或载体(玉米油)。每组6只大鼠，在CO2窒息和气胸后大约6小时安乐死。取出子宫，剥离附着的脂肪及表达内部液体后，称重。本发明的代表性化合物的结果见下表(2)。

骨质疏松及脂类调节的评价(心脏保护)卵巢切除或假手术1天后的雌性Sprague-Dawley大鼠获自Taconic Farms(体重范围240-275g)，将其按3或4只大鼠/笼，置于12/12(明/暗)循环的屋子，随意给予食物(Purina 5K96C大鼠粮)和水。所有处理均在动物到达后1天开始，按照所述每周7天给予处理，持续6周。一组年龄相应的假手术后大鼠不进行任何处理，作为每组研究的完整的雌激素去势对照。
所有待测化合物均按定义的浓度在50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1x Dulbecco′s磷酸盐(GibcoBRL，Grand Island，NY)的载体中制备，以便处理的体积是0.1mL/100g体重。17-β-雌二醇溶于玉米油中(20μg/ml)，通过皮下注射给予，0.1ml/大鼠。三周后，按照组平均体重，对剂量进行调整，通过皮下注射给予。
起始处理后5周，研究终止前1周，对每只大鼠进行骨质盐密度(BMD)评价。用XCT-960M(pQCT；Stratec Medizintechnik，Pforzheim，Germany)，对麻醉大鼠进行近端胫骨的总密度及小梁密度检测。检测如下进行扫描前15分钟，每只大鼠腹膜内注射45mg/kg氯氨酮，8.5mg/kg甲苯噻嗪以及1.5mg/kg乙酰丙嗪进行麻醉。
右后肢通过直径为25mm的聚碳酸酯的管子，然后按照踝关节90°角，膝关节180°角置于丙烯酸框架上。聚碳酸酯的管子附着于滑动的平台上，使其与pQCT的孔径相垂直。对平台进行调整，使股骨的远端及胫骨的近端位于扫描范围内。二维扫描长度为10mm，行分辨率为0.2mm，扫描结果出现在监控器上之后，定位于胫骨的远端。pQCT扫描从该点的3.4mm远处开始。pQCT扫描厚度是1mm，三维象素值是0.140mm，每个薄层由145个投影组成。
PQCT扫描完成后，图象显示在监控器上。勾画出包含胫骨但排除腓骨的目的区域。用迭代算法以数学方式去除软组织。所保留骨的密度(总密度)以mg/cm3方式报告。同心螺旋的骨的外层55％以数学方式去除。所保留骨的密度(小梁密度)以mg/cm3方式报告。
BMD评价后一周，大鼠通过CO2窒息和气胸安乐死，收集血液进行胆固醇分析。取出子宫，剥离附着的脂肪及表达腔液后，称重。用Boehringer-Mannheim Hitachi 911临床分析仪，胆固醇/HP试剂盒，分析总胆固醇。用Dunnet’s检验单向变异分析，对统计数字进行对比。
抗氧化物活性评价从屠宰场取来猪的主动脉，洗涤，转入冰的PBS，收集主动脉内皮细胞。为收集细胞，将主动脉的肋间血管及一端结扎。将新鲜的、无菌过滤的0.2％的胶原酶(Sigma Type I)加入血管，结扎另一端，形成封闭系统。然后，将主动脉在37℃孵育15-20分钟，随后收集胶原酶溶液，在2000×g离心5min。将沉淀重悬于7mL的内皮细胞培养液中，后者由添加有去除炭的FBS(5％)，NuSerum(5％)，L-谷氨酰胺(4mM)，青霉素-链霉素(1000U/ml，100ug/ml)以及庆大霉素(75lig/ml)的DMEM/Ham’s F12培养基组成。接种于100mm的培养皿中，在5％的CO2，37℃下孵育。20min后，细胞用PBS漂洗，然后加入新鲜培养基，24小时后，重复操作一次。大约1周后，细胞融合成片。内皮细胞常规1周喂养两次，融合后，用胰蛋白酶消化，按1∶7的比例接种。细胞介导的12.5μg/ml的LDL的氧化在待测化合物(5μM)存在的条件下，37℃进行4小时。结果以氧化过程受抑制的百分比表示，用分析自由醛的TBARS(硫代巴比妥酸反应物)检测[Yagi，BiochemicalMedicine 15212-6(1976)]。
孕酮受体mRNA调节标准药学实验方法该方法可用于评价本发明化合物的雌激素或抗雌激素活性[Shughrue，et al.，Endocrinology 1385476-5484(1997)]。本发明代表性化合物的数据如下表(3)所示。

大鼠热潮红实验方法待测化合物对热潮红实验的影响可以用标准的药学实验方法评价，该方法检测待测化合物减缓尾部皮肤温度升高(吗啡成瘾的大鼠急性戒断纳洛酮时发生)的能力[Merchenthaler，et al.，Maturitas 30307-16(1998)]。也可以通过将待测化合物与对照雌激素共同服用来检测雌激素受体拮抗剂活性。
分离的大鼠主动脉环的血管舒缩功能评价将Sprague-Dawley大鼠(240-260克)分为4组1.正常未进行卵巢切除术(完整)2.卵巢切除，载体处理的3.卵巢切除，17-β-雌二醇处理的(1mg/kg/day)4.卵巢切除，待测化合物处理(各种剂量)在大约处理前3周，将动物的卵巢切除。每种动物通过胃肠管饲法，给予悬于含1％吐温-80的双蒸去离子水中的17-β-雌二醇硫酸盐(1mg/kg/day)或待测化合物。载体处理的动物给予药物处理组使用的适当体积的载体。
CO2吸入和放血后，使动物安乐死。快速取出胸主动脉，置于37℃具有下列组成的生理溶液中(mM)NaCl(54.7)，KCl(5.0)，NaHCO3(25.0)，MgCl22H2O(2.5)，D-葡萄糖(11.8)以及CaCl2(0.2)充以CO2-O2，95％/5％，最终pH值为7.4。从外表面除去外膜，将血管切成2-3mm长的环。将环悬于10mL的组织电解槽，环的一端附于电解槽的底部，另一端连接于力转导器。给予环1克的静止张力。环平衡1小时后，获取信号，进行分析。
平衡后，将环暴露于浓度递增的脱羟肾上腺素(10-8到10-4)，记录张力。然后，将电解槽用新鲜的缓冲液漂洗3次。洗涤完后，将200mM的L-NAME加于组织电解槽，平衡30min。然后重复脱羟肾上腺素浓度应答曲线。
心脏保护活性评价从Taconic农场得到载脂蛋白E-缺陷的C57/B1J(apo E KO)小鼠。所有的动物操作都严格按照IACUC的指南进行。卵巢切除的雌性apo EKO小鼠，4-7周龄，置于鞋盒样的笼子中，不限制食物和水。动物按体重随机分组(n＝12-15只小鼠每组)。按照Precise-dosingProtocol，在饮食中给动物加入待测化合物或雌激素(17-β-雌二醇硫酸盐，1mg/kg/day)，每周检测所消耗饮食的量，并按照动物的体重相应的调节剂量。所用饮食为Purina制备的Western-型饮食(57U5)，含有0.5％的胆固醇、20％的猪油以及25IU/KG维生素E。动物按照此范例饲养12周。对照动物给予Western-型饮食，不给予化合物。实验结束后，动物安乐死，取其血浆样品。心脏进行原位灌注，先用生理盐水，再用中性平衡的10％福尔马林溶液。
血浆脂类和脂蛋白分析可以选用Boehringer Mannheim和WakoBiochemicals的酶分析试剂盒，用Boehringer-Mannheim Hitachi 911分析仪检测总胆固醇和甘油三酯。血浆脂蛋白的分离和定量用FPLC体积分级分离进行。简言之，即过滤50-100ml的血清，加入系列连接的Superose 12和Superose 6柱，用1mM的EDTA钠盐及0.15M的NaCl以恒定的流速进行洗脱。用Waters MillenniumTM软件对每个曲线的代表VLDL、LDL及HDL的区域进行整合，然后用总胆固醇值乘以各自色谱峰的相对百分区域，对脂蛋白组分进行定量。
对于主动脉粥样硬化的定量，先仔细分离主动脉，然后置于福尔马林固定液48-72小时。用Oil Red O染色，识别粥样硬化损伤。血管进行简单的脱色，然后用配有Sony 3CCD摄像系统并用IMAQConfiguration Utility(National Instrument)作为图象捕捉软件的NikonSMU800显微镜成像。然后用定制的阈值应用软件包(ColemanTechnologies)沿着主动脉弓对损伤进行定量。用程序的阈值功能，对血管进行自动的损伤评价，尤其是主动脉弓的头臂干近端到左侧锁骨下动脉的远端之间的区域。主动脉粥样硬化损伤的数据严格按损伤占定义腔区域的百分比表示。
认知增强的评价卵巢切除的大鼠(n＝50)用8-臂基本臂迷宫进行驯服，连续5天，每天10min。驯服和检测前，禁水。将100μl的水置于每个臂的末端，作为再增强。基本臂迷宫里的胜利-转换目标通过允许动物接近一个诱饵臂而完成。饮水后，动物出臂，重新进入中央室，在此动物可以接触曾经进过的臂或新臂。当动物选择进入新臂时，记录为正确的应答。每个动物每天进行5次实验，持续3天。最后一次认知实验后，将动物分为以下4组1.阴性对照用10％的DMSO/芝麻油载体每天1次注射，共6天(1ml/kg，SC)2.阳性对照用17β-雌二醇苯甲酸酯注射2天，第二次注射4天后进行检测(每只大鼠10μg/0.1ml的17β-雌二醇苯甲酸酯)3.雌二醇每天注射17β-雌二醇，共6天(20μg/kg，SC)4.待测化合物每天注射，共6天(剂量不同)所有的注射均在认知最后一天检测后开始。组1，3和4的最后一次注射在检测工作记忆前2小时进行。
工作记忆检测是延迟的非配对样品目标(DNMS)，其利用15，30或60秒的延迟。该目标是认知目标的变量，其中大鼠置于中央室，如前允许进入一个臂。当大鼠在穿越第一个臂的途中时，打开第二个臂，然后要求大鼠选择该臂。当大鼠在在穿越第二个臂的途中时，两个门都关闭，延迟开始。一旦延迟届时，原先的两个门及第三个新的门同时打开。当动物接着穿越第三个新的臂时，记录为正确应答。当动物穿越第一或第二个门时，记录为错误的应答。每个动物在3个延迟间歇期的每一次接受5次实验，每个动物共计进行15次实验。
对胸膜炎影响的评价按照Cuzzocrea[Endocrinology 1411455-63(2000)]所述方法，对减轻实验诱导大鼠胸膜炎症状的能力进行评价。
抗谷氨酸诱导细胞毒性的保护的评价(神经保护)本发明化合物的神经保护活性可以用谷氨酸攻击的体外药学实验方法进行评价[Zaulyanov等，Cellular & Molecular Neurobiology 19705-18(1999)；Prokai等，Journal of Medicinal Chemistry 44110-4(2001)]。
乳房端芽实验方法的评价雌激素对于全部导管的延伸以及乳腺导管的分支是必须的，随后的叶泡末端芽的发育则受孕酮的影响。在该实验方法中，按照下述标准药学实验方法对本发明化合物的乳腺营养活性进行了评价。将28天龄的Sprague-Dawley大鼠(Taconic Farms，Germantown，NY)的卵巢切除，让其休息9天。将动物置于12/12(明/暗)循环的屋子，给予酪蛋白为基础的Purina Laboratory Rodent Diet 5K96(Purina，Richmond，IN)，对水不加限制。然后，通过皮下注射给予大鼠载体(50％DMSO(JTBaker，Phillipsburg，NJ)/50％1xDulbecco′s磷酸盐(GibcoBRL，GrandIsland，NY)、17β-雌二醇(0.1mg/kg)或待测化合物(20mg/kg)连续6天。最后3天，还通过皮下注射给予大鼠孕酮(30mg/kg)。第7天，动物安乐死，切除乳房脂垫。对脂垫进行酪蛋白激酶IImRNA分析，后者是末端芽体的增殖标志。酪蛋白激酶IImRNA的分析用TaqmanGold(PE Applied Biosystem)方法通过实时RT-PCR进行。用酪蛋白激酶II特异引物对(5′引物，CACACGGATGGCGCATACT；3′引物，CTCGGGATGCACCA TGAAG)，每个样品分3个孔，对共计50ng的RNA进行分析，所用探针为定制的探针(TAMRA-CGGCACTGGTTTCCCTCACATGCT-FAM)。酪蛋白激酶IImRNA水平用PE Applied Biosystem提供的包含在每个样品反应所用引物和探针中的18s核糖体RNA进行校准。本发明一个实例的结果见下表(表(4))。

HLA大鼠标准药学实验方法对炎性肠道疾病的评价本发明的代表性化合物用HLA大鼠标准药学实验方法进行评价，在大鼠模仿人的肠道疾病。以下对所用方法及所得结果进行简述。从Taconic获得雄性HLA-B27大鼠，不限制食物((PMI Lab diet 5001)和水。给予大鼠每日1次(口服)载体(2％吐温-80/0.5％甲基纤维素)或实例1d(10mg/kg)，持续26日。每日观察粪便的质量，并按下述公式分级腹泻＝3；软便＝2；正常粪便＝1。表(5)显示，在使用例1d后，粪便质量有所改善。在实验末，收集血清，贮存于-70℃。结肠的一部分用于组织学分析，，另一部分进行髓过氧化物酶活性分析。

组织学分析将结肠组织浸于10％中性平衡的福尔马林溶液。每个结肠标本分为4个样品进行分析。福尔马林固定的组织在Tissue Tek真空过滤加工器((Miles，Inc；West Haven，Connecticut)中进行石蜡包埋。然后切成5μm厚，用苏木精和伊红(H&E)染色，按照调整的Boughton-Smith方法进行盲法组织学评价。计分完成后，样品去盲，将数据列表，用ANOVA线性模型多重平均对照进行分析。对结肠组织进行一些疾病指征的分析，给出相对分值。如表(6)所示，例1d在减轻组织损伤方面有效。

两个关节炎模型的评价Lewis大鼠佐剂诱导的关节炎分析。60只，雌性，12周龄的Lewis大鼠按照标准的操作方法进行饲养。随意给予标准配制的食物和水。每个动物通过笼上的卡片而识别，卡片上标明组别和动物号。每个大鼠号用不能拭除的墨水标记在尾部。在实验前至少10-21天，将大鼠麻醉，用标准的无菌手术进行卵巢切除术。
用弗氏完全佐剂(Sigma Immuno Chemicals，St.Louis，MO)来诱导关节炎，每ml包含热灭活的结核分枝杆菌1mg干粉，0.85ml矿物油及0.15ml二缩甘露醇油酸Lot No.084H8800。
以下是两个实验方法的例子。抑制实验方法给30只大鼠在尾巴的基部皮内注射0.1ml的弗氏完全佐剂。将动物随机分为4组，每组6只大鼠。每天，给予动物载体(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/50％1xDulbecco′s磷酸盐(GibcoBRL，Grand Island，NY)或待测化合物(10mg/kg，皮下注射)。所有大鼠均在第1天开始处理。本发明的代表性化合物的数据见表(7)。
处理实验方法给30只大鼠在尾巴的基部皮内注射0.1ml的弗氏完全佐剂。将动物随机分为4组，每组6只大鼠。每天，给予动物载体(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/50％1xDulbecco′s磷酸盐(GibcoBRL，Grand Island，NY)或待测化合物(10mg/kg，皮下注射)。所有大鼠均在佐剂注射后第8天开始处理。本发明的代表性化合物的数据见表(8)，(9)和(10)。
用Abacus Concepts Super ANOVA(Abacus Concepts，Inc.，Berkeley，CA)进行统计分析。所有的目的参数均用Duncan’s新复极事后检验进行组间变异分析。数据以平均±标准差(SD)表示，p＜0.05视为相差显著。
关节炎的严重程度每天按照下述疾病指标进行监测后爪红斑、后爪肿胀、关节触痛以及活动和姿势。用0-3的整数来定量后爪的红斑水平(0＝正常爪，1＝轻微红斑，2＝中度红斑，3＝严重红斑)以及肿胀(0＝正常爪，1＝轻微肿胀，2＝中度肿胀，3＝严重肿胀)。每天的最大值是12。
实验末，大鼠用CO2安乐死，尸体解剖时取下后爪，在10％的平衡福尔马林液中固定，跗关节脱钙，用石蜡包埋。组织切片用苏木精和伊红或番红(Saffranin)-O-快速绿染色。
给玻片加密，使检查者不知道哪个是处理组。用滑膜增生、炎细胞浸润以及血管翳形成等对跗关节的滑膜组织进行评价[Poole和Coombs，International Archives of Allergy & Applied Immunology 5497-113(1977)]，简况如下。

另外，如下表所述用Mankin′s组织分级系统[Mankin等，Journal ofBone & Joint Surgery-American Volume 53523-37(1971)]对关节软骨和关节骨进行评价





HLA-B27大鼠关节炎模型评价。本发明的代表性化合物用模拟人关节炎的HLA-B27大鼠标准药学实验方法进行评价。以下简述所用方法和所得结果。雄性HLA-B27大鼠(8-10周龄)获自Taconic，不限制食物((PMI Lab diet 5001)和水。大鼠每日口服载体(2％吐温-80/0.5％甲基纤维素)或待测化合物(10mg/kg)，连续26天。关节评分和组织学检测如上Lewis大鼠佐剂诱导关节炎模型。本发明的代表性化合物的实验数据如下表(11)所述。

体内癌发生模型评价本发明化合物治疗和抑制各种恶性肿瘤或过度增殖紊乱的能力可以用标准药学实验方法进行评价，后者很容易从文献中获得，包括以下两种方法。
乳腺癌 无胸腺nu/nu(裸)小鼠获自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)。肿瘤细胞注射前1天，给动物移植定时释放的含有0.36-1.7mg17β-雌二醇的颗粒(60或90天释放，InnovativeResearch of America，Sarasota，FL)或安慰剂。颗粒用10G精密套针皮下注射到肩胛骨内区域。随后，给大鼠的乳腺组织皮下注射1×10-7MCF-7细胞或1×10-7BG-1细胞。细胞与等体积的基质胶混合，后者是一种基底膜基质制备物，可以促进肿瘤建立。待测化合物可以通过在肿瘤细胞移植后1天(抑制组)给予或在肿瘤已达到一定体积后给予(治疗组)而进行评价。每天通过腹膜内或口服给予化合物，化合物处于含1％生理盐水的载体中。每3或7天，评价肿瘤大小。
结肠癌 治疗或抑制结肠癌的能力可以按照Smirnoff[OncologyResearch 11255-64(1999)]的方法进行评价。
两种体内实验方法的神经保护评价长爪沙鼠(蒙古沙鼠，Mongolian gerbil)的瞬时全身缺血。用下述实验方法对待测化合物在预防或治疗氧缺失/再灌注引起的脑损伤方面的作用进行评价。
雌性长爪沙鼠(60-80g；Charles River Laboratories，Kinston，NY)喂养于Wyeth-Ayerst动物看护设施(AAALAC认证)，12小时明/暗循环，自由接触自来水以及低-雌激素酪蛋白饮食(Purina；Richmond，IN)。驯化后(3-5天)，用isoflurane(与氧的2-3％混合)将长爪沙鼠麻醉，切除卵巢(Day 0)。次日晨(Day 1)开始，每天通过皮下注射给予载体(10％ETOH/玉米油)，17β-雌二醇(1mg/kg，sc)或待测化合物。在Day 6，用异氟烷将长爪沙鼠(n＝4-5/组)麻醉，通过颈中线切开，观察颈动脉，用非创伤性微血管瘤钳夹闭两侧颈动脉5分钟。夹闭后，去除微血管瘤钳，使大脑再灌注，用伤口钳封闭颈部切口。全身缺血手术前，所有动物禁食过夜，这一步骤可以使缺血损伤较一致。在Day 12，将长爪沙鼠暴露于损伤剂量的CO2，将脑组织在干冰上冷冻，贮存于-80℃。本实验的动物操作均得到了Wyeth-Ayerst Research的Radnor/Collegeville Animal Care and Use Committee(RACUC/CACUC)的同意。
神经元保护的程度通过原位神经颗粒素(neurogranin)mRNA杂交分析进行评价。简言之，即在明胶包被的玻片上收集20μm的冠状恒冷箱切片，在处理时，将干燥的玻片盒预热至室温，玻片用4％的低聚甲醛固定，醋酸酐处理，然后用氯仿和乙醇脱脂脱水。处理过的含有组织的切片与200μl(6×106DPM/玻片)的神经颗粒素的反义或正义(对照)核酸探针(35S-UTP-标记NG-241；99-340碱基)进行杂交。将玻片置于有湿度的玻片盒内，在50％的甲酰胺杂交液中，55℃过夜孵育，不开盖。次晨，用玻片架收集玻片，浸入2×SSC(0.3M NaCI，0.03M柠檬酸钠；pH7.0)/10mM DTT，用RNase A处理(20μg/ml)，在1×SSC中67℃洗涤(2×30min)除去非特异标记。脱水后，玻片对BioMax(BMR-1；Kodak)X-光片过夜。
神经颗粒素杂交信号的水平可以用来分析损伤后CA1区域的神经元损伤程度，评价17β-雌二醇及实验化合物的有效性。之所以选择神经颗粒素mRNA，是因为它在包括CA1的海马回神经元高表达，而在这些脑区域的胶质和其他细胞无表达。因而，检测出现的神经颗粒素mRNA的数量可以反映存活的神经元。神经颗粒素杂交信号的相对光密度检测获自带有计算机图象分析系统的胶片放射自显影(C-ImagingInc.，Pittsburgh，PA)。对来自每只动物的6个切片(40μm厚)的结果进行平均，然后统计分析。数值以平均±SEM的方式报告。用单向变异分析来检验神经颗粒素mRNA水平的差异，结果部分的非差异表述提示p＞0.05。
小鼠的中脑动脉夹闭 神经保护可以按照Dubal[参见，Dubal，等，Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica 981952-1957(2001)，Dubal等，Journal of Neuroscience 196385-6393(1999)]所述实验方法进行评价。
排卵抑制标准药学实验方法本方法用于检测实验化合物能否抑制或改变排卵时间。也可以用来评价卵母细胞排卵的数量[Lundeen等，J Steroid Biochem Mol Biol 78137-143(2001)]。
基于标准药学实验方法所得结果，本发明的化合物是雌激素受体调节剂，可以用于至少部分由雌激素不足或过量介导的或者可以用雌激素制剂治疗或抑制的体征、失调或疾病状态的治疗或抑制。本发明的化合物尤其可用于治疗围绝经、绝经或绝经后病人，后者内源雌激素大大减少。绝经通常定义为最后一次自然月经期，以卵巢功能的停止为特征，导致血流中循环雌激素的显著减少。此处所述绝经还包括雌激素产生减少的状态，后者可以由外科手术、化学或导致卵巢功能成熟前减少或停止的疾病引起。
本发明化合物还可以用于治疗或抑制其他雌激素不足的症状包括热潮红、阴道或阴门萎缩，萎缩性阴道炎、阴道干燥、瘙痒、性交疼痛、排尿困难、尿频、尿失禁及尿道感染。其他生殖道用途包括功能不良子宫出血的治疗或抑制。化合物还可用于治疗或抑制子宫内膜异位症。
化合物在脑部也有活性，因而可以用于治疗或抑制阿尔茨海默氏病、认知能力降低、性欲降低、老年痴呆、神经退行性变紊乱、抑郁、焦虑、失眠、精神分裂症以及不育。本发明的化合物还可以用于治疗或抑制良性或恶性异常组织生长包括肾小球硬化、前列腺肥大、子宫平滑肌瘤、乳腺癌、硬皮病、纤维瘤病、子宫内膜癌、多囊卵巢综合症、子宫内膜息肉、良性乳腺疾病、子宫内膜异位症、卵巢癌、黑色素瘤、前列腺癌、结肠癌、CNS癌如神经胶质瘤或astioblastomia。
本发明的化合物可保护心脏，是抗氧化剂，可用于降低胆固醇、甘油三酯、Lp(a)及LDL水平；抑制或治疗高胆固醇血症、高脂血症、心血管疾病、粥样硬化、外周血管病、再狭窄及血管痉挛，抑制细胞导致的免疫介导血管损伤引起的血管壁损伤。本发明的化合物还可以用于治疗炎症或自身免疫病相关的紊乱，包括炎性肠道疾病(Crohn’s疾病、溃疡性结肠炎、原因不明结肠炎)、关节炎(风湿性关节炎、椎关节病、骨关节炎)、胸膜炎、缺血/再灌注损伤(如中风、移植排斥、心肌梗塞等)、哮喘、巨细胞动脉炎答、前列腺炎间质膀胱炎、葡萄膜炎、银屑病、多发性硬化、系统性狼疮红斑和脓毒。
本发明的化合物还可以用于治疗或抑制眼部疾病，包括白内障、葡萄膜炎和黄斑退行性变，还可以治疗皮肤疾病如老化、秃顶以及粉刺。
本发明的化合物还可以用于治疗或抑制代谢紊乱如脂类代谢的II型糖尿病、食欲紊乱(如神经性厌食和食欲过剩)。
本发明的化合物还可以用于治疗或抑制血液疾病如遗传性出血性毛细血管扩张、异常子宫出血以及对抗出血性体克。
本发明的化合物还可用于治疗疾病状态，其中闭经，如白血病、子宫内膜消融、慢性肾或肝脏疾病或凝血疾病或障碍。
本发明的化合物还可用作避孕制剂，尤其当与孕激素联用时。
当给予化合物来治疗或抑制某种特殊疾病或紊乱时，其有效剂量依赖于化合物的种类、给予方式、病情的状况及严重性以及各种与治疗个体相关的物理参数。本发明化合物口服的有效剂量为约0.1-1,000mg/天。优选约10-600mg/天，更优选约50-600mg/天，可以单次给予，也可以分两或三次。日用剂量因给予方式不同而不同。
可以选用任何能将活性化合物导入血流的给予方式，包括口服，通过植入体，胃肠外(包括静脉、腹膜内、关节内以及皮下注射)，直肠，鼻内，局部给药，眼部给药(经眼滴入)，阴道内给药以及经皮给药。
包含本发明活性化合物的口服制剂可以包含任何常规使用的口服剂型，包括片剂、胶囊、含剂、含锭、锭剂和口服液(悬液或溶液)。胶囊可以含有活性化合物与惰性填料和/或稀释剂如药学可接受的淀粉(如玉米、土豆或木薯淀粉)、糖类、人工甜化剂、粉状纤维素如晶状的和微晶纤维素、面粉、明胶、树胶等。使用的片剂制剂可以通过常规的压缩、湿成粒法和干成粒法以及使用药学可接受的稀释剂、结合剂、润滑剂、分解剂、表面修饰剂(包括表面活性剂)、悬浮或稳定剂包括但不局限于硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉、月桂基硫酸钠、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、藻酸、阿拉伯胶、黄素胶、枸橼酸钠、复合硅酸盐、碳酸钙、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨醇、磷酸氢二钙、硫酸钙、乳糖、白陶土、甘露醇、氯化钠、滑石粉、干淀粉和粉状糖。优选的表面修饰剂包括非离子和阴离子表面修饰剂。优选的表面修饰剂的示例包括但不局限于泊洛沙姆188、benzalkonium chloride、硬脂酸钙、西托硬脂乙醇、聚西托醇乳化蜡、山梨醇酯、胶质二氧化硅、磷酸盐、十二烷基硫酸钠、硅酸铝镁和三乙醇胺。此处的口服制剂可以利用标准的缓释或定时释放制剂来改变活性化合物的吸收。口服制剂也可以由服用的活性成分在水中或果汁中组成，含有需要的合适的溶剂或乳化剂。
有些情况下，可以将化合物以汽雾剂的形式直接给入呼吸道。
本发明的化合物还可以通过胃肠外或腹膜内方式给予。这些化合物作为自由基的溶液或悬浮液或药学可接受盐可以在与表面活性剂如羟基-丙基纤维素等适当混合的水中制备。分散剂可以在甘油、液态聚乙二醇及其在油中的混合物中制备。在常规贮存和使用条件下，这些制备物包含防腐剂来抑制微生物生长。
适于注射的药学形式包括无菌水溶液或分散剂和即席制备无菌水溶液或分散剂的无菌粉剂。无论何种情况，制剂必须是无菌的且是流动的以便于注射。在常规的加工和贮存条件下必须是稳定的，且能抗微生物如细菌和真菌污染。载体可以是溶剂或含有例如水、乙醇、多醇(如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)及其合适的混合物和蔬菜油。
此处的经皮给予包括所有通过体表或体内通道内层包括内皮和粘膜组织的给药方式。可以通过本发明的化合物或其药学可接受盐以乳液、面霜、泡沫、膜片、悬液、溶液和栓剂(直肠和阴道内)。
经皮给予可以通过使用含有活性化合物以及对该活性化合物具有惰性的载体的的经皮膜片(对皮肤无毒)来实施，制剂可以通过皮肤进入血液全身吸收。载体可以采用任何形式如霜剂和软膏、糊剂、胶体和咬合装置。这些霜剂和软膏可以是粘性液体或半固体乳剂(油包水或水包油)。也可以用由分散于石油或疏水石油中的含有活性组分的可吸收粉末组成的糊剂。可以使用各种咬合装置将活性组分释放于血液如半渗透膜，其中包含含有活性组分及或无载体的贮存库或含有活性组分的基质。还有其它已知的咬合装置。
栓剂可以由传统材料制得，包括可可油及或无添加的蜡来改变栓剂的熔点，以及甘油。水溶性的栓剂如各种分子量的聚乙二醇也可以使用。
以下描述本发明代表性实施例的制备。
中间体26-甲氧基-1-萘酚6-甲氧基-1-四氢萘酮(20.84g，118.3mmol)、10％Pd/C(10.1g)、和对繖花烃(500mL)的混合物回流加热60小时。将悬浮液冷却到室温、通过Celite过滤。固体用乙酸乙酯洗涤直至紫外线透明，合并的有机溶液用1N氢氧化钠(3×200mL)萃取。合并的水层用6N HCl调成酸性、用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥、过滤。溶剂蒸发、用硅胶柱(25％乙酸乙酯-己烷)精制，得到17.02g(83％)淡棕色固体状标题化合物。用第二硅胶柱(40-60％二氯甲烷-己烷)精制制备一种分析样品，得到一种白色固体mp 73-75℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.85(3H，s)，6.70-6.74(1H，m)，7.06(1H，dd，J＝2.34Hz，J＝9.15Hz)，7.20-7.27(3H，m)，8.02(1H，d，J＝9.12Hz)，10.01(1H，s)；MS(ESI)m/z 174(M-H)-。
分析C11H10O2计算值C75.84 H5.79实测值C75.56 H5.39中间体51-〔(2-溴-5-甲氧基苄基)氧〕-6-甲氧基萘向6-甲氧基萘酚(12.9g，74.1mmol)、5-甲氧基-2-溴苄醇(17.7g，81.6mmol)、和三苯膦(31.1g，119mmol)的THF(400mL)溶液中慢慢添加DEAD(20.6g，119mmol)的THF(50mL)溶液。溶液搅拌过夜、用硅胶浓缩、用硅胶柱(10％乙酸乙酯-己烷)精制，得到16.38g(59％)白色固体状标题化合物mp 83-84℃；1H NMR(CDCl3)δ3.78(3H，s)，3.92(3H，s)，5.25(2H，s)，6.75-6.77(2H，m)，7.12(1H，d，J＝2.44Hz)，7.15(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝9.28Hz)，7.24(1H，d，J＝2.93Hz)，7.32-7.36(2H，m)，7.48(1H，d，J＝8.79Hz)，8.27(1H，d，J＝9.23Hz)；MS(ESI)m/z 373/375([M+H]+)；分析C19H17BrO3计算值C61.14 H4.59实测值C60.97 H4.49中间体61-〔(2-溴-5-甲氧基苄基)氧〕萘标题化合物是通过使1-萘酚(5.7g，39.6mmol)与5-甲氧基-2-溴苄醇像对中间体5所述那样反应制备的，得到5.94g(44％)白色固体mp 74-75℃；1H NMR(CDCl3)δ3.78(3H，s)，5.28(2H，s)，6.77(1H，dd，J＝2.93Hz，J＝8.79Hz)，6.88(1H，d，J＝7.69Hz)，7.27(1H，d，J＝3.30Hz)，7.36-7.39(1H，m)，7.47-7.53(4H，m)，7.81-7.83(1H，m)，8.37-8.39(1H，m)；MS(ESI)m/z 343/345([M+H]+)；分析C18H15BrO2计算值C62.99 H4.41实测值C63.19 H4.30中间体84-溴-2-氟-5-甲基苯酚在0℃向2-氟-5-甲基苯酚(20.27g，160.7mmol)的乙腈(500mL)溶液中添加NBS(30.0g，168.7mmol)。混合物在0℃搅拌1小时。所得到的溶液吹脱溶剂、通过短硅胶柱过滤、以二氯甲烷洗脱，得到29.6g(90％)油状橙色固体。用硅胶柱精制(5％乙酸乙酯-己烷)制备一种分析样品，得到白色固体状标题化合物mp 44-46℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.22(3H，s)，6.93(1H，d，J＝9.28Hz)，7.40(1H，d，J＝10.74Hz)，10.05(1H，s)；MS(ESI)m/z 203/205([M-H]-)分析C7H6BrFO计算值C41.01 H2.95实测值C40.69 H2.80中间体91-溴-5-氟-4-甲氧基-2-甲基苯向4-溴-2-氟-5-甲基苯酚(29.6g，144.2mmol)和碳酸钾(30.0g，218mmol)的丙酮(500mL)混合物中添加碘甲烷(69.0g，486mmol)。所得到的悬浮液回流搅拌4小时。将反应混合物冷却到室温、倾入HCl(250mL 1N溶液)中、用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有机层用碳酸氢钠溶液洗涤、用硫酸钠干燥、过滤。溶剂蒸发、用硅胶柱精制(5％乙酸乙酯-己烷)，得到29.50g(93％)透明无色油状标题化合物1H NMR(CDCl3)δ2.33(3H，s)，3.85(3H，s)，6.82(1H，d，J＝8.79Hz)，7.23(1H，d，J＝10.25Hz)；MS m/z。
分析C8H8BrFO·0.3H2O计算值C42.81 H3.86实测值C42.38 H3.44中间体111-〔(2-溴-4-氟-5-甲氧基苄基)氧〕-6-甲氧基萘1-溴-5-氟-4-甲氧基-2-甲基苯(29.50g，134.7mmol)、NBS(25.18g，141.4mmol)和过氧化苯甲酰(8.14g，33.7mmol)在四氯化碳(500mL)中的混合物回流搅拌1小时。将反应冷却到室温、通过硅胶过滤、用二氯甲烷洗脱。蒸发溶剂，得到苄基溴中间体。这种浅黄色固体与6-甲氧基-1-萘酚(23.4g，134.7mmol)、碳酸钾(37.2g，269mmol)和丙酮(500mL)合并，回流搅拌12小时。冷却的反应混合物通过硅胶过滤、用丙酮洗脱、吹脱溶剂、用硅胶柱色谱法精制(10％～30％乙酸乙酯-己烷)，随后用乙酸乙酯研制，得到20.3g(39％)白色固体状标题化合物mp 138-142℃；1H NMR(CDCl3)δ3.85(3H，s)，3.92(3H，s)，5.22(2H，s)，7.75(1H，dd，J＝2.07Hz，J＝6.50Hz)，7.12-7.17(2H，m)，7.25-7.38(4H，m)，8.22(1H，d，J＝8.80Hz)；MS(ESI)m/z 391/393([M+H]+)；分析C19H16BrFO3计算值C58.33 H4.12实测值C58.15 H3.98中间体122，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯方法A1-〔(2-溴-5-甲氧基苄基)氧〕-6-甲氧基萘(13.03g，34.93mmol)、乙酸钠(10.3g，105mmol)、和二氯二(三苯膦)钯(II)(3.68g，5.25mmol)在DMA(600mL)中的混合物在120℃搅拌12小时。冷却的反应混合物倾入1500mL水中。粗固体产物过滤收集、用硅胶柱色谱法精制(5％～10％乙酸乙酯-己烷)，得到5.76g(56％)白色固体状标题化合物mp 175-178℃；1H NMR(CDCl3)δ3.85(3H，s)，3.92(3H，s)，5.25(2H，s)，6.75(1H，d，J＝2.20Hz)，6.93(1H，dd，J＝2.56Hz，J＝8.42Hz)，7.10(1H，d，J＝2.56Hz)，7.13(1H，dd，J＝2.56Hz，J＝9.15Hz)，7.41(1H，d，J＝8.79Hz)，7.63(1H，d，J＝8.42Hz)，7.74(1H，d，J＝8.79Hz)，8.14(1H，d，J＝9.15Hz)；MS(ESI)m/z 293([M+H]+)；分析C19H16O3计算值C78.06 H5.52实测值C78.01 H5.41中间体138-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯标题化合物是通过使1-〔(2-溴-5-甲氧基苄基)氧〕萘(3.05g，8.89mmol)按照方法A反应制备的，得到0.94g(40％)白色固体mp 128-130℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.82(3H，s)，5.31(2H，s)，6.96-7.02(2H，m)，7.47-7.53(2H，m)，7.60(1H，d，J＝8.55Hz)，7.82(1H，d，J＝8.48Hz)，7.86-7.91(1H，m)，7.94(1H，d，J＝8.65Hz)，8.12-8.15(1H，m)；MS(ESI)m/z 263([M+H]+)；分析C18H14O2计算值C82.42 H5.38实测值C81.98 H5.07中间体149-氟-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯标题化合物是通过使1-〔(2-溴-4-氟-5-甲氧基苄基)氧〕-6-甲氧基萘(10.3g，26.3mmol)按照方法A反应制备的，得到4.51g(55％)白色固体mp 201-206℃；1H NNR(CDCl3)δ3.93(3H，s)，3.94(3H，s)，5.23(2H，s)，6.84(1H，d，J＝8.24Hz)，7.11-7.13(2H，m)，7.40-7.443(2H，m)，7.64(1H，d，J＝8.60Hz)，8.11-8.13(1H，m)；MS(ESI)m/z 311([M+H]+)；分析C19H15FO3计算值C73.54 H4.87实测值C73.84 H4.60实施例1a6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇方法D在190℃，向HCl吡啶鎓(11g)中添加2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(2.48g，8.49mmol)。所得到的溶液在190℃搅拌3小时。将反应冷却到室温，收集于水(400mL)中。将固体产物过滤收集、用硅胶柱精制，得到2.09g(93％)浅黄色固体。这种材料用制备型逆相HPLC进一步精制，得到白色固体状标题化合物mp 248-252℃(分解)；1H NMR(DMSO-d6)δ5.19(2H，s)，6.70(1H，d，J＝2.44Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝8.30Hz)，7.04(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝8.79Hz)，7.08(1H，d，J＝2.44Hz)，7.34(1H，d，J＝8.79Hz)，7.62(1H，d，J＝8.30Hz)，7.76(1H，d，J＝8.79Hz)，7.96(1H，d，J＝9.28Hz)，9.63(1H，s)，9.78(1H，s)；MS(ESI)m/z 265([M+H]+)；MS(ESI)m/z 263([M-H]-)；分析C17H12O3·0.1H2O计算值C76.74 H4.62实测值C76.57 H4.25
实施例1b9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇标题化合物是通过使9-氟-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(1.29g，4.16mmol)与HCl吡啶鎓(30g)按照方法D反应制备的，得到1.01g(86％)褐色固体。这种材料用制备型逆相HPLC进一步精制，得到白色固体状标题化合物mp 230-231℃(分解)；1H NMR(DMSO-d6)δ5.19(2H，s)，6.89(1H，d，J＝8.73Hz)，7.04-7.10(2H，m)，7.35(1H，d，J＝8.65Hz)，7.64(1H，d，J＝12.48Hz)，7.77(1H，d，J＝8.75Hz)，7.97(1H，d，J＝8.90Hz)，9.89(1H，bs)，10.01(1H，bs)；MS(ESI)m/z 283([M+H]+)；MS(ESI)m/z 281([M-H]-)；分析C17H11FO3·0.75H2O计算值C69.03 H4.26实测值C69.34 H3.70实施例1c6H-二苯并[c，h]色烯-8-醇方法D标题化合物是通过使8-甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(0.73g，2.79mmol)与HCl吡啶鎓(10g)按照方法D反应制备的，得到0.63g(91％)白色固体mp 192-194℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.25(2H，s)，6.73(1H，bs)，6.83(1H，dd，J＝2.38Hz，J＝8.40Hz)，7.45-7.52(2H，m)，7.58(1H，d，J＝8.58Hz)，7.70(1H，d，J＝8.34Hz)，7.84-7.93(2H，m)，8.10-8.12(1H，m)，9.73(1H，s)；MS(ESI)m/z 247([M-H]-)；分析C17H12O2计算值C82.24 H4.87实测值C81.85 H4.86
中间体1512-溴-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯方法B在0℃，向2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(1.97g，6.75mmol)的乙腈(70mL)混合物中添加NBS(1.44g，8.10mmol)。混合物在0℃搅拌15分钟、倾入300mL水中、用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。合并的有机层用水洗涤、用硫酸钠干燥、过滤。蒸发溶剂、用硅胶色谱法精制，得到一种白色固体，用50mL异丙醇重结晶，得到1.77g(71％)白色结晶固体状标题化合物mp 96-98℃；1H NMR(CDCl3)δ3.86(3H，s)，3.98(3H，s)，5.24(2H，s)，6.74(1H，d，J＝2.444Hz)，6.93(1H，dd，J＝2.68Hz，J＝8.54Hz)，7.15(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝9.28Hz)，7.43(1H，d，J＝2.41Hz)，7.59(1H，d，J＝8.79Hz)，8.04(1H，s)，8.16(1H，d，J＝9.28Hz)；MS m/z；分析C19H15BrO3计算值C61.47 H4.07实测值C61.66 H3.89中间体1612-溴-9-氟-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯标题化合物是通过使9-氟-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(1.47g，4.74mmol)与NBS(1.01g，5.69mmol)按照方法B反应制备的，得到1.14g(62％)褐色固体mp 139-143℃；1H NMR(CDCl3)δ3.98(3H，s)，3.98(3H，s)，5.22(2H，s)，6.78(1H，d，J＝8.24Hz)，7.16(1H，dd，J＝2.56Hz，J＝9.15Hz)，7.37(1H，d，J＝12.08Hz)，7.43(1H，d，J＝2.56Hz)，7.92(1H，s)，8.14(1H，dd，J＝0.37Hz，J＝9.15Hz)；MS(ESI)m/z 387/389([M+H]+)；分析C19H14BrFO3计算值C58.63 H3.63实测值C58.82 H3.58
中间体172，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈方法C12-溴-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(8.33g，22.45mmol)、氰化锌(3.15g，26.9mmol)、和四(三苯膦)钯(O)(1.30g，1.12mmol)在DMF(100mL)中的混合物在120℃搅拌过夜。冷却的反应混合物倾入氯化铵溶液(600mL 1N溶液)中，用乙酸乙酯(4×300mL)萃取。合并的有机层用氯化铵溶液洗涤、通过硅胶层(silica plug)过滤、吹脱溶剂、用硅胶柱精制(40％～60％二氯甲烷-己烷)，得到一种黄色固体。这种固体用乙酸乙酯研制，得到5.43g(76％)黄色固体状标题化合物mp 161-165℃；1H NMR(CDCl3)δ3.86(3H，s)，3.98(3H，s)，5.32(2H，s)，6.73(1H，d，J＝2.56Hz)，6.96(1H，dd，J＝2.56Hz)，J＝8.42Hz)，7.19(1H，dd，J＝2.56Hz，J＝9.15Hz)，7.37(1H，d，J＝2.20Hz)，7.60(1H，d，J＝8.42Hz)，8.16(1H，s)，8.18(1H，d，J＝9.52Hz)；MS(ESI)m/z 317([M+H]+)；分析C20H15NO3计算值C75.70 H4.76 N4.41实测值C75.53 H4.48 N4.32中间体189-氟-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈标题化合物是通过使9-氟-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(0.99g，2.55mmol)与氰化锌(0.45g，3.8mmol)按照方法C反应制备的，得到0.55g(64％)白色固体mp＞220℃；1H NMR(CDCl3)δ3.92(3H，s)，3.97(3H，s)，5.29(2H，s)，6.77(1H，d，J＝8.05Hz)，7.19(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝9.24Hz)，7.36-7.39(2H，m)，8.04(1H，s)，8.17(1H，d，J＝9.15Hz)；MS m/z；分析C20H14FNO3·0.1H2O计算值C71.25 H4.25 N4.16实测值C70.87 H3.91 N4.31。
实施例1d2，8-二羟基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈标题化合物是通过使2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯-12-腈(5.43g，17.1mmol)与HCl吡啶鎓(50g)按照方法D反应制备的，得到3.43g(69％)黄色固体mp＞250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.34(2H，s)，6.71(1H，d，J＝2.36Hz)，6.82(1H，dd，J＝2.48Hz，J＝8.41Hz)，7.19(1H，dd，J＝2.32Hz，J＝9.11Hz)，7.30(1H，d，J＝2.26Hz)，7.78(1H，d，J＝8.56Hz)，8.11(1H，d，J＝9.14Hz)，8.50(1H，s)，9.81(1H，s)，10.46(1H，bs)；MS(ESI)m/z288([M-H]-)；分析C18H11NO3·0.25H2O计算值C73.59 H3.95 N4.77实测值C73.69 H3.84 N4.53.
实施例1e9-氟-2，8-二羟基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈标题化合物是通过使9-氟-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯-12-腈(0.40g，1.19mmol)与HCl吡啶鎓(15g)按照方法D反应制备的，得到0.32g(88％)白色固体mp＞250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.29(2H，s)，6.86(1H，d，J＝8.69Hz)，7.16(1H，dd，J＝2.32Hz，J＝9.15Hz)，7.28(1H，d，J＝2.32Hz)，7.80(1H，d，J＝12.40Hz0，8.08(1H，d，J＝9.04Hz)，8.49(1H，s)，10.16(1H，s)，10.4(1H，s)；MS(ESI)m/z 306([M-H]-)；分析C18H10FNO3·0.3H2O计算值C69.14 H3.42 N4.48实测值C68.91 H3.10 N4.30。
实施例1f1-氯-2，8-二羟基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈标题化合物是通过使2，8-二羟基-H-二苯并[c，h]色烯-12-腈(0.20g，0.7mmol)与NCS(0.11g，0.83mmol)在THF(10mL)中在室温下按照方法B反应过夜制备的，得到0.10g(45％)黄色固体mp＞250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.34(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.35Hz)，6.83(1H，dd，J＝2.43Hz，J＝8.44Hz)，7.37(1H，d，J＝9.22Hz)，7.84(1H，d，J＝8.57Hz)，8.14(1H，d，J＝9.20Hz)，8.53(1H，s)，9.87(1H，bs)，1.12(1H，bs)；MS(ESI)m/z 322/324([M-H]-)；分析C18H10ClNO3·0.75H2O计算值C64.11 H3.44 N4.33实测值C64.45 H3.05 N4.03。
实施例1g1-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇标题化合物是通过使H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(0.218g，0.83mmol)与NCS(0.13g，0.99mmol)在THF(10mL)中按照方法B反应制备的，得到0.17g(67％)标题化合物以及0.025g(10％)12-氯-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇异构体。这些异构体是用制备型HPLC分离的。
mp 216-218℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.24(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.29Hz)，6.82(1H，dd，J＝2.40Hz，J＝8.39Hz)，7.25(1H，d，J＝9.11Hz)，7.67(2H，d，J＝8.69Hz)，7.94-7.99(2H，m)，9.72(1H，bs)，10.50(1H，bs)；MS(ESI)m/z 297/299([M-H]-)；分析C17H11ClO3·0.25H2O计算值C67.34 H3.82实测值C67.25 H3.89中间体19乙酸2-(乙酰氧基)-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯方法EH-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(1.82g，6.49mmol)、吡啶(25mL)和乙酸酐的混合物在室温搅拌过夜并倾入水(300mL)中。白色固体产物过滤收集、用水洗涤、在105℃真空干燥，得到2.11g(88％)白色固体状标题化合物mp 172-173℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.31(3H，s)，2.34(3H，s)，5.36(2H，s)，7.17(1H，d，J＝2.44Hz)，7.21(1H，dd，J＝2.43Hz，J＝8.29Hz)，7.21(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝9.28Hz)，7.63(1H，d，J＝8.30Hz)，7.68(1H，d，J＝2.44Hz)，7.94(1H，d，J＝8.30Hz)，8.04(1H，d，J＝8.79Hz)，8.18(1H，d，J＝9.28Hz)；MS(ESI)m/z 349([M+H]+)；分析C21H16O5计算值C72.41 H4.63实测值C72.20 H4.67中间体20乙酸2-(乙酰氧基)-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯标题化合物是通过使9-氟-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(0.84g，2.98mmol)与吡啶(10mL)和乙酸酐(10mL)按照方法E反应制备的，得到0.93g(86％)白色固体mp 206-212℃；1HNMR(DMSO-d6)δ2.30(3H，s)，2.33(3H，s)，5.30(2H，s)，7.28-7.32(2H，m)，7.59(1H，d，J＝8.61Hz)，7.64(1H，d，J＝2.38Hz)，7.92(1H，d，J＝11.54Hz)，8.01(1H，d，J＝8.79Hz)，8.15(1H，d，J＝9.16Hz)；MS(ESI)m/z 367([M+H]+)；分析C21H15FO5计算值C68.85 H4.13实测值C68.41 H4.06中间体21乙酸2-(乙酰氧基)-12-溴-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯标题化合物是通过使乙酸2-(乙酰氧基)-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(1.63g，4.68mmol)与NBS(1.00g，5.62mmol)在乙腈(100mL)中在室温按照方法B反应过夜制备的，得到2.00g(定量产率)白色固体
mp 192-194℃；1H NMR(CDCl3)δ2.33(3H，s)，2.38(3H，s)，5.28(2H，s)，6.99(1H，d，J＝2.20Hz)，7.14(1H，dd，J＝2.34Hz，J＝8.42Hz)，7.29(1H，dd，J＝2.26Hz，J＝9.11Hz)，7.69(1H，d，J＝8.47Hz)，7.86(1H，d，J＝2.17Hz)，8.09(1H，s)，8.28(1H，d，J＝9.05Hz)；MS m/z；分析C21H15BrO5计算值C59.04 H3.54实测值C58.95 H3.43中间体22乙酸2-(乙酰氧基)-12-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯标题化合物是通过使乙酸2-(乙酰氧基)-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.26g，0.75mmol)与NCS(0.12g，0.90mmol)在乙腈(10mL)中按照方法B回流反应3小时制备的，得到0.24g(84％)白色固体mp 183-184℃；1H NMR(CDCl3)δ2.33(3H，s)，2.38(3H，s)，5.28(2H，s)，6.99(1H，d，J＝2.27Hz)，7.14(1H，dd，J＝2.34Hz，J＝8.42Hz)，7.30(1H，dd，J＝2.27Hz，J＝9.07Hz)，7.68(1H，d，J＝8.49Hz)，7.88-7.89(2H，m)，8.29(1H，d，J＝9.08Hz)；MS m/z；分析C21H15ClO5·0.1H2O计算值C65.58 H3.98实测值C65.37 H3.55中间体23乙酸2-(乙酰氧基)-12-溴-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯标题化合物是通过使乙酸2-(乙酰氧基)-9-氟-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.47g，1.28mmol)与NBS(0.27g，1.54mmol)在乙腈(25mL)中在室温下按照方法B反应过夜制备的，得到0.57g(定量产率)白色固体。通过用乙酸乙酯研制得到一个分析样品，得到白色固体状标题化合物mp 190-193℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.36(3H，S)，2.37(3H，s)，5.34(2H，s)，7.34(1H，d，J＝7.69Hz)，7.46(1H，dd，J＝2.23Hz，J＝9.05Hz)，7.81(1H，d，J＝2.18Hz)，8.09(1H，d，J＝11.65Hz)，8.28(1H，d，J＝9.08Hz)，8.47(1H，s)；MS(ESI)m/z 462/464([M+NH4]+)；分析C21H14BrFO5计算值C56.65 H3.17实测值C56.59 H3.16中间体24乙酸2-(乙酰氧基)-12-氯-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯标题化合物是通过使乙酸2-(乙酰氧基)-9-氟-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.47g，1.28mmol)与NCS(0.21g，1.54mmol)在乙腈(15mL)中在回流下按照方法B反应4小时制备的，得到0.55g(定量产率)黄色固体。通过用乙酸乙酯研制得到一个分析样品，得到白色固体状标题化合物mp 194-198℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.36(3H，s)，2.37(3H，s)，5.37(2H，s)，7.34(1H，d，J＝7.66Hz)，7.48(1H，dd，J＝2.16Hz，J＝9.06Hz)，7.85(1H，d，J＝2.07Hz)，8.08(1H，d，J＝11.61Hz)，8.28(1H，d，J＝9.10Hz)，8.32(1H，s)，MS(ESI)m/z 399/401([M-H]-)；分析C21H14ClFO5计算值C62.93 H3.52实测值C62.53 H3.53实施例1h12-溴-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇方法F乙酸2-(乙酰氧基)-12-溴-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(1.40g，3.28mmol)的甲醇钠(40mL 1N甲醇溶液)溶液在室温下搅拌2小时。将该溶液倾入100mL 1N HCl中，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机层用碳酸氢钠溶液洗涤、用食盐水洗涤、用硫酸钠干燥、过滤。蒸发溶剂、用硅胶色谱法精制(40％乙酸乙酯-己烷)，得到0.91g(81％)白色固体状标题化合物mp 178-180(分解)、160℃以上变色；1H NMR(DMSO-d6)δ5.23(2H，s)，6.71(1H，d，J＝2.32Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.43Hz，J＝8.39Hz)，7.12(1H，dd，J＝2.32Hz，J＝9.03Hz)，7.34(1H，d，J＝2.28Hz)，7.58(1H，d，J＝8.53Hz)，8.04(1H，d，J＝9.07Hz)，8.14(1H，s)，9.73(1H，bs)，10.20(1H，bs)；MS(ESI)m/z 341/343([M-H]-)；分析C17H11BrO3计算值C59.50 H3.23实测值C59.33 H3.26实施例1i12-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇标题化合物是通过使乙酸2-(乙酰氧基)-12-氯-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.18g，0.47mmol)与甲醇钠溶液(75mL 1N甲醇溶液)按照方法F反应制备的，得到0.13g(93％)褐色固体。这种材料用逆相制备型HPLC进一步精制，得到浅桃红色固体状标题化合物mp 212-216℃(d)；1H NMR(DMSO-d6)δ5.23(2H，s)，6.71(1H，d，J＝2.33Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝8.39Hz)，7.14(1H，dd，J＝2.34Hz，J＝9.09Hz)，7.35(1H，d，J＝2.31Hz)，7.68 (1H，d，J＝8.54Hz)，7.98(1H，s)，8.05(1H，d，J＝9.07Hz)，9.74(1H，bs)，10.19(1H，bs)；MS(ESI)m/z 299/301([M+H]+)；MS(ESI)m/z 297/299([M-H]-)；分析C17H11ClO3·0.1H2O计算值C67.94 H3.76实测值C67.77 H3.67实施例1j12-溴-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇标题化合物是通过使乙酸2-(乙酰氧基)-12-溴-9-氟-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.48g，1.08mmol)与甲醇钠溶液(40mL 1N甲醇溶液)按照方法F反应制备的，用逆相制备型HPLC精制得到0.20g(53％)白色固体状标题化合物mp 194-197℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.22(2H，s)，6.89(1H，d，J＝8.68Hz)，7.13(1H，dd，J＝2.31Hz，J＝9.05Hz)，7.35(1H，d，J＝2.27Hz)，7.75(1h，D，J＝12.46Hz)，8.04(1H，d，J＝9.06Hz)，8.19(1H，s)，10.21(2H，bs)；MS(ESI)m/z 359/361([M-H]-)；分析C17H10BrFO3·0.75H2O计算值C54.50 H3.09实测值C54.85 H2.89实施例1k12-氯-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇标题化合物是通过使乙酸2-(乙酰氧基)-12-氯-9-氟-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.44g，1.10mmol)与甲醇钠溶液(40mL 1N甲醇溶液)按照方法F反应制备的，得到0.30g(86％)褐色固体。此材料用逆相制备型HPLC进一步精制，得到白色固体状标题化合物mp 215-220℃(dec)；1H NMR(DMSO-d6)δ5.22(2H，s)，6.89(1H，d，J＝8.68Hz)，7.15(1H，dd，J＝2.22Hz，J＝9.05Hz)，7.35(1H，d，J＝2.13Hz)，7.74(1H，d，J＝12.42Hz)，8.03-8.06(2H，m)，10.21(2H，bs)；MS (ESI)m/z 315/317([M-H]-)；分析C17H10ClFO3·0.25H2O计算值C63.57 H3.29实测值C63.22 H3.27实施例1l12-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇乙酸2-(乙酰氧基)-12-甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(2.06g，6.00mmol)、CuBr(0.86g，6.00mmol)、甲醇钠(15mL 25％甲醇溶液)和DMF(30mL)的混合物回流加热3小时。将反应冷却到室温、倾入HCl溶液(200mL 2N)中、用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有机层用碳酸氢钠溶液洗涤、用硫酸钠干燥、过滤。蒸发溶剂、用硅胶柱色谱法(40％乙酸乙酯-己烷)精制，得到1.11g(63％)褐色固体状标题化合物mp 224℃(分解)；1HNMR(DMSO-d6)δ3.98(3H，s)，5.12(2H，s)，6.70(1H，d，J＝2.47Hz)，6.81(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝8.24Hz)，7.05(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝9.06Hz)，7.18(1H，s)，7.35(1H，d，J＝2.47Hz)，7.68(1H，d，J＝8.51Hz)，7.92 91H，d，J＝9.06Hz)，9.63(1H，s)，9.80(1H，s)；MS(ESI)m/z 293([M-H]-；MS(ESI)m/z 295([M+H]+)；分析C18H14O4·0.3H2O计算值C72.14 H4.90实测值C71.88 H4.74中间体25乙酸2-(乙酰氧基)-12-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯标题化合物是通过使12-甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(1.11g，3.78mmol)与吡啶和乙酸酐按照方法E反应制备的，得到1.11g(78％)浅黄色固体mp 126-134℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.31(3H，s)，2.33(3H，s)，4.05(3H，s)，5.28(2H，s)，7.16(1H，d，J＝2.32 Hz)，7.22(1H，dd，J＝2.44Hz，J＝8.34Hz)，7.35(1H，dd，J＝2.32Hz，J＝9.04Hz)，7.42(1H，s)，7.80(1H，m)，8.01(1H，d，J＝8.58Hz)，8.14(1H，dd，J＝0.35Hz，J＝9.04Hz)；分析C22H18O6·0.25H2O计算值C69.01 H4.87实测值C69.08 H4.88实施例1m11-氯-12-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇标题化合物是通过使乙酸2-(乙酰氧基)-12-甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(0.41g，1.08mmol)与NCS(0.17g，1.30mmol)在乙腈(10mL)中按照方法B反应随后按照方法F脱酰化制备的，得到0.050g(14％)桃色固体mp＞230℃变色；1H NMR(DMSO-d6)δ3.87(3H，s)，5.06(2H，s)，6.80(1H，d，J＝2.35Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.55Hz，J＝8.63Hz)，7.11(1H，dd，J＝2.34Hz，J＝9.06Hz)，7.23(1H，d，J＝2.30Hz)，8.01(1H，d，J＝9.05Hz)，8.11(1H，d，J＝8.60Hz)，9.81(1H，bs)，10.14(1H，bs)；MS(ESI)m/z 329/331([M+H]+)；MS(ESI)m/z 327/329([M-H]-)；分析C18H13ClO4·0.25H2O计算值C64.87 H4.08实测值C64.90 H4.09实施例1n12-甲基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇12-溴-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(3.05g，8.89mmol)、四甲基锡(2.39g，13.3mmol)、和二氯二(三邻甲苯膦)钯(II)(0.70g，0.9mmol)在DMF(100mL)中的混合物在80℃在氮气下搅拌16小时。将反应物冷却到室温、倾入水(250mL)中、用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有机层用氯化铵溶液(50mL)洗涤、用硫酸钠干燥、过滤。蒸发溶剂、用硅胶柱色谱法(40％乙酸乙酯-己烷)精制，得到2.28g(92％)浅棕色固体。一个样品用逆相制备型HPLC进一步精制，得到灰白色固体状标题化合物mp 220-224℃(分解)；1H NMR(丙酮-d6)δ2.56(3H，s)，5.20(2H，s)，6.78(1H，d，J＝2.74Hz)，6.89(1H，dd，J＝2.74Hz，J＝8.24Hz)，7.12(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝9.06Hz)，7.25(1H，d，J＝2.20Hz)，7.64-7.66(2H，m)，8.09(1H，d，J＝8.79Hz)，8.46(1H，s)，8.60(1H，s)；MS(ESI)m/z 279([M+H]+)；MS(ESI)m/z 277([M-H]-)；分析C18H14O3·0.30H2O计算值C76.20 H5.19实测值C75.90 H4.75
实施例1o12-乙烯基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇向12-溴-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(0.63g，1.84mmol)、二氯二(三邻甲苯膦)钯(II)(0.07g，0.09mmol)和二乙氧基乙烷(10mL)的混合物中添加三丁基乙烯基锡(0.87g，2.76mmol)。混合物在110℃搅拌12小时。将反应物冷却到室温、倾入氯化铵溶液(100mL 1N)中、用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有机层用氯化铵溶液(100mL)洗涤、用硫酸钠干燥、过滤。蒸发溶剂、用硅胶柱色谱法(30％乙酸乙酯-己烷)精制，得到0.40g(75％)浅黄色固体状标题化合物mp＞220℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.20(2H，s)，5.40(1H，dd，J＝1.65Hz，J＝10.99Hz)，5.87(1H，dd，J＝1.65Hz，J＝17.58Hz)，6.71(1H，d，J＝2.75Hz)，6.81(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝8.51Hz)，7.08(1H，dd，J＝2.47Hz，J＝9.06Hz)，7.26-7.31(2H，m)，7.72(1H，d，J＝8.79Hz)，7.94(1H，s)，8.01(1H，d，J＝9.34Hz)，9.63(1H，s)，9.85(1H，s)；MS(ESI)m/z 291([M+H]+)；MS(ESI)m/z 289([M-H]-)；分析C19H14O3·0.25H2O计算值C77.41 H4.96实测值C77.34 H4.77实施例1p12-乙基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇向12-乙烯基-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(0.19g，0.66mmol)的乙酸乙酯(30mL)溶液中添加Pd/C(0.23g)。烧瓶连接一个充了氢气的气球，悬浮液在室温搅拌4小时。反应物通过硅藻土(Celite)过滤、用硅胶柱色谱法(40％乙酸乙酯-己烷)精制，得到0.11g(58％)浅棕色固体，用逆相制备型HPLC进一步精制，得到浅红紫色固体状标题化合物mp 184-192℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.31(3H，t，J＝7.48Hz)，2.89-2.95(2H，m)，5.16(2H，s)，6.69(1H，d，J＝2.55Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.49Hz，J＝8.40Hz)，7.04(1H，dd，J＝2.32Hz，J＝9.04Hz)，7.20(1H，d，J＝2.21Hz)，7.61-7.63(2H，m)，8.00(1H，d，J＝9.04Hz)，9.58(1H，s)，9.74(1H，s)；MS(ESI)m/z 291([M-H]-)；分析C19H16O3·0.10H2O计算值C77.59 H5.55实测值C77.37 H5.58实施例1q12-噻吩-3-基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇方法G12-溴-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(0.51g，1.49mmol)、3-噻吩硼酸(0.38g，3mmol)、四(三苯膦)钯(0.17g，0.15mmol)、碳酸钠溶液(1.5mL 2N)、水(1mL)、和DME(5mL)的混合物在85℃搅拌过夜。将反应物冷却到室温、倾入水(100mL)中、用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有机层用食盐水洗涤、用硫酸钠干燥、过滤。蒸发溶剂、用硅胶柱色谱法(40％乙酸乙酯-己烷)精制，得到0.43g(84％)褐色固体。此材料用逆相制备型HPLC进一步精制，得到褐色固体状标题化合物mp 179-182℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.23(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.38Hz)，6.78(1H，dd，J＝2.38Hz，J＝8.33Hz)，7.06(1H，dd，J＝2.38Hz，J＝8.92Hz)，7.21(1H，d，J＝2.38Hz)，7.63-7.67(2H，m)，7.72-7.73(2H，m)，8.05(1H，d，J＝8.93Hz)，9.63(1H，s)，9.75(1H，s)；MS(ESI)m/z 345([M-H]-)；分析C21H14O3S·0.25C2H3N·0.50H2O计算值C70.62 H4.34 N0.96实测值C70.34 H4.41 N1.39。
中间体2612-噻吩-2-基-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯12-溴-2，8-二甲氧基-H-二苯并[c，h]色烯(0.53g，1.43mmol)、2-噻吩硼酸(0.2g，1.57mmol)、四(三苯膦)钯(0.08g，0.07mmol)、碳酸钠溶液(2mL 2N)、水(1mL)和DME(20mL)的混合物按照方法G在85℃反应过夜，得到0.48g(90％)褐色固体mp 110-112℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.80(3H，s)，3.81(3H，s)，5.33(2H，s)，6.95-6.99(2H，m)，7.22-7.27(2H，m)，7.39-7.40(1H，m)，7.48(1H，d，J＝2.44hz)，7.70(1H，dd，J＝0.98，5.37Hz)，7.76(1H，d，J＝8.3hz)，7.92(1H，s)，8.16(1H，d，J＝9.28Hz)；MS(ESI)m/z 345([M-H]-)分析C23H18O3S计算值C73.77 H4.85实测值C74.43 H4.78实施例1r12-噻吩-2-基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇标题化合物是通过使中间体26与HCl吡啶鎓(2.85g)按照方法D反应制备的，得到0.3g(88％)浅绿黄色固体mp 191-193℃；；1H NMR(DMSO-d6)δ5.25(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.75Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.75，8.24Hz)，7.90(1H，dd，J＝2.20，9.06Hz)，7.24-7.29(2H，m)，7.37(1H，d，J＝2.20Hz)，7.65-7.68(2H，m)，7.79(1H，s)，8.07(1H，d，J＝8.79Hz)，9.66(1H，bs)，9.85(1H，bs)；HRMS计算值C23H18O3S+H(M+1)375.10495实测值375.10497。
分析C21H14O3S·0.65H2O计算值C70.43 H4.30实测值C70.02 H3.85实施例1s12-丁基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇标题化合物是通过使12-溴-H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇(1.07g，3.12mmol)与丁基硼酸(0.46g，4.55mmol)按照方法G反应制备的，得到0.12g(12％)浅黄色固体，用逆相制备型HPLC进一步精制，得到浅红紫色固体mp 118-121℃；1H NMR(DMSO-d6)δ0.96(3H，t，J＝7.30Hz)，1.38-1.47(2H，m)，1.62-1.69(2H，m)，2.90(2H，t，J＝7.59Hz)，5.16(2H，s)，6.69(1H，d，J＝2.09Hz)，6.80(1H，dd，J＝2.38Hz，J＝8.39Hz)，7.04(1H，dd，J＝2.20Hz，J＝9.04Hz)，7.20(1H，d，J＝2.09Hz)，7.60-7.62(2H，m)，7.99(1H，d，J＝9.04Hz)，9.58(1H，s)，9.73(1H，s)；MS(ESI)m/z 321([M+H]+)；MS(ESI)m/z 319([M-H]-)；分析C21H20O3·0.10H2O计算值C78.29 H6.32实测值C78.13 H6.30中间体272，8-二甲氧基-12-丙烯基-6H-二苯并[c，h]色烯12-溴-2，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯(1.4g，3.78mmol)、烯丙基三丁基锡(1.76mL，5.68mmol)、二氯二(三苯膦)钯(II)(133mg，0.19mmol)、和间二甲苯(38mL)的混合物在130℃搅拌加热1小时。TLC和LC-MS监测表明反应没有完成。混合物通过Celite过滤，向反应物中添加新鲜二氯二(三苯膦)钯(II)(133mg，0.19mmol)催化剂，混合物在130℃加热2小时。TLC和LC-MS监测表明反应仍未完成。因此，过滤和新鲜催化剂的添加再重复2次。混合物通过Celite过滤、吹脱溶剂、用硅胶柱色谱法(20％～40％二氯甲烷-己烷)精制，得到0.84g(67％)黄色固体状标题化合物1H NMR(DMSO-d6)δ2.02(3H，dd，J＝6.57Hz，J＝1.73Hz)，3.86(3H，s)，3.96(3H，s)，5.24(2H，s)，6.17-6.18(1H，m)，6.75(1H，d，J＝2.52Hz)，6.94(1H，dd，J＝8.57Hz，J＝2.61Hz)，7.01(1H，J＝15.43Hz，J＝1.54Hz)，7.14(1H，dd，J＝9.14Hz，J＝2.52Hz)，7.31(1H，d，J＝2.44Hz)，7.69(1H，d，J＝8.57Hz)，7.81(1H，s)，8.17(1H，d，J＝9.16Hz)；MS(ESI)m/z 333(M+H)+。
中间体282，8-二甲氧基-12-丙基-6H-二苯并[c，h]色烯2，8-二甲氧基-12-丙烯基-6H-二苯并[c，h]色烯(460mg，1.38mmol)、钯(92mg，以10％载于活性炭上)和36mL乙酸乙酯的混合物，在氢气球下于室温搅拌3小时。反应混合物通过Celite过滤和浓缩，给出430mg(94％)浅棕色固体状标题化合物。通过用逆相制备型HPLC进一步精制，得到一种分析样品mp 88-90℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.01(3H，t，J＝7.31Hz)，1.68-1.80(2H，m)，2.98(2H，t，J＝7.29Hz)，3.81(3H，s)，3.91(3H，s)，5.25(2H，s)，6.93(1H，d，J＝2.53Hz)，6.98 (1H，dd，J＝8.46Hz，J＝2.04Hz)，7.17(1H，dd，J＝9.20Hz，J＝2.38Hz)，7.28(1H，d，J＝2.36Hz)，7.72(1H，s)，7.77(1H，d，8.57Hz)，8.08(1H，d，J＝9.14Hz)；MS(ESI)m/z 335 (M+H)+。
分析C22H22O3计算值C79.02 H6.63实测值C78.48 H6.75实施例1t12-丙基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇向2，8-二甲氧基-12-丙基-6H-二苯并[c，h]色烯(220mg，0.658mmol)和CH2Cl2(33mL)的混合物中在0℃徐徐添加三溴化硼(3.95mL 1N CH2Cl2溶液，3.95mmol)。反应混合物在0℃搅拌3小时、边在冰水浴中搅拌边向该混合物中注射4mL水。减压下脱除该混合物中的CH2Cl2。所得到的混合物用乙酸乙酯(×3)萃取。合并的有机层用食盐水洗涤、用硫酸钠干燥、过滤、吹脱溶剂，给出120mg(60％)白色固体状标题化合物。通过用硅胶柱色谱法(20％～30％乙酸乙酯-己烷)精制、然后用乙酸乙酯-己烷重结晶，得到分析样品mp 86-95℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.00(3H，t，J＝7.24Hz)，1.63-1.76(2H，m)，2.87(2H，t，J＝7.22Hz)，5.16(2H，s)，6.69(1H，d，J＝2.28Hz)，6.79(1H，dd，J＝8.39Hz，J＝2.28Hz)，7.03(1H，dd，J＝9.02Hz，J＝2.18Hz)，7.20(1H，d，J＝2.10Hz)，7.60(1H，s)，7.62(1H，d，J＝7.85Hz)，7.99(1H，d，J＝9.01Hz)，9.61(1H，s)，7.76(1H，s)；MS(ESI)m/z 305(M-H)-，307(M+H)+；HRMS计算值C20H18O3，306.1256；实测值(ESI)，305.11827。
分析C20H18O3计算值C78.41 H5.92实测值C72.79 H6.62中间体305-甲氧基-1-萘酚在一个2000mL烧瓶中，5-甲氧基-1-四氢萘酮(30.0g，170.2mmol)和10％Pd/C(40g)在1000mL对繖花烃中的混合物进行回流并用LC-MS监测，直至不再有起始原料存在(大约24小时)。然后，将混合物冷却到室温、通过硅胶/Celite层过滤、真空浓缩，得到26.6g(90％)灰白色固体1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.90(3H，s)，6.83(1H，appd，J＝7.5Hz)，6.89(1H，appd，J＝7.7Hz)，7.24(1H，appt)，7.30(1H，appt)，7.54(1H，appd，J＝8.5Hz)，7.65(1H，d，J＝8.5Hz)，9.98(1H，s)。
中间体311-〔(2-溴-5-甲氧基苄基)氧〕-5-甲氧基萘向5-甲氧基-1-萘酚(26.0g，149mmol)、三苯膦(43.3g，165mmol)、(2-溴-5-甲氧基苯基)甲醇(36.0g，166mmol)、和THF(500mL)的混合物中滴加DEAD(28.7g在50mL THF中，165mmol)。然后，反应物搅拌过夜、浓缩、溶于少量乙醚中、冷却到大约-30℃生成一种白色沉淀(PPh3O和还原的DEAD)，将后者滤出。将滤液浓缩、溶于少量二氯甲烷中、冷却到-30℃。沉淀物在硅胶层上滤出、滤液浓缩，得到28.7g(51.5％)白色固体。
mp120-121℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.77(3H，s)，3.96(3H，s)，5.26(2H，s)，6.94(1H，dd，J＝8.8Hz，3.1Hz)，7.01(1H，d，J＝7.6Hz)，7.11(1H，d，J＝7.6Hz)，7.28(1H，d，J＝3.1Hz)，7.42(2H，m)，7.61(1H，d，J＝8.8Hz)，7.75(2H，appd)；MS m/z 373/275(Br图案)(M+H+)。
分析C19H17BrO3计算值C61.14 H4.59实测值C60.86 H4.42
中间体321，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯向一个2000mL回收烧瓶中添加1-〔(2-溴-5-甲氧基苄基)氧〕-5-甲氧基萘(3.0g，8.03mmol)、乙酸钾(2.4g，无水，24.10mmol)、PdCl2(PPh3)2(1.12g，1.60mmol)、和N，N-二甲基乙酰胺(500mL，99％)。该烧瓶用氮气吹扫、在130℃加热12小时、在高真空下浓缩。然后将暗色固体溶解于乙醚/CH2Cl2(1/1，300mL)中并通过硅胶/Celite层过滤。减压下蒸发，得到2.32g(99％)褐色固体状产物。mp 166-167℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.82(3H，s)，3.97(3H，s)，5.30(2H，s)，6.98(3H，m)，7.42(1H，t，J＝8.1Hz)，7.69(1H，d，J＝8.5Hz)，7.81(2H，appd，J＝8.6Hz)，7.91(1H，d，J＝8.9Hz)；MS m/z 293(M+H+)。
分析C19H16O3计算值C78.06 H5.52实测值C77.67 H5.28实施例1u6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇标题化合物是通过使1，8-二甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯(1.0g，3.42mmol)与盐酸吡啶鎓(5.0g，43.3mmol)按照方法D反应制备的，得到0.93g(99％)白色泡沫体。mp 213-214℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 5.21(2H，s)，6.72(1H，d，J＝1.9Hz)，6.82(2H，m)，7.27(1H，t，J＝7.9Hz)，7.54(1H，d，J＝8.3Hz)，7.68(1H，d，J＝8.4Hz)，7.78(2H，brs)，9.72(1H，s)，10.09(1H，s)；MS m/z 263(M-H+)；分析C17H12O3计算值C77.26 H4.58实测值C76.62 H4.42中间体33乙酸1-(乙酰氧基)-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯标题化合物是通过使6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇(1.5g，5.68mmol)、乙酸酐(25mL)、和吡啶(25mL)按照方法E反应制备的，产生1.88g(95％)白色固体状产物。mp 142-143℃；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.31(3H，s)，2.47(3H，s)，5.38(2H，s)，7.18(1H，d，J＝2.0 Hz)，7.22(1H，dd，J＝8.4Hz，2.3Hz)，7.33(1H，d，J＝7.1Hz)，7.55(1H，t，J＝8.0Hz)，7.60(1H，d，J＝8.9Hz)，7.95(1H，d，J＝8.4Hz)，8.06(2H，appt)；MS m/z 349(M+H+)；分析C21H16O5计算值C72.41 H4.63实测值C72.06 H4.72实施例1v12-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇标题化合物是通过使乙酸1-(乙酰氧基)-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(360mg，1.03mmol)与NCS(210mg，1.57mmol)和无水DMF(20mL)按照方法B在室温下反应2.0小时、随后在1小时内加热到100℃制备的。反应物在减压下浓缩、将固体溶于MeOH(30mL)中。通入NH3鼓泡0.5小时，同时用LC-MS监测乙酸根脱除。将反应物浓缩成一种暗色污泥、溶解于EtOAc中、通过硅胶层过滤，产生200mg(65％)泡沫体。用硅胶柱色谱法(1∶1＝EtOAc∶己烷)产生一种分析样品。mp～185℃分解；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ5.23(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.3Hz)，6.81(1H，dd，J＝8.6Hz，2.6Hz)，6.92(1H，dd，J＝7.5Hz，1.0Hz)，7.33(1H，appt)，7.62(1H，dd，J＝8.5Hz，1.0Hz)，7.69(1H，d，J＝8.6Hz)，7.79(1H，s)，9.78(1H，s)，10.11(1H，s)；MS m/z 297/399(Cl图案)(M-H+)。
分析C17H11ClO3计算值C68.35 H3.71实测值C67.85 H3.61实施例1w12-溴-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇标题化合物是通过使乙酸1-(乙酰氧基)-6H-二苯并[c，h]色烯-8-酯(510mg，1.46mmol)、NBS(315mg，1.77mmol)、和无水DMF(30mL)在室温下按照方法B反应1.5小时制备的。反应物在减压下浓缩、溶解于MeOH(30mL)中、通入NH3鼓泡1.5小时，同时用LC-MS监测乙酸根脱除。反应物浓缩成一种暗色污泥、用硅胶柱色谱法(1∶1＝EtOAc∶己烷)精制，得到340mg(68％)褐色固体状产物。mp130℃以上分解；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ5.23(2H，s)，6.72(1H，d，J＝1.9Hz)，6.81(1H，dd，J＝8.2Hz，2.5Hz)，6.92(1H，dd，J＝7.7Hz，1.1Hz)，7.33(1H，t，J＝8.0Hz)，7.64(1H，dd，J＝8.5Hz，1.1Hz)，7.68(1H，d，J＝8.5Hz)，8.01(1H，s)，9.78(1H，s)，10.15(1H，s)；MS m/z 341/343(Br图案)(M-H+)。
分析C17H11BrO3计算值C59.50 H3.23实测值C59.23 H3.34实施例1x1，8-二羟基-6H-二苯并[c，h]色烯-12腈在一个10mL烧瓶中，添加溴化物(165mg，0.48mmol)、Pd(PPh3)(28mg，0.024mmol)、氰化锌(68mg，0.58mmol)、和DMF(5mL)。混合物在120℃加热12小时，此后就没有任何反应发生。然后添加氰化铜(43mg，0.48mmol)、用LC-MS监测1小时后反应完成。反应物冷却后，用EtOAc稀释、通过硅胶层、浓缩、用制备型逆相HPLC(水/CH3CN 0.1％TFA)精制、减压浓缩成一种白色固体。该固体用干燥喷枪(100℃)干燥过夜，产生30mg(21％)白色固体状产物。mp260℃以上分解1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.06(2H，m)，2.60(2H，t，J＝6.5Hz)，2.99(2H，t，J＝5.9Hz)，6.87(2H，d，J＝8.6Hz)，7.57(4H，m)，7.86(1H，d，J＝8.7Hz)，9.74(1H，s)；MS m/z 237(M-H+)。
分析C16H14O2计算值C80.65 H5.92实测值C79.04 H5.60实施例1y和实施例1z2-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇(实施例1y)和4-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇(实施例1z)标题化合物是通过使6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇(150mg，0.57mmol)、NCS(84mg，0.63mmol)、和THF(8ml)按照方法B在室温反应3小时和在60℃反应5小时制备的。反应物用制备型HPLC精制，得到35mg 2-氯化合物和10mg 4-氯化合物(总产率27％)。
2-氯化合物mp 181-182℃分解；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.24(2H，s)，6.72(1H，d，J＝2.3Hz)，6.83(1H，dd，J＝8.4Hz，2.4Hz)，7.40(1H，d，J＝9.0Hz)，7.61(1H，d，J＝9.0Hz)，7.71(1H，d，J＝8.5Hz)，7.64(1H，d，J＝8.9)，7.91(1H，d，J＝9.0Hz)，9.77(1H，s)，10.01(1H，s)；HRMS准确值297.03239(M-H+)实测值297.03240(0.02ppm)；分析C17H11ClO3计算值C68.35 H3.71实测值C67.66 H3.684-氯化合物mp；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.14(2H，s)，6.73(1H，d，J＝2.4Hz)，6.77(1H，d，J＝8.2Hz)，6.84(1H，dd，J＝8.5Hz，2.5Hz)，7.31(1H，d，J＝8.2Hz)，7.70(1H，d，J＝8.5Hz)，7.87(2H，appq)，9.78(1H，s)，9.77(1H，s)，10.40(1H，s)；HRMS准确值297.03239(M-H+)实测值297.03236(-0.11ppm)分析C17H11ClO3计算值C68.35 H3.71实测值C66.12 H3.5权利要求
1.有如下结构的式I化合物或其医药上可接受的盐 式中R1和R2各自独立地选自氢、羟基、C1-6烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C1-6烷氧基、或卤素；其中，R1或R2的烷基或烯基片段可以任选地有羟基、-CN、卤素、三氟烷基、三氟烷氧基、-NO2、或苯基取代；先决条件是R1或R2中至少一个是羟基；R3、R4、R5、R6、和R7各自独立地是氢、C1-6烷基、卤素、C1-6烷氧基、-CN、C2-7烯基、C2-7炔基、-CHO、苯基、或者一个有1～4个选自O、N或S的杂原子的5员或6员杂环式环；其中，R4、R5、R6、或R7中的烷基或烯基片段可以任选地有羟基、-CN、卤素、三氟烷基、三氟烷氧基、-NO2、或苯基取代；其中，R4或R5的苯基片段可以任选地有选自下列的相同或不同取代基的一、二、或三取代C1-6烷基、C2-7烯基、卤素、羟基、C1-6烷氧基、-CN、-NO2、氨基、C1-6烷基氨基、每个烷基1-6个碳原子的二烷基氨基、硫、C1-6烷硫基、C1-6烷亚磺酰基、C1-6烷磺酰基、C2-7烷氧羰基、C2-7烷羰基、或苯甲酰基。
2.按照权利要求1的化合物，式中R6和R7各自独立地是氢或卤素。
3.按照权利要求1或2的化合物，式中R6是氢或氟。
4.按照权利要求1～3中任何一项的化合物，式中R4和R5各自独立地是氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、C2-7烯基、-CN、呋喃基、或噻吩基。
5.按照权利要求1～4中任何一项的化合物，式中R4不是氢。
6.按照权利要求5的化合物，式中R4选自氰基、氯、溴、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、乙烯基、噻吩-2-基和噻吩-3-基。
7.按照权利要求1～6中任何一项的化合物，式中R5是氢或卤素。
8.按照权利要求1～7中任何一项的化合物，式中R2和R3各自独立地是氢、卤素、或羟基。
9.按照权利要求1～8中任何一项的化合物，式中R2是羟基或卤素。
10.按照权利要求1～8中任何一项的化合物，式中R2是羟基。
11.按照权利要求1～10中任何一项的化合物，式中R3是氢或卤素。
12.按照权利要求1～11中任何一项的化合物，式中R1是氢、羟基或卤素。
13.按照权利要求1的化合物，该化合物是下列之一a)6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；b)9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；c)2，8-二羟基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈；d)9-氟-2，8-二羟基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈；e)1-氯-2，8-二羟基-6H-二苯并[c，h]色烯-1 2-腈；f)1-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；g)12-溴-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；h)12-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；i)12-溴-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；j)12-氯-9-氟-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；k)12-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；l)11-氯-12-甲氧基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；m)12-甲基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；n)12-乙烯基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；o)12-乙基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；p)12-噻吩-3-基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；q)12-噻吩-2-基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；r)12-丁基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；s)12-丙基-6H-二苯并[c，h]色烯-2，8-二醇；t)6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇；u)12-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇；v)12-溴-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇；w)1，8-二羟基-6H-二苯并[c，h]色烯-12-腈；x)2-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇；y)4-氯-6H-二苯并[c，h]色烯-1，8-二醇；或其医药上可接受的盐。
14.一种化合物，是6H-二苯并[c，h]色烯-8-醇或其医药上可接受的盐。
15.治疗或抑制哺乳动物前列腺炎或间质性膀胱炎的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
16.治疗或抑制哺乳动物炎性肠道疾病、Crohn′s病、溃疡性直肠炎或结肠炎的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
17.治疗或抑制哺乳动物前列腺肥大、子宫平滑肌瘤、乳腺癌、子宫内膜癌、多囊性卵巢综合症、子宫内膜息肉、良性乳腺疾病、子宫内膜异位症、卵巢癌、黑色素瘤、前列腺癌、结肠癌、胶质瘤或astioblastomia的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
18.降低哺乳动物的胆固醇、甘油三酯、Lp(a)或LDL水平；抑制或治疗高胆固醇血症；高脂血症；心血管疾病；动脉粥样硬化；高血压；外周血管疾病；再狭窄或血管痉挛；或抑制由导致免疫介导的血管损伤的细胞因素引起的血管壁损伤的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
19.给有下述需要的哺乳动物提供认知增强或神经保护；或治疗或抑制老年性痴呆、阿尔茨海默氏疾病、认知衰退、中风、焦虑或神经退行性变的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
20.治疗或抑制哺乳动物中自由基诱导的疾病的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
21.治疗或抑制哺乳动物阴道或阴门萎缩，萎缩性阴道炎、阴道干燥、瘙痒、性交疼痛、排尿困难、尿频、尿失禁及尿道感染的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
22.治疗或抑制哺乳动物血管舒缩症状的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
23.抑制哺乳动物受孕的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
24.治疗或抑制哺乳动物关节炎的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
25.按照权利要求24的方法，其中所述的关节炎是类风湿性关节炎、骨关节炎或脊椎关节病。
26.治疗或抑制哺乳动物关节肿胀或糜烂以及继发于关节镜或外科手术的关节损伤的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
27.治疗或抑制哺乳动物牛皮癣或皮炎的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
28.治疗或抑制哺乳动物缺血、再灌注损伤、哮喘、多发性硬化、系统性红斑狼疮、葡萄膜炎、脓毒、出血性休克、黄斑退行性变或II型糖尿病的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
29.治疗或抑制哺乳动物子宫内膜异位症的方法，该方法包括给所述哺乳动物提供有效剂量的如权利要求1-14中任一项所述的化学式I的化合物或其药学可接受盐。
30.一种医药组合物，包含权利要求1～14中任何一项所要求保护的式I化合物或其医药上可接受的盐，以及一种医药载体。
31.权利要求1所定义的式(I)化合物或其医药上可接受盐的制备方法，包含下列之一a)使式II化合物脱烷基化 式中R是C1-6烷基，且R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7同权利要求1中的定义，给出式I化合物；或b)使式III化合物脱酰基化 式中R′是一个酰基例如C2-7链烷酰基如乙酰基，R11是R1或一个酰氧基例如C2-7链烷酰基如乙酰基，R12是R2或一个酰氧基例如C2-7链烷酰基如乙酰基，且R3、R4、R5、R6、R7同权利要求1中的定义，给出式I化合物；或c)使必要时有保护的式IV的12-溴化合物 式中R1、R2、R3、R5、R6和R7同权利要求1中的定义，与下式的反应性衍生物反应R4-L式中L是一种硼酸或丁基锡衍生物，且R4是C1-6烷基、C2-7烯基、或一种有1～4个选自O、N或S的杂原子的5员或6员杂环式环；并脱除任何保护基，给出对应的式(I)化合物；或d)用一种卤化剂将权利要求1定义的、必要时有保护的式I化合物卤化 式中R1、R2、R3、R4和R5中至少一个是氢，随后必要时脱保护，给出一种式中R1、R2、R3和R4中至少一个是卤素的式I化合物；或e)用一种腈化剂例如氰化锌将权利要求1定义的、必要时有保护的式I化合物腈化 式中R4是溴，随后必要时脱保护，给出一种式中R4是氰基的式I化合物；或f)使一种碱性的式I化合物转化成其医药上可接受的盐，或反之亦然。
全文摘要
本发明提供有如下结构的式(I)的雌激素受体调整剂，式中R
文档编号A61K31/35GK1602307SQ02824879
公开日2005年3月30日 申请日期2002年12月12日 优先权日2001年12月13日
发明者R·E·穆肖, R·J·埃德萨尔, S·T·科恩, H·A·哈里斯, J·C·小凯斯, L·M·阿尔伯特 申请人:惠氏公司